Zdolność do kolonizacji i trwałości wieloszczepowych probiotyków w pediatrycznej alergii pokarmowej na mleko lub jaja.

Niniejsze badanie ocenia zdolność kolonizacji trzech probiotyków (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve i Bifidobacterium infantis) u dzieci z alergią na mleko i/lub jaja.

Oczekuje się, że rekrutacja około 20 pacjentów z alergią na jajka i/lub mleko w wieku od 10 do 14 miesięcy zostanie potwierdzona doustnym testem tolerancji z podwójnie ślepą próbą na placebo (Grupa 1).

Ponadto zostanie zrekrutowanych około 10 pacjentów wrażliwych na mleko lub jaja, ale niepotwierdzonych doustnym testem tolerancji na placebo z podwójnie ślepą próbą (Grupa 2) oraz około 10 zdrowych osób (Grupa 3).

Dla wszystkich 40 pacjentów:

1. Oceniona zostanie wyjściowa obecność Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V i Bifidobacterium infantis M-63;

   Tylko dla dzieci z Grupy 1 oceniane będą również:

2. Obecność tych samych szczepów w ciągu 30 dni podawania probiotyków wieloszczepowych zawierających 3,5 x 109 UFC Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V i Bifidobacterium infantis M-63 oraz po 60 dniach od zaprzestania podawania.

Kwantyfikacja B. breve, B. longum subsp. longum i B. longum subsp. infantis w próbkach kału przeprowadzono metodą qRT-PCR przy użyciu platformy Light Cycler 480 (Roche Diagnostics, Mannheim, Niemcy). Testy wykonano z 20 µl mieszaniny do amplifikacji PCR zawierającej: 10 µl LightCycler 480 Probe Master mix (Roche Diagnostics), 2 µl starterów i sond (zoptymalizowane stężenia, odpowiednio 0,5 µM i 0,1 µM), 3 µl H2O klasy molekularnej i 5 ul matrycy DNA. Każdą próbkę badano w dwóch powtórzeniach, aby zapewnić powtarzalność danych. Profil temperaturowy RT-PCR składał się z początkowej denaturacji w 95°C przez 10 min, 45 cykli amplifikacji w 95°C przez 10 s, 60°C przez 30 s i 72°C przez 1 s, a następnie końcowy etap chłodzenia w 40°C przez 30 sek. Kwantyfikacja bezwzględna została przeprowadzona przy użyciu „metody maksimum drugiej pochodnej”

Analizy statystyczne: Do porównania stężeń gatunków probiotycznych w czasie zastosowano test rangowania Wilcoxona.