A-vitamiini ja äidin ja lapsen influenssarokotevaste

Influenssasairaus vaikuttaa koko väestöön ja sillä on valtava vaikutus taloudelliseen taakkaan ja terveydenhuoltojärjestelmään, aiheuttaen erityisesti vakavia sairauksia 0-6 kuukauden ikäisille vauvoille. Viimeaikaiset tutkimukset osoittavat, että influenssasairaus ja sairaalahoito on korkea tässä ikäryhmässä teollisuusmaissa (Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006), ja influenssaan liittyvä lapsuuskuolleisuus on korkein nuorilla alle 6 kuukauden ikäisillä. Bhat et ai., 2005). Valitettavasti inaktivoitua influenssarokotetta ei suositella tälle ikäryhmälle, mutta raskaana olevat naiset voidaan rokottaa 2.-3. kolmanneksen aikana. Siten imeväisten passiivinen immunisointi (äidiltä) on tehokas tapa torjua tätä infektiota pienten imeväisten keskuudessa. Tämä lähestymistapa on otettu käyttöön Yhdysvalloissa vuodesta 1997 ja WHO:n suosittelema vuodesta 2005.

Ylempi hengitystie on viruksen sisäänpääsyportaali ja ensisijainen replikaation paikka (Gluck et ai., 1994; Muszkat et ai., 2000). Siten tehokkaiden limakalvovasta-aineiden läsnäolon merkitys viruksen sisääntulokohdassa on olennaista viruksen neutraloimiseksi ja infektion estämiseksi (Meitin et ai., 1994). Erittävä IgA (sIgA) on ensisijainen limakalvovasta-aine, jonka osuus elimistön kokonaisvasta-ainetuotannosta on noin 70 % (Brandtzaeg, 1994). sIgA:n on osoitettu välittävän nenän influenssan vastaista limakalvon immuniteettia (Renegar & Small, 1991) ja osoittaa siksi sellaisten rokotusstrategioiden tärkeyden, jotka laukaisevat spesifisen vasta-aineen tuotannon limakalvon pinnoilla sekä ravinnon ravintoaineiden tärkeyden limakalvon neuropeptidien vapautumisen laukaisemiseksi. välttämätön limakalvon immuunijärjestelmän ylläpitämiseksi (Renegar et ai., 2001). Useissa kliinisissä tutkimuksissa tutkittiin A-vitamiinilisän vaikutusta ihmisillä limakalvojen immuniteetin indikaattoreihin. Ihmisen immuunikatoviruksen infektoimien raskaana olevien naisten täydentäminen liittyy parantuneeseen suolen läpäisevyyteen heidän imeväisillä 14 viikon kohdalla mitattuna laktuloosin/mannitolin (L/M) virtsan erittymistestillä (Filteau et ai., 1999). Vaikka A-vitamiinin lisäyksellä raskauden aikana (Semba et al., 1999) tai varhaisen synnytyksen jälkeisellä kaudella (Filteau et al., 2001) ei ole vaikutusta rintamaidon kokonaissIgA:han, maidossa olevan A-vitamiinin on osoitettu estävän rintamaidon kasvua. sekä vaipallisia että vaipattomia viruksia (Clarke & May, 2000). A-vitamiinia saaneiden lasten kokonaissIgA-taso on kuitenkin havaittu merkittävästi korkeampi kuin A-vitamiinin puutteesta kärsivien lasten (Lin et al., 2007). Eläinmallissa A-vitamiinilisä lisää sekä kokonais- että antigeenispesifisiä sIgA:ta sisältäviä soluja limakalvossa, mikä puolestaan ​​parantaa eloonjäämisprosenttia (Nikawa et al., 2001) Varhaislapsuudessa rintamaito on A-vitamiinin pääasiallinen lähde ja päivään mennessä mikään tutkimus ei tutki synnytystä edeltävän A-vitamiinilisän ja rokotusten vaikutusta rokotespesifisiin limakalvon sIgA-vasteisiin jälkeläisillä. Vaikka äidin IgA ei siirry istukan kautta imeväisiin, mutta A-vitamiinin ja rokotespesifisen sIgA:n lisääntyminen äidinmaidossa A-vitamiinilisän seurauksena voi tehostaa lapsen nenän sIgA-vasteita, mikä puolestaan ​​voi tarjota parantuneen passiivisen suojan nuorille imeväisille.

