ビタミン A と母子インフルエンザワクチンの反応

インフルエンザの罹患率は人口全体に影響を及ぼし、経済的負担と医療制度に多大な影響を及ぼし、特に生後 0 ～ 6 か月の幼児に重篤な病気を引き起こします。 最近の研究では、先進国ではこの年齢層の乳児のインフルエンザ罹患率と入院率が高く(Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006)、インフルエンザ関連の小児死亡率は生後6か月未満の幼児で最も高いことが示されている( Bhat et al.、2005)。 残念ながら、この年齢層には不活化インフルエンザワクチンは推奨されませんが、妊娠中の女性は妊娠第2～第3トリメスター中にワクチン接種を受けることができます。 したがって、乳児への（母親からの）受動免疫戦略は、幼児のこの感染症と闘う効果的な方法です。 このアプローチは 1997 年から米国で採用され、2005 年から WHO によって推奨されています。

上気道はウイルス侵入の入り口であり、複製の主要な部位である（Gluck et al., 1994; Muszkat et al., 2000）。 したがって、ウイルスを中和して感染を防ぐためには、ウイルスの侵入部位に有効な粘膜抗体が存在することが重要である(Meitin et al., 1994)。 分泌型 IgA (sIgA) は一次粘膜抗体であり、体の総抗体産生の約 70% を占めます (Brandtzaeg、1994)。 sIgA は、鼻の抗インフルエンザ粘膜免疫を媒介することが示されており (Renegar & Small、1991)、したがって、粘膜表面での特異的抗体産生を引き起こすワクチン接種戦略の重要性と、粘膜神経ペプチドの放出を引き起こす食事栄養素の重要性を示しています。粘膜免疫系の維持に必要である(Renegar et al., 2001)。 多くの臨床試験では、ヒトにおけるビタミン A 補給が粘膜免疫の指標に及ぼす影響を調査しました。 ラクツロース/マンニトール（L/M）尿中排泄検査で測定したところ、ヒト免疫不全ウイルスに感染した妊婦へのサプリメント補給は、生後14週の乳児の腸管透過性の改善と関連している（Filteau et al., 1999）。 妊娠中（Semba et al., 1999）または産後初期（Filteau et al., 2001）のビタミンA補給は母乳中の総sIgAには影響を示さないが、むしろ母乳中のビタミンAが母乳の成長を阻害することが示されている。エンベロープを持つウイルスとエンベロープのないウイルスの両方 (Clarke & May、2000)。 しかし、ビタミン A が十分な子供の総 sIgA レベルは、ビタミン A 欠乏の子供よりも著しく高いことが検出されています (Lin et al., 2007)。 動物モデルでは、ビタミン A の補給により、粘膜内の総 sIgA 含有細胞と抗原特異的 sIgA 含有細胞の両方が増加し、生存率が向上します (Nikawa et al., 2001)。乳児期初期には母乳がビタミン A の主な供給源であり、出生前のビタミン A 補給とワクチン接種が、子のワクチン特異的粘膜 sIgA 反応に及ぼす影響を調査した研究は現在まで存在していません。 母親の IgA は胎盤を経て乳児に移行しませんが、母親のビタミン A 補給の結果として母乳中のビタミン A およびワクチン特異的 sIgA が増加すると、乳児の鼻 sIgA 反応が増強され、それが結果的に幼い乳児の受動的防御を改善する可能性があります。

