Способность к колонизации и стойкости мультиштаммовых пробиотиков при детской пищевой аллергии на молоко или яйца.

В этом исследовании оценивается колонизирующая способность трех пробиотиков (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve и Bifidobacterium infantis) у детей с аллергией на молоко и/или яйца.

Ожидается набор около 20 пациентов с аллергией на яйца и/или молоко в возрасте от 10 до 14 месяцев, подтвержденных двойным слепым пероральным тестом на переносимость по сравнению с плацебо (группа 1).

Кроме того, будут набраны около 10 пациентов, чувствительных к молоку или яйцам, но не подтвержденных двойным слепым тестом на пероральную переносимость по сравнению с плацебо (группа 2), и около 10 здоровых лиц (группа 3).

Для всех 40 пациентов:

1. Будет оцениваться базовое присутствие Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V и Bifidobacterium infantis M-63;

   Только для детей 1 группы также будет оцениваться:

2. Наличие тех же штаммов в течение 30 дней введения мультиштаммовых пробиотиков, содержащих 3,5 х 109 UFC Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V и Bifidobacterium infantis M-63, и через 60 дней после прекращения введения.

Количественное определение B. breve, B. longum subsp. longum и B. longum subsp. infantis в образцах фекалий проводили с помощью qRT-PCR с использованием платформы Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Мангейм, Германия). Анализы проводились с использованием 20 мкл смеси для ПЦР-амплификации, содержащей: 10 мкл LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 мкл праймеров и зондов (оптимизированные концентрации, 0,5 мкМ и 0,1 мкМ соответственно), 3 мкл молекулярной чистоты H2O и Шаблон ДНК 5 мкл. Каждый образец был протестирован в двух экземплярах для обеспечения воспроизводимости данных. Температурный профиль ОТ-ПЦР состоял из начальной денатурации при 95°С в течение 10 мин, 45 циклов амплификации при 95°С в течение 10 с, 60°С в течение 30 с и 72°С в течение 1 с с последующим окончательным этапом охлаждения при 40°C в течение 30 сек. Абсолютную количественную оценку проводили с использованием «метода максимума второй производной».

Статистический анализ. Критерий знакового ранга Уилкоксона использовался для сравнения концентраций пробиотических видов в течение времени.