Kolonizace a perzistentní kapacita vícekmenových probiotik u dětské potravinové alergie na mléko nebo vejce.

Tato studie hodnotí kolonizační kapacitu tří probiotik (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve a Bifidobacterium infantis) u dětí alergických na mléko a/nebo vejce.

Očekává se nábor asi 20 pacientů alergických na vejce a/nebo mléko ve věku 10 až 14 měsíců potvrzený dvojitě zaslepeným perorálním tolerančním testem proti placebu (skupina 1).

Dále bude přijato asi 10 pacientů citlivých na mléko nebo vejce, ale nepotvrzených dvojitě zaslepeným orálním tolerančním testem proti placebu (skupina 2), a asi 10 zdravých jedinců (skupina 3).

Pro všech 40 pacientů:

1. Bude hodnocena výchozí přítomnost Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V a Bifidobacterium infantis M-63;

   Pouze pro děti skupiny 1 bude také hodnoceno:

2. Přítomnost stejných kmenů během 30 dnů podávání vícekmenových probiotik obsahujících 3,5 x 109 UFC Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V a Bifidobacterium infantis M-63 a po 60 dnech od přerušení podávání.

Kvantifikace B. breve, B. longum subsp. longum a B. longum subsp. infantis ve vzorcích stolice byla provedena pomocí qRT-PCR s použitím platformy Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Německo). Testy byly provedeny s 20 ul PCR amplifikační směsi obsahující: 10 ul LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 ul primerů a sond (optimalizované koncentrace, 0,5 uM a 0,1 uM, v tomto pořadí), 3 ul molekulární H2O a 5 ul DNA templátu. Každý vzorek byl testován v duplikátech, aby byla zajištěna reprodukovatelnost dat. Teplotní profil RT-PCR sestával z počáteční denaturace při 95 °C po dobu 10 minut, 45 amplifikačních cyklů při 95 °C po dobu 10 sekund, 60 °C po dobu 30 sekund a 72 °C po dobu 1 sekundy s následným konečným chlazením při 40 °C po dobu 30 sekund. Absolutní kvantifikace byla provedena pomocí „metody druhého derivačního maxima“

Statistické analýzy: Wilcoxonův znaménkový test byl použit k porovnání koncentrací probiotických druhů v průběhu časového průběhu.