Capacidade de Colonização e Persistência de Probióticos Multiestirpes na Alergia Alimentar Pediátrica ao Leite ou Ovo.

Este estudo avalia a capacidade de colonização de três probióticos (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve e Bifidobacterium infantis) em crianças alérgicas ao leite e/ou ovo.

Prevê-se o recrutamento de cerca de 20 doentes alérgicos ao ovo e/ou leite com idades compreendidas entre os 10 e os 14 meses confirmados com teste de tolerância oral duplo-cego contra placebo (Grupo 1).

Além disso, serão recrutados cerca de 10 pacientes sensíveis ao leite ou ovo, mas não confirmados com teste de tolerância oral duplo-cego contra placebo (Grupo 2) e cerca de 10 indivíduos saudáveis ​​(Grupo 3).

Para todos os 40 pacientes:

1. Será avaliada a presença basal de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V e Bifidobacterium infantis M-63;

   Apenas para as crianças do Grupo 1 será também avaliado:

2. A presença das mesmas cepas durante 30 dias de administração de probióticos multicepas contendo 3,5 x 109 UFC de Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V e Bifidobacterium infantis M-63 e após 60 dias da suspensão da administração.

Quantificação de B. breve, B. longum subsp. longum e B. longum subsp. infantis em amostras fecais foi realizada por qRT-PCR usando a plataforma Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Alemanha). Os ensaios foram realizados com uma mistura de amplificação por PCR de 20 µl contendo: 10 µl LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl de primers e sondas (concentrações otimizadas, 0,5 µM e 0,1 µM, respectivamente), 3 µl de H2O de grau molecular e 5 µl de molde de ADN. Cada amostra foi testada em duplicata para garantir a reprodutibilidade dos dados. O perfil de temperatura RT-PCR consistiu em uma desnaturação inicial a 95°C por 10 minutos, 45 ciclos de amplificação a 95°C por 10 segundos, 60°C por 30 segundos e 72°C por 1 segundo seguido por uma etapa final de resfriamento a 40°C por 30 seg. A quantificação absoluta foi realizada usando o "método da segunda derivada máxima"

Análises estatísticas: O teste de postos sinalizados de Wilcoxon foi usado para comparar as concentrações de espécies probióticas durante o período de tempo.