비타민 A와 산모-유아 독감 백신 반응

인플루엔자 이환율은 전체 인구에 영향을 미치고 경제적 부담과 의료 시스템에 막대한 영향을 미치며 특히 0-6개월 된 유아에게 심각한 질병을 일으킵니다. 최근 연구에 따르면 산업화된 국가의 이 연령대 영아에서 인플루엔자 질병 및 입원 비율이 높으며(Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006) 인플루엔자 관련 아동 사망률은 생후 6개월 이전의 어린 영아에서 가장 높습니다( 바트 외, 2005). 불행하게도 비활성화 인플루엔자 백신은 이 연령대에 권장되지 않지만 임산부는 임신 2~3분기에 접종할 수 있습니다. 따라서 영아의 수동 면역화(어머니로부터) 전략은 어린 영아 사이에서 이 감염을 퇴치하는 효과적인 방법입니다. 이 접근법은 1997년부터 미국에서 채택되었고 2005년부터 WHO에서 권장했습니다.

상기도는 바이러스 진입의 관문이자 복제의 주요 부위입니다(Gluck et al., 1994; Muszkat et al., 2000). 따라서 바이러스의 진입 부위에 효과적인 점막 항체가 존재하는 것이 바이러스를 중화하고 감염을 예방하는 데 필수적입니다(Meitin et al., 1994). 분비 IgA(sIgA)는 일차 점막 항체로, 신체 전체 항체 생산의 ~70%를 차지합니다(Brandtzaeg, 1994). sIgA는 비강 항인플루엔자 점막 면역을 매개하는 것으로 나타났으며(Renegar & Small, 1991) 따라서 점막 표면에서 특정 항체 생성을 유발하는 백신 전략의 중요성과 점막 신경펩티드의 방출을 유발하는 식이 영양소의 중요성을 나타냅니다. 점막 면역 체계의 유지에 필요합니다(Renegar et al., 2001). 많은 임상 시험에서 점막 면역 지표에 대한 인간의 비타민 A 보충 효과를 조사했습니다. 인간 면역결핍 바이러스에 감염된 임산부에 대한 보충은 락툴로오스/만니톨(L/M) 소변 배설 검사로 측정된 14주 영아의 장 투과성 개선과 관련이 있습니다(Filteau et al., 1999). 임신 중 비타민 A 보충(Semba et al., 1999) 또는 산후 초기(Filteau et al., 2001)는 모유의 총 sIgA에 영향을 미치지 않는 반면, 우유의 비타민 A는 성장을 억제하는 것으로 나타났습니다. 외피가 있는 바이러스와 외피가 없는 바이러스 모두(Clarke & May, 2000). 그러나 비타민 A가 충분한 어린이의 총 sIgA 수준은 비타민 A가 부족한 어린이의 총 sIgA 수준보다 상당히 높게 검출되었습니다(Lin et al., 2007). 동물 모델에서 비타민 A 보충은 점막의 총 세포 및 항원 특이적 sIgA 함유 세포를 모두 증가시켜 생존율을 향상시킵니다(Nikawa et al., 2001). 태아기 비타민 A 보충 및 백신 접종이 자손의 백신 특이적 점막 sIgA 반응에 미치는 영향을 조사한 연구는 없습니다. 산모의 IgA가 태반을 통해 영아에게 전달되지는 않지만, 산모의 비타민 A 보충 결과로 모유에서 증가된 비타민 A 및 백신 특이적 sIgA는 영아의 비강 sIgA 반응을 향상시켜 어린 영아 사이에서 개선된 수동적 보호를 제공할 수 있습니다.

