Витамин А и реакция матери и ребенка на вакцину против гриппа

Заболеваемость гриппом затрагивает все население и оказывает огромное влияние на экономическое бремя и систему здравоохранения, особенно вызывая серьезные заболевания у детей раннего возраста в возрасте 0–6 месяцев. Недавние исследования показывают высокие показатели заболеваемости гриппом и госпитализации среди младенцев в этой возрастной группе в промышленно развитых странах (Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006), а детская смертность, связанная с гриппом, является самой высокой среди детей раннего возраста в возрасте до 6 месяцев ( Бхат и др., 2005). К сожалению, инактивированная гриппозная вакцина не рекомендуется для этой возрастной группы, но беременным можно делать прививки во 2-3 триместре. Таким образом, стратегия пассивной иммунизации (от матери) детей раннего возраста является эффективным способом борьбы с этой инфекцией среди детей раннего возраста. Этот подход принят в США с 1997 г. и рекомендован ВОЗ с 2005 г.

Верхние дыхательные пути являются воротами проникновения вируса и основным местом репликации (Gluck et al., 1994; Muszkat et al., 2000). Таким образом, наличие эффективных слизистых антител в месте проникновения вируса необходимо для нейтрализации вируса и предотвращения инфекции (Meitin et al., 1994). Секреторный IgA (sIgA) является первичным антителом слизистой оболочки, на его долю приходится около 70% общего количества антител в организме (Brandtzaeg, 1994). Было показано, что sIgA опосредует иммунитет слизистой оболочки носа против гриппа (Renegar & Small, 1991) и, следовательно, указывает на важность стратегии вакцинации, которая запускает выработку специфических антител на поверхности слизистой оболочки, а также на важность пищевых нутриентов для запуска высвобождения нейропептидов слизистой оболочки. необходим для поддержания иммунной системы слизистой оболочки (Renegar et al., 2001). В ряде клинических испытаний изучалось влияние добавок витамина А на показатели иммунитета слизистых оболочек у людей. Прием пищевых добавок беременным женщинам, инфицированным вирусом иммунодефицита человека, связан с улучшением проницаемости кишечника у их детей в возрасте 14 недель, что измеряется тестом выделения лактулозы/маннитола (L/M) с мочой (Filteau et al., 1999). В то время как добавление витамина А во время беременности (Semba et al., 1999) или в раннем послеродовом периоде (Filteau et al., 2001) не оказывает влияния на общее количество sIgA в грудном молоке, было показано, что витамин А в молоке ингибирует рост вирусы как с оболочкой, так и без оболочки (Clarke & May, 2000). Однако общий уровень sIgA у детей с дефицитом витамина А был значительно выше, чем у детей с дефицитом витамина А (Lin et al., 2007). В экспериментальной модели на животных добавление витамина А увеличивает как общее количество, так и антигенспецифических sIgA-содержащих клеток в слизистой оболочке, что, в свою очередь, повышает выживаемость (Nikawa et al., 2001). В раннем младенчестве грудное молоко является преобладающим источником витамина А и На сегодняшний день ни одно исследование не изучает влияние пренатального приема витамина А и вакцинации на вакциноспецифические реакции слизистых оболочек sIgA у потомства. Хотя материнский IgA не передается младенцам трансплацентарно, повышение уровня витамина А и вакциноспецифического sIgA в грудном молоке в результате приема матерью витамина А может усиливать назальные реакции sIgA у младенцев, что, в свою очередь, может обеспечить улучшенную пассивную защиту у детей раннего возраста.

