Kolonisering och uthållighetskapacitet hos probiotika med flera stammar vid pediatrisk födoämnesallergi mot mjölk eller ägg.

Denna studie utvärderar kolonisationskapaciteten hos tre probiotika (Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve och Bifidobacterium infantis) hos mjölk- och/eller äggallergiska barn.

Det förväntas rekrytering av cirka 20 ägg- och/eller mjölkallergiska patienter i åldern mellan 10 och 14 månader bekräftade med dubbelblind oralt toleranstest mot placebo (Grupp 1).

Vidare kommer cirka 10 patienter som är känsliga för mjölk eller ägg men inte bekräftade med dubbelblind oralt toleranstest mot placebo (Grupp 2) att rekryteras och cirka 10 friska individer (Grupp 3).

För alla 40 patienter:

1. Baslinjenärvaro av Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V och Bifidobacterium infantis M-63 kommer att utvärderas;

   Endast för barn i grupp 1 kommer det också att utvärderas:

2. Närvaron av samma stammar under 30 dagars administrering av probiotika av flera stammar innehållande 3,5 x 109 UFC av Bifidobacterium longum BB536, Bifidobacterium breve M-16V och Bifidobacterium infantis M-63 och efter 60 dagar från upphävandet av administreringen.

Kvantifiering av B. breve, B. longum subsp. longum och B. longum subsp. infantis i fekala prover utfördes med qRT-PCR med användning av Light Cycler 480-plattformen (Roche Diagnostics, Mannheim, Tyskland). Analyserna utfördes med en 20 µl PCR-amplifieringsblandning innehållande: 10 µl LightCycler 480 Probe Master-mix (Roche Diagnostics), 2 µl primers och prober (optimerade koncentrationer, 0,5 µM respektive 0,1 µM), 3 µl H2O-molekylär och molekylär 5 ul DNA-mall. Varje prov testades i duplikat för att säkerställa datareproducerbarhet. RT-PCR-temperaturprofilen bestod av en initial denaturering vid 95°C under 10 minuter, 45 amplifieringscykler vid 95°C i 10 sekunder, 60°C i 30 sekunder och 72°C under 1 sek följt av ett sista nedkylningssteg vid 40°C i 30 sek. Absolut kvantifiering utfördes med "andra derivatans maximala metod"

Statistiska analyser: Wilcoxon signed-rank test användes för att jämföra koncentrationer av probiotiska arter under tidsförloppet.