Étudier la présence et la fonction des récepteurs de l'érythropoïétine dans des échantillons de cancer humain (EPO-CAN)

Contexte : L'érythropoïétine, EPO, est le principal régulateur et stimulateur de l'érythropoïèse de la moelle osseuse et est responsable de la croissance et de la différenciation de la lignée cellulaire érythroïde. Le clonage du gène a conduit à la production du produit recombinant, rHuEPO. rHuEPO a servi avec succès au cours des deux dernières décennies à la fois pour la recherche et l'application clinique. Il a été démontré que le produit améliore l'anémie de l'insuffisance rénale terminale, l'anémie liée au cancer, ainsi que d'autres types d'anémie et/ou de perte de sang. L'amélioration de l'anémie par la rHuEPO se caractérise par une augmentation des taux d'hémoglobine (Hb) et d'hématocrite (Hct), une réduction des besoins en transfusion sanguine et une amélioration de la qualité de vie. Ainsi, l'utilisation de la rHuEPO est devenue une pratique quotidienne courante en hématologie et en oncologie, avec des millions de patients cancéreux avec ou sans anémie traités avec la rHuEPO. En effet, rHuEPO est devenu un blockbuster (plus d'un milliard de dollars de ventes annuelles) et le produit biologique le plus répandu sur le marché.

En 2003, des rapports ont suggéré que les patients atteints de cancer du sein et de cancer de la tête et du cou traités avec rHuEPO avaient une survie plus courte que les patients qui n'avaient pas été traités avec l'hormone. Ces rapports ont été suivis de plusieurs autres. Cependant, d'autres rapports, dont le nôtre, ont abouti à des conclusions différentes. La méta-analyse n'a pas non plus fourni de réponse définitive.

Trois mécanismes potentiels, dont aucun n'a été prouvé à ce jour, ont été proposés pour expliquer le mauvais pronostic potentiel chez les patients cancéreux traités à la rHuEPO :

1. Stimulation des récepteurs de l'EPO (EPO-R), existant à la surface des cellules tumorales.
2. Taux élevé d'Hb et d'Hct, entraînant une viscosité et des complications de type thrombotique.
3. Augmentation de l'angiogenèse induite par la rHuEPO favorisant la progression tumorale. Comme prévu, ces rapports contradictoires ont suscité une controverse au sein des communautés cliniques hémato-oncologiques, réduit l'utilisation du produit et conduit le Comité consultatif sur les médicaments oncologiques (ODAC) de la FDA à publier une alerte. L'American Society of Clinical Oncology (ASCO) et l'American Society of Hematology (ASH), ainsi que l'Organisation européenne pour la recherche et le traitement du cancer (EORTC), ont publié des directives strictes, définissant qui sont les patients et dans quelles circonstances la rHuEPO devrait être ou ne pas être administré.

Avec notre collaborateur de longue date, le professeur D. Neumann, Faculté de médecine Sackler, TAU, nous avons établi un consortium international européen, avec les meilleurs scientifiques fondamentaux et chercheurs cliniques, dans le but général d'approfondir le sujet. Récemment, le consortium, dirigé par le professeur Neumann, a été informé que l'UE avait reconnu l'importance du projet et avait décidé de le financer avec la prestigieuse bourse de recherche FP7.

Notre équipe, en collaboration avec des partenaires (voir ci-dessous) a pris la responsabilité d'étudier la présence, la fonction et la signification clinique de l'EPO-R dans des échantillons de cancer humain.

Objectif général du projet proposé : Étudier l'EPO-R dans des échantillons de cancer humain.

Objectifs spécifiques :

Pour détecter l'EPO-R sur les cellules tumorales Pour tester la fonction de l'EPO-R Pour suivre les patients et étudier la corrélation possible entre la présence et la fonction de l'EPO-R sur les échantillons tumoraux et le résultat clinique et le pronostic.

Méthodes :

Le projet rétrospectif :

(Une dérogation pour consentement éclairé sera demandée de janvier 1990 à décembre 2011)

• Des diapositives préparées à partir de préparations déjà prises (spécimens) serviront de base pour cette partie du travail.
• Si nécessaire, des lames supplémentaires du "bloc" pathologique seront préparées.

• Les spécimens requis :

  1. Cancer du sein - 50 (sur 50 patientes)
  2. Cancer du côlon - 50
  3. Cancer du poumon - 50
  4. Cancer de la tête et du cou - 50
  5. Biopsie des ganglions lymphatiques (positif pour le lymphome) - 50 Les échantillons de tissus cancéreux provenant de la bronchoscopie, de l'endoscopie et de la FNA/FNB, où il n'y a qu'une petite quantité de tissu, ne seront pas utilisés pour l'étude.
• Les lames non colorées et non identifiées seront transférées au laboratoire du professeur Drorit Neumann, à la faculté de médecine Sackler, où l'analyse des lames pour la teneur en EPO-R sera effectuée. Une partie de ces diapositives sera transférée à l'Université Queens, Belfast, Irlande et les mêmes tests seront effectués dans le laboratoire du prof. Makswell.
• Les lames seront colorées avec des anticorps anti-EPO-R (Abs). Ces Abs seront générés dans le cadre du projet européen EPO-CAN par le Dr John Thompson et son équipe à Aldevron, Freiburg, Allemagne.
• Afin de préparer le matériau inclus dans la cire de paraffine (FFPE) fixé au formol, les échantillons de tissus sont fixés dans du formol tamponné à 10 % pendant une nuit à température ambiante et traités par des alcools gradués en cire de paraffine. Une fois incorporées, des sections de 3 à 5 µm sont coupées sur des lames activées et placées dans un incubateur à 37°C pendant la nuit. Ceux-ci sont prêts pour l'immunohistochimie. Il s'agit de notre méthodologie standard pour les sections simples. Pour les micropuces tissulaires (TMA), des cas sélectionnés sont identifiés et les régions d'intérêt marquées à l'aide de lames colorées à l'hématoxyline et à l'éosine. Les régions sont extraites de leurs blocs d'origine et réintégrées selon une carte établie. Entre 50 et 100 cœurs sont implantés par bloc. Des sections en série de 3 à 5 um sont découpées à partir de celles-ci et sont traitées comme ci-dessus. Le dépistage et l'optimisation des paramètres de coloration des anticorps sont effectués sur des préparations à section unique. Des anticorps sélectionnés adaptés au matériel FFPE sont utilisés pour colorer les TMA de tissus normaux et malins à partir d'une gamme de tumeurs, préparés dans la biobanque d'Irlande du Nord.

Remarque : La collecte d'informations à partir des échantillons sera effectuée par une technique anonyme et sera séparée de manière irréversible des données d'identification du patient.

Le projet prospectif :

(Le consentement éclairé du patient est requis)

• Un travail similaire sera effectué mais sur des échantillons de matériel frais, qui seront issus de biopsies au bloc opératoire.
• Les patients seront identifiés, avec un suivi de 2 à 3 ans sur l'évolution clinique et une tentative de corrélation de l'évolution et des résultats cliniques avec la présence et la fonction de l'EPO-R sur les cellules tumorales.

Note:

Seul un petit (minuscule) morceau de tissu du patient sera nécessaire. Ainsi, il ne doit pas interférer avec toute autre activité ou test requis pour le processus de prise de décision pour le patient. Il restera suffisamment de tissus de patients stockés pour de futurs tests médicaux à des fins thérapeutiques.