Изучение присутствия и функции рецепторов эритропоэтина в образцах рака человека (EPO-CAN)

Актуальность: Эритропоэтин, ЭПО, является основным регулятором и стимулятором эритропоэза костного мозга и отвечает за рост и дифференцировку эритроидных клеток. Клонирование гена привело к получению рекомбинантного продукта rHuEPO. rHuEPO успешно использовался в течение последних нескольких десятилетий как для исследований, так и для клинического применения. Было показано, что продукт улучшает анемию терминальной стадии почечной недостаточности, анемию, связанную с раком, а также другие виды анемии и/или кровопотери. Улучшение анемии с помощью rHuEPO характеризуется повышением уровней гемоглобина (Hb) и гематокрита (Hct), снижением потребности в переливании крови и улучшением качества жизни. Таким образом, использование rHuEPO стало рутинной ежедневной практикой в ​​гематологии и онкологии, где миллионы онкологических больных с анемией или без нее получали rHuEPO. Действительно, rHuEPO стал блокбастером (годовой объем продаж превышает миллиард долларов) и самым распространенным биологическим продуктом на рынке.

В 2003 году в отчетах было высказано предположение, что пациенты с раком молочной железы и раком головы и шеи, получавшие rHuEPO, имели более короткую выживаемость, чем пациенты, которых не лечили гормоном. За этими сообщениями последовало несколько других. Однако другие отчеты, в том числе и наши, привели к иным выводам. Метаанализ также не дал однозначного ответа.

Три потенциальных механизма, ни один из которых пока не доказан, были предложены для объяснения потенциально плохого прогноза у онкологических больных, получавших rHuEPO:

1. Стимуляция рецепторов ЭПО (ЭПО-Р), существующих на поверхности опухолевых клеток.
2. Высокий уровень Hb и Hct, приводящий к вязкости и тромбоподобным осложнениям.
3. Повышенный ангиогенез, индуцированный rHuEPO, способствует прогрессированию опухоли. Как и ожидалось, эти противоречивые отчеты вызвали споры среди клинических гематологических и онкологических сообществ, сократили использование продукта и побудили Консультативный комитет FDA по онкологическим препаратам (ODAC) опубликовать предупреждение. Американское общество клинической онкологии (ASCO) и Американское общество гематологов (ASH), а также Европейская организация по исследованию и лечению рака (EORTC) опубликовали строгие рекомендации, определяющие, кто является пациентами и при каких обстоятельствах следует применять rHuEPO. быть или не должно быть введено.

Вместе с нашим давним сотрудником, профессором Д. Нойманном, Медицинский факультет Саклера, ТАУ, мы создали европейский международный консорциум с ведущими фундаментальными учеными и клиническими исследователями с общей целью дальнейшего изучения этой темы. Недавно консорциум, возглавляемый профессором Нойманном, был уведомлен о том, что ЕС признал важность проекта и решил финансировать его за счет престижного исследовательского гранта FP7.

Наша команда в сотрудничестве с партнерами (см. ниже) взяла на себя ответственность изучить наличие, функцию и клиническое значение EPO-R в образцах рака человека.

Общая цель предлагаемого проекта: изучить EPO-R в образцах рака человека.

Конкретные цели:

Обнаружение EPO-R на опухолевых клетках. Тестирование функции EPO-R. Наблюдение за пациентами и изучение возможной корреляции между наличием и функцией EPO-R на образцах опухоли и клиническим исходом и прогнозом.

Методы:

Ретроспективный проект:

(Отказ от информированного согласия будет запрашиваться с января 1990 г. по декабрь 2011 г.)

• Заготовленные слайды из уже взятых препаратов (образцов) послужат основой для той части работы.
• При необходимости будут подготовлены дополнительные препараты из патологического «блока».

• Необходимые экземпляры:

  1. Рак молочной железы - 50 (из 50 больных)
  2. Рак толстой кишки - 50
  3. Рак легких - 50
  4. Рак головы и шеи - 50
  5. Биопсия лимфатических узлов (положительная на лимфому) - 50 Образцы раковых тканей, взятые при бронхоскопии, эндоскопии и ТНА/ТНБ, где имеется лишь небольшое количество ткани, для исследования не используются.
• Неокрашенные неидентифицированные препараты будут переданы в лабораторию профессора Дрорита Неймана на медицинском факультете им. Саклера, где будет проведен анализ препаратов на содержание EPO-R. Часть этих препаратов будет передана в Квинсский университет, Белфаст, Ирландия, и те же тесты будут проведены в лаборатории проф. Максвелл.
• Слайды будут окрашены антителами против EPO-R (Abs). Эти Abs будут созданы в рамках европейского проекта EPO-CAN доктором Джоном Томпсоном и его командой в Альдевроне, Фрайбург, Германия.
• Для приготовления фиксированного формалином материала, залитого парафином (FFPE), образцы тканей фиксируют в 10% забуференном формалине в течение ночи при комнатной температуре и обрабатывают с помощью градуированных спиртов до парафинового воска. После заделки срезы размером 3-5 мкм нарезают на активированные предметные стекла и помещают в инкубатор при 37°C на ночь. Они готовы для иммуногистохимии. Это наша стандартная методология для отдельных разделов. Для тканевых микрочипов (ТМА) идентифицируют отдельные случаи и отмечают интересующие области с помощью окрашенных гематоксилином и эозином предметных стекол. Регионы берутся из исходных блоков и повторно встраиваются в соответствии с установленной картой. В каждом блоке размещается от 50 до 100 ядер. Из них вырезают серийные срезы толщиной 3-5 мкм и обрабатывают, как описано выше. Оптимизацию параметров скрининга и окрашивания антител проводят на препаратах одного среза. Отобранные антитела, подходящие для материала FFPE, используются для окрашивания ТМА нормальных и злокачественных тканей из ряда опухолей, приготовленных в биобанке Северной Ирландии.

Примечание. Сбор информации из образцов будет проводиться анонимным методом и будет необратимо отделен от идентификационных данных пациента.

Перспективный проект:

(Требуется информированное согласие пациента)

• Аналогичная работа будет выполнена, но на свежих образцах материала, которые будут взяты из биоптатов в операционной.
• Пациенты будут идентифицированы с последующим 2-3-летним наблюдением за клиническим течением и попыткой соотнести течение и клинический исход с наличием и функцией EPO-R на опухолевых клетках.

Примечание:

Потребуется только небольшой (крошечный) кусочек ткани пациента. Таким образом, он не должен мешать какой-либо другой деятельности или анализу, необходимому для принятия решения пациентом. В хранилище останется достаточно тканей пациента для будущих медицинских испытаний в терапевтических целях.