Äskettäisessä tutkimuksessamme (Thrasher Research Fundin rahoittama Mother'SGift Project) olemme havainneet, että äidin influenssarokote voi vähentää merkittävästi influenssasairautta alle 6 kuukauden ikäisillä vauvoilla Bangladeshissa (Zaman et al., 2008). Toisaalta A-vitamiinin puutteen esiintyvyys raskaana olevien naisten keskuudessa Bangladeshissa ja muissa kehitysmaissa on erittäin korkea. Yli puolet Bangladeshissa olevista raskaana olevista naisista kuluttaa vähemmän A-vitamiinia kuin suositeltu ravintomäärä ja heillä on alhainen A-vitamiinistatus (seerumin retinoli <1•05 μmol/L), ja noin viidesosa heistä luokitellaan puutteelliseksi (seerumin retinoli < 0). •70 μmol/L) (Ahmed et al., 2003; Lee et al., 2008). Siitä huolimatta on olemassa vakuuttavia tieteellisiä todisteita, jotka viittaavat siihen, että kliinisen ja subkliinisen A-vitamiinin puutos heikentää useita sekä synnynnäisen että adaptiivisen immuniteetin näkökohtia (Stephensen, 2001). Toisessa tutkimuksessa havaitsimme merkittävän positiivisen yhteyden primaarisen keltakuumerokotteen virusspesifisen lymfosyyttiblastogeneesin/vasta-ainevasteiden ja kehon A-vitamiinivarastojen välillä (Ahmad et al., 2008). Näin ollen A-vitamiinin mahdollisten immuunisäätelyroolien vuoksi on mielenkiintoista tutkia, voitaisiinko äidin A-vitamiinilisää yhdessä influenssarokotuksen kanssa käyttää kansanterveyden interventiostrategiana sekä influenssainfektion että A-vitamiinin puutteen torjumiseksi samanaikaisesti äitien ja nuorten keskuudessa. pikkulapsille kehitysmaissa.

Tutkimussuunnittelu ja menetelmät:

Tutkimuspaikka: Tämä tutkimus suoritetaan ICDDR,B:ssä; Dhaka, Bangladesh. Kolme Dhakan kaupungin Mirpurin alueella sijaitsevaa urbaania äitiysklinikkaa valitaan äideille, jotka vierailevat klinikalla ensimmäisen raskauskolmanneksen aikana ja jotka ovat lähiyhteisön asuinpaikka.

Tutkimusaihe: Osallistumiskriteeri on ottaa äidit mukaan toisen raskauskolmanneksen alussa (ts. noin 12 raskausviikkoa), on valmis oleskelemaan Dhakassa raskauden aikana ja suostumaan sairaalaan synnytyksen yhteydessä. Raskausiän määrittää itse ilmoittama LMP, joka on todennäköisesti aliarvioitu useimmissa tapauksissa. Kahden viikon vaihtelu on hyväksyttävä tässä ehdotetussa tutkimuksessa. Poissulkemiskriteerit ovat: systeeminen sairaus, aiemmat monimutkaiset raskaudet tai ennenaikainen synnytys, abortti, synnynnäinen poikkeavuus ja yliherkkyys influenssarokotteelle tai rokotteen saaminen.

Yleiskatsaus kokeelliseen suunnitteluun: Tämä on lumekontrolloitu, kaksoisnaamioinen ja satunnaistettu tutkimus. Kokonaistutkimuksen suunnittelu on esitetty kuvassa 1, aikajana ja ehdotettujen protokollaan liittyvien toimintojen hypoteettinen kesto on kuvattu taulukossa 1. Jotta näytteenoton, varastoinnin ja määrityksen ajoittaminen olisi mahdollista palkattujen kenttähoitajien ja käytettävissä olevien laboratoriotilojen lukumäärän mukaan, aiomme ottaa tähän tutkimukseen noin viisi raskaana olevaa äitiä viikossa tutkimuksen ensimmäisen kolmen kuukauden aikana ( Pöytä 1). Ilmoitettu kirjallinen suostumus hankitaan äideiltä. Kuusikymmentäkuusi raskaana olevaa naista satunnaistetaan saamaan joko viikoittain 10 000 IU A-vitamiinia tai lumelääkettä (maissiöljyä) ja verta kerätään seerumin A-vitamiinin arviointia varten. Satunnaistaminen ositetaan kolmella klinikalla käyttämällä tasapainoista lohkosuunnittelua. Tämä viikoittainen lisäravinne jatkuu 6 kuukautta synnytyksen jälkeen. Tässä tutkimuksessa käytettävä täydentävä A-vitamiiniannos on samanlainen kuin muissa tutkimuksissa raskaana oleville naisille viikoittain käytetyt annokset (Semba et al., 1999; Cox et al., 2006) ja osoitettu olevan turvallinen. Kenttätyöntekijät toimittavat lisäravinteet äideille henkilökohtaisesti ja seuraavat suoraan niiden kulutusta. 26-28 raskausviikolla kaikki äidit saavat inaktivoidun, kolmiarvoisen influenssavirusrokotteen (GlaxoSmithKline; Dresden, Saksa). Standardit inaktivoidut trivalenttiset influenssa A/H3N2-, A/H1N1- ja B-kannat WHO:n pohjoiselle pallonpuoliskolle suosittelemalla tavalla hankitaan kaupallisista lähteistä tätä hanketta varten. Tutkimuslääkäri antaa rokotteen lihakseen. Synnytyksen yhteydessä napanuoraverta ja ternimaitoa kerätään influenssaspesifisen IgG:n ja sIgA:n sekä A-vitamiinipitoisuuden arvioimiseksi. Myös vastasyntyneiden syntymäpaino ja pituus kirjataan. Kuuden kuukauden iässä rintamaito kerätään A-vitamiini- ja influenssavirusspesifisen sIgA-arviointiin ja laskimoverta (2-3 ml) vauvoilta (6 kk) otetaan myös A-vitamiini- ja influenssavirusspesifisen IgG-mittaukseen. vauvojen nenän pesuna influenssaviruksen spesifisen sIgA:n arvioimiseksi. Ehdottamamme tutkimuksemme ei haittaa olemassa olevaa äitien synnytystä edeltävää hoitoa, kuten folaatti-/rautalisää tai olemassa olevaa vauvojen rokotusohjelmaa Bangladeshissa.

