Capacité de colonisation et de persistance d'un probiotique multi-souche dans l'allergie alimentaire pédiatrique au lait ou aux œufs.

Cette étude évalue la capacité de colonisation de trois probiotiques (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve et Bifidobacterium infantis) chez des enfants allergiques au lait et/ou aux œufs.

Il est prévu le recrutement d'une vingtaine de patients allergiques aux œufs et/ou au lait âgés de 10 à 14 mois confirmés par test de tolérance orale en double aveugle contre placebo (Groupe 1).

Par ailleurs, une dizaine de patients sensibles au lait ou à l'œuf mais non confirmés par test de tolérance orale en double aveugle contre placebo (Groupe 2) seront recrutés et une dizaine d'individus sains (Groupe 3).

Pour les 40 patients :

1. La présence initiale de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V et Bifidobacterium infantis M-63 sera évaluée ;

   Uniquement pour les enfants du groupe 1, il sera également évalué :

2. La présence des mêmes souches pendant 30 jours d'administration de probiotiques multi-souches contenant 3,5 x 109 UFC de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V et Bifidobacterium infantis M-63 et après 60 jours à compter de la suspension de l'administration.

Quantification de B. breve, B. longum subsp. longum et B. longum subsp. infantis dans des échantillons fécaux a été réalisée par qRT-PCR en utilisant la plateforme Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Allemagne). Les tests ont été effectués avec un mélange d'amplification PCR de 20 µl contenant : 10 µl de LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl d'amorces et de sondes (concentrations optimisées, 0,5 µM et 0,1 µM, respectivement), 3 µl de H2O de qualité moléculaire et 5 µl de matrice d'ADN. Chaque échantillon a été testé en double pour assurer la reproductibilité des données. Le profil de température RT-PCR consistait en une dénaturation initiale à 95°C pendant 10 min, 45 cycles d'amplification à 95°C pendant 10 sec, 60°C pendant 30 sec et 72°C pendant 1 sec suivi d'une étape finale de refroidissement à 40°C pendant 30 sec. La quantification absolue a été effectuée à l'aide de la "méthode du maximum de la dérivée seconde"

Analyses statistiques : le test de rang signé de Wilcoxon a été utilisé pour comparer les concentrations d'espèces probiotiques au cours du temps.