Kolonisering og persistenskapacitet af en multi-stamme probiotika i pædiatrisk fødevareallergi over for mælk eller æg.

Denne undersøgelse evaluerer koloniseringskapaciteten af ​​tre probiotika (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve og Bifidobacterium infantis) i mælke- og/eller ægallergiske børn.

Det forventes rekruttering af omkring 20 æg- og/eller mælkeallergiske patienter i alderen mellem 10 og 14 måneder, bekræftet med dobbeltblind oral tolerancetest mod placebo (Gruppe 1).

Endvidere rekrutteres omkring 10 patienter, der er følsomme over for mælk eller æg, men ikke bekræftet med dobbeltblind oral tolerancetest mod placebo (Gruppe 2), og omkring 10 raske individer (Gruppe 3).

For alle 40 patienter:

1. Baseline tilstedeværelsen af ​​Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V og Bifidobacterium infantis M-63 vil blive evalueret;

   Kun for gruppe 1 børn vil det også blive evalueret:

2. Tilstedeværelsen af ​​de samme stammer under 30 dages administration af multi-stamme probiotika indeholdende 3,5 x 109 UFC af Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V og Bifidobacterium infantis M-63 og efter 60 dage fra suspensionen af ​​administrationen.

Kvantificering af B. breve, B. longum subsp. longum og B. longum subsp. infantis i fæcesprøver blev udført ved qRT-PCR under anvendelse af Light Cycler 480 platformen (Roche Diagnostics, Mannheim, Tyskland). Assayene blev udført med en 20 µl PCR-amplifikationsblanding indeholdende: 10 µl LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl primere og prober (optimerede koncentrationer, henholdsvis 0,5 µM og 0,1 µM), 3 µl H2O-molekylær og gradueret 5 µl DNA-skabelon. Hver prøve blev testet i to eksemplarer for at sikre datareproducerbarhed. RT-PCR-temperaturprofilen bestod af en indledende denaturering ved 95°C i 10 minutter, 45 amplifikationscyklusser ved 95°C i 10 sekunder, 60°C i 30 sekunder og 72°C i 1 sekund efterfulgt af et sidste afkølingstrin kl. 40°C i 30 sek. Absolut kvantificering blev udført ved hjælp af "anden afledte maksimum metode"

Statistiske analyser: Wilcoxon signed-rank test blev brugt til at sammenligne koncentrationer af probiotiske arter i løbet af tidsforløbet.