Vitamine A en maternale-kind griepvaccinrespons

Influenza-morbiditeit treft de hele bevolking en heeft een enorme impact op de economische last en het gezondheidszorgsysteem, en veroorzaakt met name ernstige ziekte bij jonge baby's van 0-6 maanden oud. Recente studies tonen hoge percentages griepziekte en ziekenhuisopname aan bij zuigelingen in deze leeftijdsgroep in geïndustrialiseerde landen (Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006) en aan griep gerelateerde kindersterfte is het hoogst bij jonge zuigelingen vóór de leeftijd van 6 maanden ( Bhat et al., 2005). Helaas wordt geïnactiveerd griepvaccin niet aanbevolen voor deze leeftijdsgroep, maar zwangere vrouwen kunnen tijdens het 2e - 3e trimester worden gevaccineerd. De strategie van passieve immunisatie (van de moeder) van zuigelingen is dus de effectieve manier om deze infectie bij jonge zuigelingen te bestrijden. Deze benadering wordt sinds 1997 in de VS toegepast en sinds 2005 aanbevolen door de WHO.

De bovenste luchtwegen zijn het portaal waar het virus binnendringt en de primaire plaats van replicatie (Gluck et al., 1994; Muszkat et al., 2000). Het belang van de aanwezigheid van effectieve mucosale antilichamen op de ingangsplaats van het virus is dus essentieel om het virus te neutraliseren en infectie te voorkomen (Meitin et al., 1994). Secretoir IgA (sIgA) is het primaire mucosale antilichaam, goed voor ~70% van de totale antilichaamproductie van het lichaam (Brandtzaeg, 1994). Van sIgA is aangetoond dat het de nasale anti-influenza mucosale immuniteit medieert (Renegar & Small, 1991) en geeft daarom het belang aan van vaccinatiestrategieën die specifieke antilichaamproductie op mucosale oppervlakken veroorzaken, evenals het belang van voedingsvoedingsstoffen om de afgifte van mucosale neuropeptiden te activeren noodzakelijk voor het behoud van het mucosale immuunsysteem (Renegar et al., 2001). Een aantal klinische onderzoeken onderzocht het effect van vitamine A-suppletie bij mensen op indicatoren van mucosale immuniteit. Suppletie van met het humaan immunodeficiëntievirus geïnfecteerde zwangere vrouwen wordt in verband gebracht met een verbeterde darmpermeabiliteit bij hun baby's na 14 weken, zoals gemeten door lactulose/mannitol (L/M) urinaire excretietest (Filteau et al., 1999). Hoewel vitamine A-suppletie tijdens de zwangerschap (Semba et al., 1999) of de vroege periode na de bevalling (Filteau et al., 2001) geen effect heeft op het totale sIgA-gehalte in de moedermelk, is eerder aangetoond dat vitamine A in melk de groei van zowel omhulde als niet-omhulde virussen (Clarke & May, 2000). Het totale sIgA-gehalte van kinderen met vitamine A-deficiëntie is echter aanzienlijk hoger gedetecteerd dan dat van kinderen met vitamine A-deficiëntie (Lin et al., 2007). In diermodellen verhoogt vitamine A-suppletie zowel het totale als antigeenspecifieke sIgA-bevattende cellen in het slijmvlies, wat op zijn beurt de overlevingskans verbetert (Nikawa et al., 2001). Tijdens de vroege kinderjaren is moedermelk de belangrijkste bron van vitamine A en datum geen enkele studie onderzoekt het effect van prenatale vitamine A-suppletie en vaccinatie op de vaccinspecifieke mucosale sIgA-responsen bij nakomelingen. Hoewel maternale IgA niet via de placenta wordt overgedragen op de baby, kan een verhoogde vitamine A en vaccinspecifieke sIgA in de moedermelk als gevolg van maternale vitamine A-suppletie de nasale sIgA-responsen van de baby versterken, wat op zijn beurt een verbeterde passieve bescherming bij jonge baby's kan bieden.