В нашем недавнем исследовании (Проект Mother'SGift, финансируемый Исследовательским фондом Thrasher) мы обнаружили, что вакцинация матери против гриппа может существенно снизить заболеваемость гриппом у младенцев в возрасте до 6 месяцев в Бангладеш (Zaman et al., 2008). С другой стороны, распространенность дефицита витамина А среди беременных женщин в Бангладеш, как и в других развивающихся странах, очень высока. Более половины беременных женщин в Бангладеш потребляют меньше витамина А, чем рекомендуемая диетическая норма, и имеют низкий статус витамина А (ретинол в сыворотке <1,05 мкмоль/л), при этом примерно пятая часть из них классифицируется как дефицит (ретинол в сыворотке <0). •70 мкмоль/л) (Ahmed et al., 2003; Lee et al., 2008). Тем не менее, существуют убедительные научные данные, свидетельствующие о том, что некоторые аспекты как врожденного, так и адаптивного иммунитета скомпрометированы клиническим и субклиническим дефицитом витамина А (Stephensen, 2001). В другом исследовании мы наблюдали значительную положительную связь между первичным вирусом желтой лихорадки, специфическим лимфоцитарным бластогенезом / ответами антител и запасами витамина А в организме (Ahmad et al., 2008). Таким образом, принимая во внимание потенциальную роль витамина А в иммунном регулировании, представляет интерес выяснить, можно ли использовать добавки витамина А для матерей вместе с вакцинацией против гриппа в качестве стратегии вмешательства общественного здравоохранения для одновременной борьбы как с гриппозной инфекцией, так и с дефицитом витамина А среди матерей и молодых людей. младенцев в развивающихся странах.

Дизайн и методы исследования:

Место проведения исследования: Это исследование будет проводиться в ICDDR, B; Дакка, Бангладеш. Три городские родильные дома, расположенные в районе Мирпур города Дакка, будут выбраны для обращения к матерям, которые посещают клинику в первом триместре и проживают в близлежащем сообществе.

Предмет исследования: критерием включения является зачисление матерей в начале второго триместра (т.е. срок беременности примерно 12 недель), желающие оставаться в Дакке во время беременности и желающие госпитализироваться в роддоме. Гестационный возраст будет определяться по самооценке LMP, которая, вероятно, в большинстве случаев недооценивается. В этом предлагаемом исследовании допустим двухнедельный вариант. Критериями исключения являются: история системных заболеваний, предыдущие осложненные беременности или преждевременные роды, аборт, врожденная аномалия и повышенная чувствительность к противогриппозной вакцине или получению вакцины.

Обзор дизайна эксперимента: Это плацебо-контролируемое, двойное слепое и рандомизированное исследование. Общий дизайн исследования показан на рисунке 1, а временная шкала и гипотетическая продолжительность мероприятий, связанных с предлагаемым протоколом, показаны в таблице 1. Чтобы обеспечить планирование сбора, хранения и анализа образцов с учетом количества нанятых полевых помощников и лабораторных помещений, которые будут доступны, мы планируем включать в это исследование примерно пять беременных женщин в неделю в течение первых трех месяцев исследования ( Таблица 1). Информированное письменное согласие будет получено от матерей. Шестьдесят шесть беременных женщин будут рандомизированы для приема еженедельно 10 000 МЕ витамина А или капсул плацебо (кукурузного масла), и кровь будет собираться для оценки уровня витамина А в сыворотке. Рандомизация будет стратифицирована по трем клиникам с использованием схемы сбалансированных блоков. Эта еженедельная добавка будет продолжаться до 6 месяцев после родов. Добавочная доза витамина А, используемая в этом исследовании, аналогична дозам, используемым беременными женщинами еженедельно в других исследованиях (Semba et al., 1999; Cox et al., 2006), и показала свою безопасность. Полевые работники лично доставят добавки матерям и будут непосредственно наблюдать за их потреблением. На 26-28 неделе беременности всем матерям вводят инактивированную трехвалентную вакцину против вируса гриппа (GlaxoSmithKline; Дрезден, Германия). Стандартные инактивированные трехвалентные штаммы гриппа A/H3N2, A/H1N1 и B, рекомендованные ВОЗ для Северного полушария, будут получены для этого проекта из коммерческих источников. Врач-исследователь будет вводить вакцину внутримышечно. При родах берут пуповинную кровь и молозиво для оценки специфических IgG и sIgA к гриппу соответственно, а также концентрации витамина А. Вес при рождении и рост новорожденных также будут зарегистрированы. В возрасте 6 месяцев грудное молоко будет собираться для оценки витамина А и специфического IgA к вирусу гриппа, а венозная кровь (2-3 мл) у младенцев (в возрасте 6 месяцев) будет получена для оценки витамина А и специфического IgG к вирусу гриппа. в качестве смывов из носа младенцев для оценки специфического sIgA к вирусу гриппа. Предлагаемое нами исследование не помешает существующей дородовой помощи матерям, такой как добавка фолиевой кислоты/железа или существующая программа вакцинации младенцев в Бангладеш.