Satunnaistaminen: Jokaiselle äidille annetaan yksilöllinen satunnaisesti luotu tunnistenumero, joka osoittaa, mihin tutkimusryhmään hänet on määrätty. Sama tunnus on merkitty 60 kapselia sisältävään pulloon. Kenttähoitajat käyttävät näitä kapseleita viikoittaiseen lisäravinteeseen varmistaakseen, että äidin tunnusnumero ja pullon tunnus ovat samat. Kolmas osapuoli (ACME-laboratoriot, Dhaka Bangladesh) valmistaa ja toimittaa A-vitamiini- tai lumelääkekapselin pulloissa, jotka on merkitty numeroluettelon tunnistenumeroilla. Vastuuhenkilöstö pitää sen luottamuksellisina opintojen loppuun asti

Näytteenotto: Äidin ääreisveri, napanuoraveri, ternimaito, rintamaito, perifeerinen veri ja imeväisten nenän huuhteluvedet kerätään kuvan 1 mukaisesti. Nenäeritteitä saadaan viemällä sydämet (puuvillaapplikaattorit) sieraimeen ja pyörittämällä niitä varovasti 90 sekunnin ajan, kuten aiemmin on kuvattu (Wright et ai., 1996). Sydänsydämet uutetaan 1 ml:aan PBS:ää, sentrifugoidaan ja supernatantit kerätään. Kaikki näytteet pakastetaan, kunnes ne testataan samanaikaisesti.

Serologinen arviointi: Olemme päättäneet tutkia humoraalisia immuunivasteita vain yhdelle influenssaantigeenille, koska tämän ehdotetun tutkimuksen tarkoituksena on arvioida äidin A-vitamiinilisän vaikutusta imeväisten passiivisiin vasta-ainetasoihin, joten immuunivasteita on järkevää tutkia. yhteen antigeeniin. Seuraavat A-vitamiini- ja influenssa A-spesifisen humoraalisen immuniteetin parametrit testataan.

A-vitamiinin arviointi: Plasman, seerumin, ternimaidon ja rintamaidon A-vitamiinipitoisuus mitataan standardinmukaisella HPLC-menetelmällä, joka on käytössä LSD:n Nutritional Biochemistry Lab -laboratoriossa.

Hemagglutinaation estotesti [HAI]: HAI-vasta-ainetiitterit mitataan tavanomaisella mikrotiitterimäärityksellä (Admon et ai., 1997). 12 HA-yksikköä valitusta influenssa A -rokotekannasta lisätään laimennettuihin esikäsiteltyihin seerumeihin, joissa on reseptoria tuhoava entsyymi (RDE, Sigma MO) ja lämpöinaktivointi. Inkuboinnin jälkeen lisätään pestyjä kanan punasoluja, kunnes sedimentaatio tapahtuu kontrollikuopissa. HAI-tiitteri on käänteinen seerumin korkeimmalle laimennokselle, jossa on täydellinen HAI.

Influenssaspesifinen IgG ja sIgA ELISA: Influenssavirus Spesifinen IgG seerumissa/plasmassa ja sIgA ternimaidossa, rintamaidossa ja imeväisten nenäpuikolla analysoidaan ELISA:lla, kuten aiemmin on kuvattu pienin muutoksin (Bruhl et al., 2000; Greenbaum et al. ., 2004). Lyhyesti immunolevyt päällystetään puhdistetulla influenssaantigeenillä, joka on saatu NIBSC:stä pitoisuudella 2 ug/ml yön yli 40 °C:ssa. ja sitten laimennetut näytteet lisätään toista yön yli tapahtuvaa inkubaatiota varten. HRP-konjugoitua anti-ihmisen IgG:tä (BD-Pharmingen, CA) tai hiiren anti-sIgA:ta, peroksidaasileimattua (Alpco Diagnostics, NH) käytetään konjugaatteina. Standardikäyrän muodostamiseksi jokaiselle ELISA-levylle lisätään sarjalaimennos yhdistetyistä näytteistä, joille on annettu mielivaltainen arvo. Ternimaidon, rintamaidon ja pikkulasten nenäpuikkonäytteen kokonaissIgA määritetään myös EIA-pakkauksella (Alpco Diagnostics) influenssa A -spesifisen sIgA-vasteen säätämiseksi suhteessa sIgA:n kokonaiseritykseen.