ヒトがん標本におけるエリスロポエチン受容体の存在と機能の研究 (EPO-CAN)

背景: エリスロポエチン (EPO) は、骨髄赤血球生成の主要な調節因子および刺激因子であり、赤血球細胞系譜の成長と分化を担っています。 遺伝子のクローニングにより、組換え産物である rHuEPO が生産されました。 rHuEPO は、過去数十年にわたって研究と臨床応用の両方で成功を収めてきました。 この製品は、末期腎疾患の貧血、がん関連貧血、その他の種類の貧血および/または失血を改善することが示されています。 rHuEPO による貧血の改善は、ヘモグロビン (Hb) およびヘマトクリット (Hct) レベルの増加、輸血必要量の減少、および生活の質の改善によって特徴付けられます。 したがって、rHuEPOの使用は血液学および腫瘍学において日常的な日常診療となっており、貧血の有無にかかわらず数百万人のがん患者がrHuEPOで治療されている。 実際、rHuEPO は大ヒット商品 (年間売上高 10 億ドルを超える) となり、市場で最も一般的な生物学的製品となっています。

2003 年の報告では、rHuEPO で治療を受けた乳がんおよび頭頸部がんの患者は、このホルモンで治療を受けなかった患者よりも生存期間が短いことが示唆されました。 これらの報告に続いて、他の報告もいくつかありました。 しかし、私たちのレポートを含む他のレポートでは、異なる結論が導かれました。 メタ分析でも決定的な答えは得られませんでした。

rHuEPO 治療を受けたがん患者の予後不良の可能性を説明するために、3 つの潜在的なメカニズムが提案されていますが、いずれもこれまでのところ証明されていません。

1. 腫瘍細胞の表面に存在する EPO 受容体 (EPO-R) の刺激。
2. Hb および Hct のレベルが高く、粘稠性および血栓性のような合併症を引き起こします。
3. rHuEPO によって誘導される血管新生の増加は、腫瘍の進行を促進します。 予想通り、これらの矛盾した報告は臨床血液腫瘍学コミュニティーの間で論争を引き起こし、製品の使用を減らし、FDA 腫瘍医薬品諮問委員会 (ODAC) が警告を発表するに至りました。 米国臨床腫瘍学会 (ASCO) と米国血液学会 (ASH)、さらに欧州がん研究治療機構 (EORTC) は、誰が患者で、どのような状況下で rHuEPO を使用すべきかを定義した厳格なガイドラインを発行しました。投与すべきかどうか。

私たちの長年の共同研究者である TAU サックラー医学部の D. ニューマン教授とともに、私たちはこのテーマをさらに研究することを一般的な目的として、一流の基礎科学者と臨床研究者による欧州国際コンソーシアムを設立しました。 最近、ノイマン教授が率いるコンソーシアムは、EUがこのプロジェクトの重要性を認識し、権威あるFP7研究助成金で資金提供することを決定したとの通知を受けた。

私たちのチームは、パートナー（以下を参照）と協力して、ヒトのがん標本における EPO-R の存在、機能、臨床的重要性を研究する責任を負いました。

提案されたプロジェクトの一般的な目的: ヒトの癌標本における EPO-R を研究すること。

具体的な目的:

腫瘍細胞上の EPO-R を検出するため EPO-R の機能を検査するため 患者を追跡し、腫瘍標本上の EPO-R の存在および機能と、臨床転帰および予後との間の可能性のある相関関係を研究するため。

方法:

回顧プロジェクト:

(インフォームド・コンセントの免除は、1990 年 1 月から 2011 年 12 月まで要求されます)

• すでに採取されたプレパラート（標本）から作成されたスライドが、作業のその部分の基礎として機能します。
• 必要に応じて、病理学的「ブロック」からの追加のスライドが準備されます。

• 必要な標本:

  1. 乳がん - 50 (患者 50 名から)
  2. 結腸がん - 50
  3. 肺がん - 50
  4. 頭頸部がん - 50
  5. リンパ節生検（リンパ腫陽性） - 50 気管支鏡検査、内視鏡検査、および FNA/FNB による癌組織のサンプルは、組織が少量しか存在しないため、研究には使用されません。
• 染色されておらず、識別されていないスライドはサックラー医学部のドロリット・ニューマン教授の研究室に移送され、そこでスライドの EPO-R 内容の分析が行われます。 これらのスライドの一部はアイルランドのベルファストにあるクイーンズ大学に転送され、同じテストが教授の研究室で行われる予定です。 マクスウェル。
• スライドは抗 EPO-R 抗体 (Abs) で染色されます。 これらの Abs は、ドイツのフライブルク、アルデブロンにある John Thompson 博士と彼のチームによって欧州 EPO-CAN プロジェクトの一環として生成されます。
• ホルマリン固定パラフィンワックス包埋 (FFPE) 材料を調製するには、組織サンプルを 10% 緩衝ホルマリン中で室温で一晩固定し、段階的アルコールを介してパラフィンワックスに処理します。 包埋後、活性化スライド上で 3 ～ 5µm の切片を切断し、37°C​​ のインキュベーターに一晩置きます。 これらは免疫組織化学の準備ができています。 これは、単一セクションの標準的な方法論です。 組織マイクロアレイ (TMA) では、選択された症例が特定され、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色されたスライドを使用して関心領域がマークされます。 領域は元のブロックからコア化され、確立されたマップに従って再埋め込まれます。 ブロックごとに 50 ～ 100 個のコアが配置されます。 これらから連続した 3 ～ 5μm 切片を切り出し、上記と同様に処理します。 抗体のスクリーニングと染色パラメーターの最適化は、単一の切片標本に対して実行されます。 FFPE 材料に適した選択された抗体は、Northern Ireland Biobank で調製された、さまざまな腫瘍の正常組織および悪性組織の TMA を染色するために使用されます。

注: サンプルからの情報収集は匿名技術によって行われ、患者の身元情報の詳細から不可逆的な方法で分離されます。

将来のプロジェクト:

（患者様の同意が必要です）

• 同様の作業が行われますが、手術室の生検から採取された新鮮な材料サンプルが使用されます。
• 患者は、臨床経過を2〜3年間追跡調査し、経過および臨床転帰と腫瘍細胞上のEPO-Rの存在および機能との相関関係を試みて特定される。

ノート：

患者組織の小さな（小さな）部分だけが必要です。 したがって、患者の意思決定プロセスに必要な他の活動やアッセイを妨げるべきではありません。 将来の治療目的のための薬物検査のために、十分な患者組織が保管されることになる。