Erytropoietiinireseptorin läsnäolon ja toiminnan tutkiminen ihmisen syöpänäytteissä (EPO-CAN)

Tausta: Erytropoietiini, EPO, on luuytimen erytropoieesin pääsäätelijä ja stimulaattori, ja se on vastuussa erytroidisolulinjan kasvusta ja erilaistumisesta. Geenin kloonaus johti rekombinanttituotteen, rHuEPO:n, tuotantoon. rHuEPO on toiminut menestyksekkäästi viimeisten parin vuosikymmenen aikana sekä tutkimuksessa että kliinisissä sovelluksissa. Tuotteen on osoitettu parantavan loppuvaiheen munuaissairauden anemiaa, syöpään liittyvää anemiaa sekä muun tyyppistä anemiaa ja/tai verenhukkaa. rHuEPO:n parantamalle anemialle on ominaista kohonneet hemoglobiini- (Hb) ja hematokriitti (Hct) tasot, vähentyneet verensiirtotarpeet ja parantunut elämänlaatu. Näin ollen rHuEPO:n käytöstä on tullut rutiininomaista päivittäistä käytäntöä hematologiassa ja onkologiassa, ja miljoonia syöpäpotilaita, joilla on anemiaa tai ei, on hoidettu rHuEPO:lla. Itse asiassa rHuEPO:sta on tullut menestys (yli miljardin dollarin vuosimyynti) ja markkinoiden yleisin biologinen tuote.

Vuonna 2003 raportit ovat ehdottaneet, että rHuEPO:lla hoidetut rintasyövän sekä pään ja kaulan syöpäpotilaiden eloonjäämisaika oli lyhyempi kuin potilailla, joita ei ollut hoidettu hormonilla. Näitä raportteja seurasi useita muita. Muut raportit, myös meidän, johtivat kuitenkin erilaisiin johtopäätöksiin. Meta-analyysi ei myöskään antanut lopullista vastausta.

Kolmea mahdollista mekanismia, joista yhtäkään ei ole toistaiseksi todistettu, on ehdotettu selittämään mahdollista huonoa ennustetta rHuEPO-hoitoa saaneiden syöpäpotilaiden keskuudessa:

1. Kasvainsolujen pinnalla olevien EPO-reseptorien (EPO-R) stimulointi.
2. Korkea Hb- ja Hct-taso, mikä johtaa viskositeettiin ja tromboottisen kaltaisiin komplikaatioihin.
3. rHuEPO:n aiheuttama lisääntynyt angiogeneesi edistää kasvaimen etenemistä. Kuten odotettiin, nämä ristiriitaiset raportit aiheuttivat kiistaa kliinisissä hematologisissa ja onkologisissa yhteisöissä, vähensivät tuotteen käyttöä ja johtivat FDA:n oncology Drug Advisory Committeen (ODAC) julkaisemaan varoituksen. American Society of Clinical Oncology (ASCO) ja American Society of Hematology (ASH) sekä European Organisation for Research and Treatment of Cancer (EORTC) julkaisivat tiukat ohjeet, jotka määrittävät potilaat ja missä olosuhteissa rHuEPO:n tulisi saa tai ei pidä antaa.

Pitkäaikaisen yhteistyökumppanimme, prof. D. Neumannin, Sacklerin lääketieteellisen tiedekunnan, TAU:n kanssa olemme perustaneet eurooppalaisen kansainvälisen konsortion, jossa on huippututkijoita ja kliinisiä tutkijoita, joiden yleinen tavoite on tutkia aihetta edelleen. Äskettäin professori Neumannin johtamalle konsortiolle on ilmoitettu, että EU on tunnustanut hankkeen merkityksen ja päättänyt rahoittaa sen arvostetulla FP7-tutkimusapurahalla.

Tiimimme on yhteistyössä kumppaneiden kanssa (katso alla) ottanut vastuun tutkia EPO-R:n läsnäoloa, toimintaa ja kliinistä merkitystä ihmisen syöpänäytteissä.

Ehdotetun projektin yleistavoite: EPO-R:n tutkiminen ihmisen syöpänäytteissä.