Рандомизация: каждой матери будет присвоен уникальный случайно сгенерированный идентификационный номер, который будет указывать на исследовательскую группу, к которой она относится. Тот же идентификатор будет указан на бутылке, содержащей 60 капсул. Выездные работники будут использовать эти капсулы для еженедельного докорма, следя за тем, чтобы идентификационный номер матери и идентификационный номер бутылочки совпадали. Третья сторона (лаборатории ACME, Дакка, Бангладеш) подготовит и поставит капсулы с витамином А или плацебо в бутылках, помеченных идентификационными номерами из списка номеров. Ответственный персонал сохранит конфиденциальность до конца обучения

Сбор проб: Периферическая кровь матери, пуповинная кровь, молозиво, грудное молоко, периферическая кровь и смывы из носа у младенцев будут собираться, как описано на рисунке 1. Назальный секрет будет получен путем введения фитилей (хлопковых аппликаторов) в ноздрю и осторожного вращения в течение 90 с, как описано ранее (Wright et al., 1996). Фитили экстрагируют в 1 мл PBS, центрифугируют и собирают супернатанты. Все образцы будут заморожены до одновременного тестирования.

Серологическая оценка: мы решили исследовать гуморальный иммунный ответ только на один антиген гриппа, потому что цель этого предлагаемого исследования состоит в том, чтобы оценить влияние добавок витамина А матерью на уровни пассивных антител у младенцев, поэтому целесообразно исследовать иммунные ответы. к одному антигену. Будут проверены следующие параметры витамина А и специфического гуморального иммунитета против гриппа А.

Оценка содержания витамина А: Содержание витамина А в плазме, сыворотке, молозиве и грудном молоке будет измеряться стандартным методом ВЭЖХ в лаборатории биохимии питания LSD.

Реакция ингибирования гемагглютинации [HAI]: Титры антител HAI будут измеряться с помощью стандартного микротитровального анализа (Admon et al., 1997). 12 единиц НА выбранного штамма вакцины против гриппа А будут добавлены к разбавленной предварительно обработанной сыворотке ферментом, разрушающим рецептор (RDE, Sigma MO), и инактивацией нагреванием. После инкубации добавляют отмытые куриные эритроциты до тех пор, пока не произойдет седиментация в контрольных лунках. Титр HAI является обратным значением самого высокого разведения сыворотки, проявляющего полный HAI.

ELISA, специфичные к гриппу IgG и sIgA: IgG, специфические к вирусу гриппа A, в сыворотке/плазме и sIgA в молозиве, грудном молоке и мазках из носа младенцев будут анализироваться с помощью ELISA, как описано ранее, с небольшими изменениями (Bruhl et al., 2000; Greenbaum et al. ., 2004). Вкратце, иммунопланшеты покрывают очищенным антигеном гриппа, полученным из NIBSC, в концентрации 2 мкг/мл на ночь при 40°С. а затем будут добавлены разбавленные образцы для еще одной инкубации в течение ночи. В качестве конъюгатов будут использоваться HRP-конъюгированные античеловеческие IgG (BD-Pharmingen, CA) или мышиные анти-sIgA, меченные пероксидазой (Alpco Diagnostics, NH). Чтобы построить стандартную кривую, в каждый планшет для ELISA будет введено серийное разведение объединенных образцов с произвольным значением. Общее количество sIgA в молозиве, грудном молоке и мазке из носа младенцев также будет определяться с помощью набора для ИФА (Alpco Diagnostics) для корректировки специфического ответа sIgA на грипп А по отношению к общей секреции sIgA.