研究人类癌症标本中促红细胞生成素受体的存在和功能 (EPO-CAN)

背景：促红细胞生成素，EPO，是骨髓红细胞生成的主要调节剂和刺激剂，负责红系细胞谱系的生长和分化。 该基因的克隆导致了重组产物 rHuEPO 的产生。 rHuEPO 在过去的几十年中成功地服务于研究和临床应用。 该产品已被证明可以改善终末期肾病的贫血、癌症相关的贫血以及其他类型的贫血和/或失血。 rHuEPO 改善贫血的特点是血红蛋白 (Hb) 和血细胞比容 (Hct) 水平升高、输血需求减少和生活质量改善。 因此，rHuEPO 的使用已成为血液学和肿瘤学的常规日常实践，数百万伴或不伴贫血的癌症患者接受 rHuEPO 治疗。 事实上，rHuEPO 已成为市场上的重磅炸弹（年销售额超过 10 亿美元）和最常见的生物产品。

2003 年，报告表明接受 rHuEPO 治疗的乳腺癌和头颈癌患者的生存期比未接受激素治疗的患者短。 这些报告之后是其他几份报告。 然而，包括我们在内的其他报告得出了不同的结论。 荟萃分析也未能提供明确的答案。

已提出三种可能的机制来解释 rHuEPO 治疗的癌症患者潜在的不良预后，但目前尚未得到证实：

1. 刺激存在于肿瘤细胞表面的 EPO 受体 (EPO-R)。
2. 高水平的 Hb 和 Hct，导致粘度和血栓样并发症。
3. rHuEPO 诱导的血管生成增加促进肿瘤进展。 正如预期的那样，这些相互矛盾的报告在临床血液肿瘤学界引起了争议，减少了该产品的使用，并导致 FDA 肿瘤药物咨询委员会 (ODAC) 发布警报。 美国临床肿瘤学会 (ASCO) 和美国血液学会 (ASH) 以及欧洲癌症研究和治疗组织 (EORTC) 发布了严格的指南，定义了哪些患者以及在什么情况下应该使用 rHuEPO是或不应该被管理。

与我们的长期合作者，TAU 萨克勒医学院的 D. Neumann 教授，我们建立了一个欧洲国际联盟，由顶尖的基础科学家和临床研究人员组成，其总体目标是进一步研究该主题。 最近，由 Neumann 教授领导的财团获悉，欧盟已经认识到该项目的重要性，并决定以享有盛誉的 FP7 研究补助金为其提供资金。

我们的团队与合作伙伴（见下文）合作，负责研究人类癌症标本中 EPO-R 的存在、功能和临床意义。

拟议项目的总体目标：研究人类癌症标本中的 EPO-R。

具体目标：

检测肿瘤细胞上的EPO-R 检测EPO-R的功能 对患者进行随访，研究肿瘤标本上EPO-R的存在和功能与临床结果和预后之间可能存在的相关性。

方法：

回顾项目：

（从 1990 年 1 月到 2011 年 12 月将要求放弃知情同意）

• 已准备好的幻灯片（标本）将作为该部分工作的基础。
• 需要时，将准备病理“块”的其他幻灯片。

• 所需标本：

  1. 乳腺癌 - 50（来自 50 名患者）
  2. 结肠癌 - 50
  3. 肺癌 - 50
  4. 头颈癌 - 50
  5. 淋巴结活检（淋巴瘤阳性）- 50 来自支气管镜检查、内窥镜检查和 FNA/FNB 的癌组织样本，其中只有少量组织，将不会用于研究。
• 未染色、未识别的载玻片将被转移到萨克勒医学院 Drorit Neumann 教授的实验室，在那里将对载玻片进行 EPO-R 含量分析。 这些幻灯片的一部分将被转移到爱尔兰贝尔法斯特皇后大学，同样的测试将在教授的实验室进行。 麦克斯韦尔。
• 载玻片将用抗 EPO-R 抗体 (Abs) 染色。 这些抗体将作为欧洲 EPO-CAN 项目的一部分由 John Thompson 博士及其在德国弗莱堡 Aldevron 的团队生成。
• 为了制备福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 材料，组织样本在室温下固定在 10% 缓冲福尔马林中过夜，并通过分级醇处理成石蜡。 包埋后，将 3-5µm 切片切割到活化的载玻片上，并置于 37°C 培养箱中过夜。 这些已准备好进行免疫组织化学。 这是我们针对单个部分的标准方法。 对于组织微阵列 (TMA)，选定的病例被识别，感兴趣的区域使用苏木精和曙红染色的载玻片进行标记。 这些区域是从它们的原始块中提取出来的，并根据已建立的地图重新嵌入。 每个区块有 50 到 100 个核心。 从这些切片上切下连续的 3-5µm 切片，并按上述方法处理。 抗体的筛选和染色参数优化是在单切片制剂上进行的。 选定的适用于 FFPE 材料的抗体用于对来自一系列肿瘤的正常和恶性组织的 TMA 进行染色，这些组织在北爱尔兰生物库中制备。

注：样本信息收集将采用匿名技术，并以不可逆方式与患者身份信息分离。

预期项目：

（需要患者知情同意）

• 将进行类似的工作，但使用新鲜材料样本，这些样本将从手术室的活组织检查中提取。
• 将确定患者，对临床病程进行 2-3 年的随访，并尝试将病程和临床结果与 EPO-R 在肿瘤细胞上的存在和功能相关联。

笔记：

只需要一小块患者组织。 因此，它不应干扰患者决策过程所需的任何其他活动或化验。 将有足够的患者组织储存起来，用于未来治疗目标的医学测试。