In onze recente studie (Mother'SGift Project, gefinancierd door het Thrasher Research Fund) hebben we ontdekt dat maternale griepvaccinatie griepziekte aanzienlijk kan verminderen bij jonge baby's tot 6 maanden oud in Bangladesh (Zaman et al., 2008). Aan de andere kant is de prevalentie van vitamine A-tekort onder zwangere vrouwen in Bangladesh en in andere ontwikkelingslanden zeer hoog. Meer dan de helft van de zwangere vrouwen in Bangladesh consumeert minder vitamine A dan de aanbevolen dagelijkse hoeveelheid en heeft een lage vitamine A-status (serum retinol <1•05 μmol/L). •70 μmol/L) (Ahmed et al., 2003; Lee et al., 2008). Desalniettemin is er overtuigend wetenschappelijk bewijs dat suggereert dat verschillende aspecten van zowel aangeboren als adaptieve immuniteit worden aangetast door klinische en subklinische vitamine A-deficiëntie (Stephensen, 2001). In een ander onderzoek hebben we een significant positief verband waargenomen tussen primaire gelekoortsvirusvaccinspecifieke lymfocytblastogenese/antilichaamresponsen en vitamine A-voorraad in het lichaam (Ahmad et al., 2008). Met het oog op de mogelijke immuunregulerende rol van vitamine A, is het dus interessant om te onderzoeken of vitamine A-suppletie door de moeder samen met griepvaccinatie kan worden gebruikt als interventiestrategie voor de volksgezondheid om tegelijkertijd zowel griepinfectie als vitamine A-tekort bij moeders en jongeren te bestrijden. zuigelingen in ontwikkelingslanden.

Onderzoeksontwerp en methoden:

Studieplaats: deze studie zal worden uitgevoerd bij ICDDR,B; Dhaka, Bangladesh. Drie stedelijke kraamklinieken in het Mirpur-gebied van de stad Dhaka zullen worden geselecteerd voor naderende moeders die de kliniek in het eerste trimester bezoeken en die de residentie zijn van de nabijgelegen gemeenschap.

Studieonderwerp: Het inclusiecriterium is om moeders in te schrijven aan het begin van het tweede trimester (d.w.z. zwangerschapsduur van ongeveer 12 weken), bereid om tijdens de zwangerschap in Dhaka te blijven en bij de bevalling in de kliniek te worden opgenomen. De zwangerschapsduur wordt bepaald door zelfgerapporteerde LMP, die in de meeste gevallen waarschijnlijk wordt onderschat. Een variatie van twee weken is acceptabel in dit voorgestelde onderzoek. De uitsluitingscriteria zijn: voorgeschiedenis van systemische ziekte, eerdere gecompliceerde zwangerschappen of vroeggeboorte, abortus, aangeboren afwijking en overgevoeligheid voor griepvaccin of ontvangst van het vaccin.

Overzicht van experimenteel ontwerp: dit is een placebogecontroleerde, dubbelblinde en gerandomiseerde studie. Het algemene onderzoeksontwerp wordt geschetst in figuur 1, tijdlijn en hypothetische duur van de voorgestelde protocolgerelateerde activiteiten worden geïllustreerd in tabel 1. Om planning van de monsterverzameling, opslag en analyse mogelijk te maken met het aantal ingehuurde veldmedewerkers en laboratoriumfaciliteiten die beschikbaar zullen zijn, zijn we van plan om ongeveer vijf zwangere moeders per week in deze studie op te nemen in de eerste periode van drie maanden van de studie ( Tafel 1). Geïnformeerde schriftelijke toestemming zal worden verkregen van de moeders. Zesenzestig zwangere vrouwen zullen gerandomiseerd worden om wekelijks 10.000 IE vitamine A of placebo (maïsolie) capsules te krijgen en er zal bloed worden verzameld voor serum vitamine A-beoordeling. Randomisatie zal worden gestratificeerd door drie klinieken met behulp van een gebalanceerd blokontwerp. Deze wekelijkse suppletie gaat door tot 6 maanden na de bevalling. De aanvullende vitamine A-dosis die in dit onderzoek moet worden gebruikt, is vergelijkbaar met de doses die wekelijks bij zwangere vrouwen in andere onderzoeken worden gebruikt (Semba et al., 1999; Cox et al., 2006) en waarvan is aangetoond dat ze veilig zijn. Veldwerkers leveren de supplementen persoonlijk aan moeders en observeren direct hun consumptie. Na 26-28 weken zwangerschap krijgen alle moeders een geïnactiveerd, trivalent griepvirusvaccin (GlaxoSmithKline; Dresden, Duitsland). Standaard geïnactiveerde trivalente influenza A/H3N2-, A/H1N1- en B-stammen, zoals aanbevolen door de WHO voor het noordelijk halfrond, zullen voor dit project worden verkregen uit commerciële bronnen. De onderzoeksarts zal het vaccin intramusculair toedienen. Bij de bevalling worden navelstrengbloed en colostrum afgenomen voor respectievelijk Influenza-specifieke IgG- en sIgA-bepaling en vitamine A-concentratie. Ook het geboortegewicht en de lengte van de pasgeboren baby's worden geregistreerd. Na 6 maanden wordt moedermelk verzameld voor vitamine A- en influenzavirusspecifieke sIgA-beoordeling en veneus bloed (2-3 ml) van baby's (6 maanden oud) zal ook worden verkregen voor vitamine A- en influenzavirusspecifieke IgG-beoordeling als nasale spoelingen voor baby's voor influenzavirusspecifieke sIgA-beoordeling. Ons voorgestelde onderzoek zal de bestaande prenatale zorg voor de moeders, zoals foliumzuur/ijzersupplementen of het bestaande vaccinatieprogramma voor zuigelingen in Bangladesh, niet belemmeren.