私たちの最近の研究 (Thrasher Research Fund の資金提供による Mother'S Gift Project) では、母親のインフルエンザワクチン接種がバングラデシュの生後 6 か月までの幼児のインフルエンザ疾患を大幅に減少させることができることを発見しました (Zaman et al., 2008)。 一方で、バングラデシュや他の発展途上国では、妊婦のビタミンA欠乏症の有病率が非常に高い。 バングラデシュの妊婦の半数以上は、推奨される食事許容量よりもビタミン A の摂取量が少なく、ビタミン A の状態が低く（血清レチノール <1・05 μmol/L）、その約 5 分の 1 が欠乏症（血清レチノール <0）と分類されています。 •70 μmol/L) (Ahmed et al., 2003; Lee et al., 2008)。 それにもかかわらず、自然免疫と適応免疫の両方のいくつかの側面が、臨床的および潜在的なビタミン A 欠乏症によって損なわれることを示唆する決定的な科学的証拠があります (Stephensen、2001)。 別の研究では、一次黄熱ウイルスワクチン特異的リンパ球の胚形成/抗体反応と体内のビタミンA貯蔵量との間に有意な正の関連性が観察された(Ahmad et al., 2008)。 したがって、ビタミン A の潜在的な免疫調節役割を考慮すると、母親と若者の間でインフルエンザ感染とビタミン A 欠乏症の両方に同時に対処するための公衆衛生介入戦略として、母親のビタミン A 補給とインフルエンザワクチン接種を併用できるかどうかを調査することは興味深い。発展途上国の幼児。

研究デザインと方法:

研究サイト: この研究は ICDDR,B で実施されます。ダッカ、バングラデシュ。 ダッカ市のミルプール地区にある 3 つの都市型産科クリニックが、妊娠初期にクリニックを訪れ、近隣地域に居住している母親にアプローチするために選択されます。

研究対象: 参加基準は、第 2 学期の初めに母親を登録することです (つまり、 妊娠約 12 週間）、妊娠中はダッカに滞在する意思があり、出産時にクリニックに入院する意思がある。 在胎週数は自己申告による LMP によって決定されますが、ほとんどの場合過小評価される可能性があります。 この提案された研究では、2 週間の変動は許容されます。 除外基準は、全身性疾患の病歴、過去の複雑な妊娠または早産、中絶、先天異常、およびインフルエンザワクチンまたはワクチン接種に対する過敏症である。

実験計画の概要: これは、プラセボ対照、二重マスク、ランダム化試験です。 全体的な研究デザインの概要を図 1 に示し、提案されたプロトコルに関連する活動のタイムラインと仮定の期間を表 1 に示します。 雇用される現場作業員の数や利用可能な検査施設に合わせてサンプルの収集、保管、分析のスケジュールを設定できるようにするため、研究の最初の 3 か月間は週に約 5 人の妊婦をこの研究に参加させる予定です (表1）。 母親から書面によるインフォームドコンセントが得られます。 66人の妊婦が無作為に割り付けられ、毎週10,000 IUのビタミンAカプセルかプラセボ（コーン油）カプセルのいずれかを投与され、血清ビタミンA評価のために血液が採取される。 ランダム化は、バランスのとれたブロック設計を使用して 3 つのクリニックによって階層化されます。 この毎週のサプリメント摂取は、産後6か月まで続けられます。 この研究で使用されるビタミンAの補充用量は、他の研究(Semba et al., 1999; Cox et al., 2006)で妊婦に毎週使用される用量と同様であり、安全であることが示されています。 現場作業員は母親にサプリメントを直接届け、その摂取量を直接観察します。 妊娠 26 ～ 28 週目に、すべての母親は不活化三価インフルエンザ ウイルス ワクチン (GlaxoSmithKline、ドレスデン、ドイツ) を受けます。 このプロジェクトでは、WHO が北半球に対して推奨する標準的な不活化三価インフルエンザ A/H3N2、A/H1N1、および B 株を商業源から入手します。 研究担当医師はワクチンを筋肉内投与します。 出産時に、臍帯血と初乳がそれぞれインフルエンザ特異的 IgG と sIgA の評価およびビタミン A 濃度の評価のために収集されます。 生まれたばかりの赤ちゃんの出生体重と身長も記録されます。 生後6か月の時点で、ビタミンAおよびインフルエンザウイルス特異的sIgAの評価のために母乳が採取され、同様にビタミンAおよびインフルエンザウイルス特異的IgGの評価のために乳児（生後6カ月）から静脈血（2〜3ml）が採取されます。インフルエンザウイルス特異的sIgA評価のための乳児の鼻洗浄剤として。 私たちが提案する研究は、バングラデシュにおける葉酸・鉄分の補給や既存の乳児ワクチン接種プログラムなど、母親に対する既存の産前ケアを妨げるものではない。