최근 연구(Thrasher Research Fund에서 자금을 지원하는 Mother'SGift 프로젝트)에서 방글라데시에서 어머니의 인플루엔자 백신 접종이 생후 6개월 이하의 유아에서 인플루엔자 질병을 상당히 줄일 수 있음을 발견했습니다(Zaman et al., 2008). 한편, 방글라데시와 다른 개발도상국의 임산부들 사이에서 비타민 A 결핍의 유병률은 매우 높습니다. 방글라데시 임산부의 절반 이상이 권장 식이 허용량보다 적은 양의 비타민 A를 섭취하고 비타민 A 상태가 낮으며(혈청 레티놀 <1•05 μmol/L) 약 1/5이 결핍(혈청 레티놀 <0 •70 μmol/L) (Ahmed et al., 2003; Lee et al., 2008). 그럼에도 불구하고 임상적 및 준임상적 비타민 A 결핍에 의해 선천적 및 후천적 면역의 여러 측면이 손상된다는 결정적인 과학적 증거가 있습니다(Stephensen, 2001). 또 다른 연구에서 우리는 1차 황열병 바이러스 백신 특이적 림프구 배아형성/항체 반응과 체내 비타민 A 저장 사이에 유의미한 긍정적 연관성을 관찰했습니다(Ahmad et al., 2008). 따라서 비타민 A의 잠재적인 면역 조절 역할을 고려할 때 인플루엔자 백신 접종과 함께 산모의 비타민 A 보충이 산모와 어린이 사이에서 인플루엔자 감염과 비타민 A 결핍을 동시에 퇴치하기 위한 공중 보건 개입 전략으로 사용될 수 있는지 여부를 조사하는 것이 중요합니다. 개발도상국의 영유아.

연구 설계 및 방법:

연구 장소: 이 연구는 ICDDR,B에서 수행됩니다. 방글라데시 다카. 다카시 미르푸르(Mirpur) 지역에 위치한 도시산부인과클리닉 3개소는 임신 1분기에 병원을 방문하고 인근 지역사회의 거주지인 접근하는 산모들을 대상으로 선정된다.

연구 대상: 포함 기준은 임신 2기(즉, 임신 기간 약 12주), 임신 기간 동안 다카에 머물 의향이 있고 분만 시 병원에 입원할 의향이 있습니다. 재태 연령은 자가 보고된 LMP에 의해 결정되며 대부분의 경우 과소 평가될 수 있습니다. 이 제안된 연구에서 2주 변동이 허용될 것입니다. 제외 기준은 다음과 같습니다: 전신 질환의 병력, 이전의 복잡한 임신 또는 조산, 낙태, 선천성 기형, 인플루엔자 백신 또는 백신 접종에 대한 과민성.

실험 설계의 개요: 이것은 위약 통제, 이중 마스크 및 무작위 시험입니다. 전체 연구 설계는 그림 1에 요약되어 있으며 제안된 프로토콜 관련 활동의 일정 및 가상 기간은 표 1에 설명되어 있습니다. 고용된 현장 수행원 수와 사용 가능한 실험실 시설로 샘플 수집, 보관 및 분석 일정을 잡을 수 있도록 연구의 첫 3개월 동안 이 연구에 매주 약 5명의 임신부를 입력할 계획입니다. 1 번 테이블). 어머니로부터 정보에 입각한 서면 동의를 얻습니다. 66명의 임산부가 매주 10,000 IU 비타민 A 또는 위약(옥수수유) 캡슐을 받도록 무작위 배정되고 혈청 비타민 A 평가를 위해 혈액을 수집합니다. 무작위화는 균형 잡힌 블록 설계를 사용하여 3개의 클리닉에 의해 계층화됩니다. 이 주간 보충은 산후 6개월까지 계속됩니다. 이 연구에서 사용되는 비타민 A 보충 용량은 다른 연구에서 임산부에게 매주 사용되는 용량과 유사하며(Semba et al., 1999; Cox et al., 2006) 안전한 것으로 나타났습니다. 현장 작업자가 직접 산모에게 보충제를 전달하고 섭취량을 직접 관찰합니다. 임신 26-28주에 모든 산모는 불활화 3가 인플루엔자 바이러스 백신(GlaxoSmithKline; 독일 드레스덴)을 접종받습니다. 북반구에 대해 WHO가 권장하는 표준 비활성화 3가 인플루엔자 A/H3N2, A/H1N1 및 B 균주는 이 프로젝트의 상업적 출처에서 얻을 것입니다. 연구 의사는 백신을 근육내로 투여할 것입니다. 분만 시 인플루엔자 특이 IgG 및 sIgA 평가와 비타민 A 농도를 위해 제대혈과 초유를 채취합니다. 신생아의 출생 체중과 키도 기록됩니다. 생후 6개월에 비타민 A 및 인플루엔자 바이러스 특이 sIgA 평가를 위해 모유를 채취하고, 비타민 A 및 인플루엔자 바이러스 특이 IgG 평가를 위해 유아(6개월령)의 정맥혈(2-3ml)도 채취합니다. 인플루엔자 바이러스 특정 sIgA 평가를 위한 유아의 비강 세척으로. 우리가 제안한 연구는 엽산/철분 보충 또는 방글라데시의 기존 유아 예방 접종 프로그램과 같은 산모를 위한 기존의 산전 관리를 방해하지 않을 것입니다.

