Kolonisatie en persistentiecapaciteit van een multi-stam probiotica bij pediatrische voedselallergie voor melk of eieren.

Deze studie evalueert de kolonisatiecapaciteit van drie probiotica (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve en Bifidobacterium infantis) bij kinderen die allergisch zijn voor melk en/of eieren.

Verwacht wordt dat de rekrutering van ongeveer 20 ei- en/of melkallergische patiënten tussen 10 en 14 maanden oud zal worden bevestigd met een dubbelblinde orale tolerantietest tegen placebo (Groep 1).

Bovendien zullen ongeveer 10 patiënten die gevoelig zijn voor melk of ei, maar niet bevestigd met een dubbelblinde orale tolerantietest tegen placebo (groep 2) worden gerekruteerd en ongeveer 10 gezonde personen (groep 3).

Voor alle 40 patiënten:

1. Baseline-aanwezigheid van Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V en Bifidobacterium infantis M-63 zal worden geëvalueerd;

   Alleen voor kinderen van groep 1 wordt ook beoordeeld:

2. De aanwezigheid van dezelfde stammen gedurende 30 dagen na toediening van probiotica met meerdere stammen die 3,5 x 109 UFC van Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V en Bifidobacterium infantis M-63 bevatten en na 60 dagen na stopzetting van de toediening.

Kwantificering van B. breve, B. longum subsp. longum en B. longum subsp. infantis in fecale monsters werd uitgevoerd door qRT-PCR met behulp van het Light Cycler 480-platform (Roche Diagnostics, Mannheim, Duitsland). De assays werden uitgevoerd met een 20 µl PCR-amplificatiemengsel met daarin: 10 µl LightCycler 480 Probe Master-mix (Roche Diagnostics), 2 µl primers en probes (geoptimaliseerde concentraties, respectievelijk 0,5 µM en 0,1 µM), 3 µl H2O van moleculaire kwaliteit en 5 µl DNA-template. Elk monster werd in tweevoud getest om de reproduceerbaarheid van de gegevens te garanderen. Het RT-PCR-temperatuurprofiel bestond uit een initiële denaturatie bij 95°C gedurende 10 min, 45 amplificatiecycli bij 95°C gedurende 10 sec, 60°C gedurende 30 sec en 72°C gedurende 1 sec gevolgd door een laatste koelstap bij 40°C gedurende 30 sec. Absolute kwantificering werd uitgevoerd met behulp van de "tweede afgeleide maximale methode"

Statistische analyses: de Wilcoxon-test met ondertekende rang werd gebruikt om de concentraties van probiotische soorten gedurende het tijdsverloop te vergelijken.