ランダム化: 各母親には、ランダムに生成された固有の識別番号が与えられます。これは、彼女が割り当てられている研究グループを示します。 60 カプセル入りのボトルには同じ ID がラベル付けされます。 フィールドアテンダントは、母親の ID 番号とボトル ID が同じであることを確認しながら、毎週の補給にこれらのカプセルを使用します。 第三者 (ACME 研究所、バングラデシュのダッカ) が、番号リストの ID 番号をラベル付けしたボトルにビタミン A またはプラセボ カプセルを準備して供給します。 責任者は研究が終了するまで機密として保管します。

サンプル収集: 母親からの末梢血、臍帯血、初乳、母乳、乳児からの末梢血および鼻洗浄液が図 1 に記載されているように収集されます。 鼻分泌物は、以前に記載されているように（Wright et al.、1996）、鼻孔に芯（綿アプリケーター）を導入し、90秒間穏やかに回転させることによって得られます。 芯を 1 mL PBS に抽出し、遠心分離し、上清を収集します。 すべてのサンプルは同時に検査されるまで凍結されます。

血清学的評価：この提案された研究の目的は、乳児の受動的抗体レベルに対する母親のビタミンA補給の影響を評価することであるため、免疫応答を調査することが賢明であるため、1つのインフルエンザ抗原のみに対する体液性免疫応答を調査することを選択しました。 1つの抗原に対して。 ビタミン A およびインフルエンザ A 特異的体液性免疫の以下のパラメーターがテストされます。

ビタミン A 評価: 血漿、血清、初乳、母乳中のビタミン A 含有量は、LSD の栄養生化学研究室で標準的な HPLC 法によって測定されます。

赤血球凝集阻害試験 [HAI]: HAI 抗体力価は、標準的なマイクロタイターアッセイによって測定されます (Admon et al.、1997)。 選択したインフルエンザ A ワクチン株の 12 HA ユニットを、受容体破壊酵素 (RDE、Sigma MO) および熱不活化で希釈した前処理血清に添加します。 インキュベーション後、対照ウェル内に沈降が起こるまで、洗浄したニワトリ赤血球を添加します。 ＨＡＩ力価は、完全なＨＡＩを示す血清の最高希釈率の逆数である。

インフルエンザ特異的 IgG および sIgA ELISA: 血清/血漿中のインフルエンザ ウイルス A 特異的 IgG、および初乳、母乳および乳児の鼻腔スワブ中の sIgA は、以前に記載されているように若干の修正を加えた ELISA によって分析されます (Bruhl et al., 2000; Greenbaum et al. ., 2004)。 簡単に説明すると、免疫プレートを、NIBSCから得た精製インフルエンザ抗原で2μg/mLで4℃で一晩コーティングする。その後、希釈したサンプルを追加してさらに一晩インキュベートします。 HRP結合抗ヒトIgG（BD-Pharmingen、カリフォルニア州）またはペルオキシダーゼ標識マウス抗sIgA（Alpco Diagnostics、ニューハンプシャー州）を結合体として使用します。 標準曲線を作成するには、任意の値が割り当てられたプールされたサンプルの段階希釈が各 ELISA プレートに導入されます。 初乳、母乳および乳児鼻腔スワブ中の総 sIgA も、全体的な sIgA 分泌に関してインフルエンザ A 特異的 sIgA 応答を調整するために EIA キット (Alpco Diagnostics) によって測定されます。