무작위화: 각 어머니는 무작위로 생성된 고유한 식별 번호를 부여받게 되며, 이는 그녀가 배정된 연구 그룹을 나타냅니다. 60캡슐이 들어 있는 병에도 동일한 ID가 표시됩니다. 현장 수행원은 어머니의 ID 번호와 젖병 ID가 동일하도록 매주 보충용으로 이 캡슐을 사용할 것입니다. 제3자(ACME 연구소, 방글라데시 다카)는 숫자 목록의 ID 번호가 표시된 병에 비타민 A 또는 위약 캡슐을 준비하고 공급합니다. 담당자는 연구가 종료될 때까지 기밀을 유지합니다.

샘플 수집: 어머니의 말초 혈액, 제대혈, 초유, 모유, 유아의 말초 혈액 및 비강 세척액은 그림 1에 설명된 대로 수집됩니다. 비강 분비물은 심지(솜 어플리케이터)를 콧구멍에 삽입하고 이전에 설명한 것처럼 90초 동안 부드럽게 회전하여 얻을 수 있습니다(Wright et al., 1996). 심지를 1mL PBS로 추출하고 원심분리한 다음 상층액을 수집합니다. 모든 샘플은 동시에 테스트할 때까지 동결됩니다.

혈청학적 평가: 우리는 이 제안된 연구의 목적이 영아의 수동 항체 수준에 대한 산모의 비타민 A 보충제의 효과를 평가하는 것이기 때문에 하나의 인플루엔자 항원에 대해서만 체액성 면역 반응을 조사하기로 선택했습니다. 따라서 면역 반응을 조사하는 것이 현명합니다. 하나의 항원에. 비타민 A 및 인플루엔자 A 특이적 체액성 면역의 다음 매개변수를 테스트합니다.

비타민 A 평가: 혈장, 혈청, 초유 및 모유의 비타민 A 함량은 LSD의 영양 생화학 실험실에 있는 표준 HPLC 방법으로 측정됩니다.

혈구응집 억제 시험[HAI]: HAI 항체 역가는 표준 마이크로타이터 분석으로 측정됩니다(Admon et al., 1997). 선택된 인플루엔자 A 백신 균주의 12 HA 단위가 수용체 파괴 효소(RDE, Sigma MO) 및 열 불활성화로 희석된 사전 처리된 혈청에 추가됩니다. 인큐베이션 후 세척된 닭 적혈구를 컨트롤 웰에서 침전물이 생길 때까지 첨가합니다. HAI 역가는 완전한 HAI를 나타내는 혈청의 최고 희석도의 역수입니다.

인플루엔자 특이적 IgG 및 sIgA ELISA: 인플루엔자 바이러스 혈청/혈장에 있는 특이적 IgG와 초유, 모유 및 영아 비강 면봉에 있는 sIgA는 이전에 약간 수정하여 설명된 대로 ELISA로 분석됩니다(Bruhl et al., 2000; Greenbaum et al. ., 2004). 간략하게 면역플레이트는 NIBSC에서 얻은 정제된 인플루엔자 항원으로 40C에서 밤새 2 ug/mL로 코팅됩니다. 그런 다음 희석된 샘플을 추가하여 밤새 배양합니다. HRP-접합된 항-인간 IgG(BD-Pharmingen, CA) 또는 마우스 항-sIgA, 퍼옥시다제 표지(Alpco Diagnostics, NH)가 접합체로 사용될 것이다. 표준 곡선을 구성하기 위해 임의의 값으로 할당된 풀링된 샘플의 연속 희석이 각 ELISA 플레이트에 도입됩니다. 초유, 모유 및 영아 비강 면봉의 총 sIgA는 전체 sIgA 분비와 관련하여 인플루엔자 A 특이적 sIgA 반응을 조정하기 위해 EIA 키트(Alpco Diagnostics)에 의해 결정될 것입니다.