인간 암 표본에서 에리트로포이에틴 수용체 존재 및 기능 연구 (EPO-CAN)

배경: 에리스로포이에틴(Erythropoietin, EPO)은 골수 적혈구 생성의 주요 조절인자이자 자극제이며, 적혈구 계통의 성장과 분화를 담당합니다. 유전자의 클로닝은 재조합 산물인 rHuEPO의 생산으로 이어졌습니다. rHuEPO는 지난 수십 년 동안 연구 및 임상 적용 분야에서 성공적으로 서비스를 제공해 왔습니다. 이 제품은 말기 신장 질환의 빈혈, 암 관련 빈혈 및 기타 유형의 빈혈 및/또는 실혈을 개선하는 것으로 나타났습니다. rHuEPO에 의한 개선된 빈혈은 증가된 헤모글로빈(Hb) 및 헤마토크리트(Hct) 수준, 감소된 수혈 요건 및 개선된 삶의 질을 특징으로 합니다. 따라서, rHuEPO의 사용은 rHuEPO로 치료된 빈혈이 있거나 없는 수백만 명의 암 환자와 함께 혈액학 및 종양학에서 일상적인 일상 업무가 되었습니다. 실제로, rHuEPO는 블록버스터(연매출 10억 달러 이상)이자 시장에서 가장 일반적인 생물학적 제품이 되었습니다.

2003년 보고에 따르면 rHuEPO로 치료받은 유방암과 두경부암 환자는 호르몬 치료를 받지 않은 환자보다 생존 기간이 짧았습니다. 이 보고서에 이어 여러 다른 보고서가 이어졌습니다. 그러나 우리를 포함한 다른 보고서는 다른 결론을 이끌어 냈습니다. 메타 분석도 명확한 답변을 제공하지 못했습니다.

rHuEPO-치료된 암 환자들 사이에서 잠재적인 불량한 예후를 설명하기 위해 세 가지 잠재적인 메커니즘이 제안되었지만 지금까지 입증된 것은 없습니다.

1. 종양 세포 표면에 존재하는 EPO 수용체(EPO-R)의 자극.
2. 높은 수준의 Hb 및 Hct는 점성 및 혈전성 합병증을 유발합니다.
3. 종양 진행을 촉진하는 rHuEPO에 의해 유도된 증가된 혈관신생. 예상대로 이러한 상충되는 보고서는 임상 혈액 종양학 커뮤니티 사이에서 논란을 불러일으켰고 제품 사용을 줄였으며 FDA 종양 약물 자문 위원회(ODAC)가 경고를 발표하도록 이끌었습니다. 미국임상종양학회(ASCO), 미국혈액학회(ASH), 유럽암연구기구(EORTC)는 환자가 누구이며 어떤 상황에서 rHuEPO를 투여해야 하는지를 정의하는 엄격한 지침을 발표했습니다. 투여하거나 투여하지 않아야 합니다.

우리의 오랜 협력자인 TAU Sackler 의과대학의 D. Neumann 교수와 함께 우리는 이 주제를 더 깊이 연구하려는 일반적인 목표를 가지고 최고의 기초 과학자 및 임상 조사자들과 함께 유럽 국제 컨소시엄을 설립했습니다. 최근 노이만 교수가 이끄는 컨소시엄은 EU가 이 프로젝트의 중요성을 인식하고 권위 있는 FP7 연구 보조금으로 자금을 지원하기로 결정했다는 통보를 받았습니다.

우리 팀은 파트너(아래 참조)와 협력하여 인간 암 표본에서 EPO-R의 존재, 기능 및 임상적 중요성을 연구하는 책임을 맡았습니다.

제안 프로젝트의 일반 목표: 인간 암 표본에서 EPO-R을 연구합니다.

구체적인 목표:

종양 세포에서 EPO-R을 검출하기 위해 EPO-R 기능을 테스트하기 위해 환자를 추적하고 종양 표본에서 EPO-R의 존재 및 기능과 임상 결과 및 예후 사이의 가능한 상관 관계를 연구합니다.

행동 양식:

회고전 프로젝트:

(1990년 1월부터 2011년 12월까지 정보에 입각한 동의에 대한 면제가 요청됨)

• 이미 촬영한 준비물(표본)에서 준비된 슬라이드는 작업의 해당 부분에 대한 기초가 됩니다.
• 필요한 경우 병리학적 "블록"의 추가 슬라이드가 준비됩니다.

• 필요한 표본:

  1. 유방암 - 50(환자 50명 중)
  2. 결장암 - 50
  3. 폐암 - 50
  4. 두경부암 - 50
  5. 림프절 생검(림프종 양성) - 50 소량의 조직만 있는 기관지경, 내시경 및 FNA/FNB의 암 조직 샘플은 연구에 사용되지 않습니다.
• 염색되지 않고 식별되지 않은 슬라이드는 Sackler 의학부의 Drorit Neumann 교수 연구실로 옮겨져 EPO-R 내용에 대한 슬라이드 분석이 수행됩니다. 이 슬라이드의 일부는 Queens University, Belfast, Ireland로 전송되고 동일한 테스트가 교수 연구실에서 수행됩니다. 막스웰.
• 슬라이드는 항-EPO-R 항체(Abs)로 염색됩니다. 이러한 Abs는 독일 프라이부르크의 알데브론(Aldevron)에 있는 Dr. John Thompson과 그의 팀이 유럽 EPO-CAN 프로젝트의 일부로 생성할 것입니다.
• 포르말린 고정 파라핀 왁스 내장(FFPE) 재료를 준비하기 위해 조직 샘플을 실온에서 밤새 10% 완충 포르말린에 고정하고 등급별 알코올을 통해 파라핀 왁스로 처리합니다. 내장되면 3-5µm 섹션을 활성화된 슬라이드로 자르고 밤새 37°C 인큐베이터에 넣습니다. 이들은 면역조직화학을 위한 준비가 되어 있습니다. 이것은 단일 섹션에 대한 표준 방법론입니다. TMA(Tissue Microarrays)의 경우 선별된 사례가 식별되고 haematoxylin 및 eosin 스테인드 슬라이드를 사용하여 관심 영역이 표시됩니다. 영역은 원래 블록에서 코어되고 확립된 맵에 따라 다시 포함됩니다. 블록당 50~100개의 코어가 배치됩니다. 직렬 3-5µm 섹션은 이들에서 절단되며 위와 같이 처리됩니다. 항체의 스크리닝 및 염색 매개변수 최적화는 단일 섹션 준비에서 수행됩니다. FFPE 재료에 적합한 선택된 항체는 Northern Ireland Biobank에서 준비된 다양한 종양의 정상 및 악성 조직의 TMA를 염색하는 데 사용됩니다.

참고: 샘플의 정보 수집은 익명의 기술로 수행되며 환자의 신원 정보와 불가역적인 방식으로 분리됩니다.

예상 프로젝트:

(환자 사전 동의 필요)

• 유사한 작업이 수행되지만 수술실의 생검에서 채취한 신선한 재료 샘플에 대해 수행됩니다.
• 환자는 임상 경과에 대한 2-3년 추적 조사 및 경과 및 임상 결과를 종양 세포에 대한 EPO-R의 존재 및 기능과 연관시키려는 시도로 식별될 것입니다.

메모:

환자 조직의 작은 조각만 필요합니다. 따라서 환자의 의사 결정 과정에 필요한 다른 활동이나 분석을 방해해서는 안 됩니다. 치료 목표를 위한 향후 의학 테스트를 위해 충분한 환자 조직이 보관되어 있을 것입니다.