Kolonisering og utholdenhetskapasitet til en multi-stamme probiotika i pediatrisk matallergi mot melk eller egg.

Denne studien evaluerer koloniseringskapasiteten til tre probiotika (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve og Bifidobacterium infantis) hos melke- og/eller eggallergiske barn.

Det forventes rekruttering av ca. 20 egg- og/eller melkeallergiske pasienter i alderen 10 til 14 måneder gamle bekreftet med dobbeltblind oral toleransetest mot placebo (gruppe 1).

Videre vil ca. 10 pasienter som er følsomme for melk eller egg, men ikke bekreftet med dobbeltblind oral toleransetest mot placebo (gruppe 2) rekrutteres og ca. 10 friske individer (gruppe 3).

For alle 40 pasienter:

1. Baseline tilstedeværelse av Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V og Bifidobacterium infantis M-63 vil bli evaluert;

   Bare for gruppe 1-barn vil det også bli evaluert:

2. Tilstedeværelsen av de samme stammene i løpet av 30 dager med administrering av multi-stamme probiotika som inneholder 3,5 x 109 UFC av Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V og Bifidobacterium infantis M-63 og etter 60 dager etter suspensjon av administreringen.

Kvantifisering av B. breve, B. longum subsp. longum og B. longum subsp. infantis i avføringsprøver ble utført ved qRT-PCR ved bruk av Light Cycler 480-plattformen (Roche Diagnostics, Mannheim, Tyskland). Analysene ble utført med en 20 µl PCR-amplifikasjonsblanding som inneholdt: 10 µl LightCycler 480 Probe Master-blanding (Roche Diagnostics), 2 µl primere og prober (optimaliserte konsentrasjoner, henholdsvis 0,5 µM og 0,1 µM), 3 µl H2O-molekylær og gradert 5 ul DNA-mal. Hver prøve ble testet i duplikat for å sikre datareproduserbarhet. RT-PCR-temperaturprofilen besto av en innledende denaturering ved 95 °C i 10 minutter, 45 amplifikasjonssykluser ved 95 °C i 10 sekunder, 60 °C i 30 sekunder og 72 °C i 1 sekunder etterfulgt av et siste avkjølingstrinn kl. 40°C i 30 sek. Absolutt kvantifisering ble utført ved bruk av "andre deriverte maksimumsmetoden"

Statistiske analyser: Wilcoxon signed-rank test ble brukt til å sammenligne konsentrasjoner av probiotiske arter i løpet av tidsforløpet.