Erityiset tavoitteet:

EPO-R:n havaitseminen kasvainsoluista EPO-R:n toiminnan testaaminen Potilaiden seuraaminen ja EPO-R:n esiintymisen ja toiminnan mahdollisen korrelaation tutkiminen kasvainnäytteissä sekä kliinisen lopputuloksen ja ennusteen välillä.

Menetelmät:

Retrospektiivinen projekti:

(Poikkeus tietoon perustuvasta suostumuksesta pyydetään tammikuusta 1990 joulukuuhun 2011)

• Valmistetut diat jo otetuista valmisteista (näytteistä) toimivat pohjana tälle työn osalle.
• Tarvittaessa valmistetaan lisää dioja patologisesta "lohkosta".

• Tarvittavat näytteet:

  1. Rintasyöpä - 50 (50 potilaasta)
  2. Paksusuolisyöpä - 50
  3. Keuhkosyöpä - 50
  4. Pään ja kaulan syöpä - 50
  5. Imusolmukebiopsia (positiivinen lymfooman suhteen) - 50 Bronkoskoopiasta, endoskopiasta ja FNA/FNB:stä otettuja syöpäkudosnäytteitä, joissa on vain vähän kudosta, ei käytetä tutkimukseen.
• Värjäämättömät, tunnistamattomat objektilasit siirretään Prof. Drorit Neumannin laboratorioon Sacklerin lääketieteelliseen tiedekuntaan, jossa objektilasien EPO-R-pitoisuus analysoidaan. Osa näistä dioista siirretään Queens Universityyn Belfastiin Irlantiin ja samat testit suoritetaan prof. Makswell.
• Objektilasit värjätään anti-EPO-R-vasta-aineilla (Abs). Dr. John Thompson ja hänen tiiminsä tuottavat nämä vatsat osana eurooppalaista EPO-CAN-projektia Aldevronissa, Freiburgissa, Saksassa.
• Formaliinilla kiinnitetyn parafiinivahaan upotetun (FFPE) materiaalin valmistamiseksi kudosnäytteet kiinnitetään 10-prosenttisessa puskuroidussa formaliinissa yön yli huoneenlämpötilassa ja käsitellään lajiteltujen alkoholien läpi parafiinivahaksi. Kun se on upotettu, 3-5 um:n leikkeet leikataan aktivoiduille objektilaseille ja asetetaan 37 °C:n inkubaattoriin yön yli. Nämä ovat valmiita immunohistokemiaan. Tämä on vakiomenetelmämme yksittäisille osille. Kudosmikrosiruja (TMA) varten valitut tapaukset tunnistetaan ja kiinnostavat alueet merkitään käyttämällä hematoksyliini- ja eosiinivärjättyjä objektilaseja. Alueet erotetaan alkuperäisistä lohkoistaan ​​ja upotetaan uudelleen vakiintuneen kartan mukaisesti. 50-100 ydintä on sijoitettu lohkoa kohden. Näistä leikataan 3-5 um:n sarjaleikkeitä ja käsitellään kuten edellä. Vasta-aineiden seulonta- ja värjäysparametrien optimointi suoritetaan yksiosaisille valmisteille. Valittuja FFPE-materiaalille sopivia vasta-aineita käytetään värjäämään normaalien ja pahanlaatuisten kudosten TMA:ita useista kasvaimista, jotka on valmistettu Northern Ireland Biobankissa.

Huomautus: Tietojen kerääminen näytteistä suoritetaan anonyymisti tekniikalla ja erotetaan peruuttamattomasti potilaan tunnistetiedoista.

Tuleva projekti:

(Vaaditaan potilaan suostumus)

• Samanlainen työ tehdään, mutta tuoreilla materiaalinäytteillä, jotka otetaan leikkaussalissa olevista biopsioista.
• Potilaat tunnistetaan, ja kliinistä kulkua seurataan 2-3 vuotta ja yritetään korreloida kulku ja kliininen tulos EPO-R:n läsnäolon ja toiminnan kanssa kasvainsoluissa.

Huomautus:

Vain pieni (pieni) pala potilaan kudosta tarvitaan. Siten se ei saisi häiritä mitään muuta toimintaa tai määritystä, jota tarvitaan potilaan päätöksentekoprosessissa. Potilaskudosta jää varastoon riittävästi tulevia lääketutkimuksia varten terapeuttisia tavoitteita varten.