Randomisatie: elke moeder krijgt een uniek, willekeurig gegenereerd identificatienummer, dat aangeeft in welke onderzoeksgroep ze is ingedeeld. Dezelfde ID wordt vermeld op de fles met 60 capsules. Veldmedewerkers zullen deze capsules gebruiken voor wekelijkse suppletie en ervoor zorgen dat het ID-nummer van de moeder en het fles-ID hetzelfde zijn. Een derde partij (ACME-laboratoria, Dhaka Bangladesh) zal vitamine A- of placebo-capsules in flessen bereiden en leveren, gelabeld met ID-nummers uit een lijst met nummers. Het verantwoordelijke personeel zal het vertrouwelijk houden tot het einde van de studie

Monsterafname: perifeer bloed van de moeder, navelstrengbloed, colostrum, moedermelk, perifeer bloed en neusspoelingen van baby's worden verzameld zoals beschreven in figuur 1. Neusafscheidingen worden verkregen door lonten (katoenen applicators) in het neusgat te brengen en gedurende 90 seconden zachtjes rond te draaien, zoals eerder beschreven (Wright et al., 1996). De lonten worden geëxtraheerd in 1 ml PBS, gecentrifugeerd en de supernatanten worden verzameld. Alle monsters worden ingevroren totdat ze gelijktijdig worden getest.

Serologische evaluatie: we hebben ervoor gekozen om de humorale immuunresponsen alleen op één influenza-antigeen te onderzoeken, omdat het doel van deze voorgestelde studie is om het effect van vitamine A-suppletie door de moeder op de passieve antilichaamniveaus van de baby te evalueren, dus het is verstandig om de immuunresponsen te onderzoeken. tot één antigeen. De volgende parameters van vitamine A en Influenza A specifieke humorale immuniteit zullen worden getest.

Vitamine A-beoordeling: Het vitamine A-gehalte in plasma, serum, colostrum en moedermelk wordt gemeten met de standaard HPLC-methode die wordt toegepast in het Nutritional Biochemistry Lab van LSD.

Hemagglutinatie-remmingstest [HAI]: HAI-antilichaamtiters zullen worden gemeten met een standaard microtiterassay (Admon et al., 1997). 12 HA-eenheden van de geselecteerde Influenza A-vaccinstam zullen worden toegevoegd aan verdunde voorbehandelde sera met receptorvernietigend enzym (RDE, Sigma MO) en warmte-inactivatie. Na incubatie worden gewassen erytrocyten van kippen toegevoegd totdat sedimentatie optreedt in de controleputjes. HAI-titer is het omgekeerde van de hoogste verdunning van serum dat volledige HAI vertoont.

Influenza-specifiek IgG en sIgA ELISA: Influenzavirus Een specifiek IgG in serum/plasma en sIgA in colostrum, moedermelk en neusuitstrijkje voor baby's zullen worden geanalyseerd door ELISA zoals eerder beschreven met kleine aanpassingen (Bruhl et al., 2000; Greenbaum et al. ., 2004). In het kort zullen immunoplaten worden gecoat met gezuiverd influenza-antigeen verkregen van NIBSC bij 2 ug/ml gedurende de nacht bij 40°C. en dan zullen verdunde monsters worden toegevoegd voor nog een nachtelijke incubatie. HRP-geconjugeerd anti-humaan IgG (BD-Pharmingen, CA) of muizen-anti-sIgA, met peroxidase gemerkt (Alpco Diagnostics, NH) zullen als conjugaten worden gebruikt. Om een ​​standaardcurve te construeren, wordt in elke ELISA-plaat een seriële verdunning van samengevoegde monsters met een willekeurige waarde geïntroduceerd. Het totale sIgA-gehalte in colostrum, moedermelk en neusuitstrijkjes voor baby's zal ook worden bepaald met een EIA-kit (Alpco Diagnostics) om de specifieke sIgA-respons voor influenza A aan te passen met betrekking tot de algehele sIgA-secretie.