Rôle de la PCR Multiplex dans le CAP

La pneumonie reste un problème de santé mondial avec un taux élevé de morbidité et de mortalité. L'identification des agents pathogènes microbiens responsables de la pneumonie est un domaine important pour une prise en charge clinique optimale des patients atteints de pneumonie et constitue un défi majeur pour les méthodes microbiologiques conventionnelles. Le développement et la mise en œuvre de tests de diagnostic moléculaire de la pneumonie ont constitué une avancée majeure dans le diagnostic microbiologique des pathogènes respiratoires ces dernières années. Sélection ciblée d'antibiotiques, désescalade plus efficace et meilleure gestion des patients atteints de pneumonie.

La PCR est un test enzymatique simple mais élégant, qui permet l'amplification d'un fragment d'ADN spécifique à partir d'un pool complexe d'ADN. Seules des traces d’ADN sont nécessaires pour que la PCR génère suffisamment de copies pour être analysées à l’aide des méthodes de laboratoire conventionnelles. Pour cette raison, la PCR est un test sensible.

Chaque test PCR nécessite la présence d'une matrice d'ADN, d'amorces, de nucléotides et d'ADN polymérase. L'ADN polymérase est l'enzyme clé qui relie les nucléotides individuels entre eux pour former le produit PCR. Les nucléotides comprennent les quatre bases – adénine, thymine, cytosine et guanine (A, T, C, G) – présentes dans l'ADN. Ceux-ci agissent comme des éléments de base utilisés par l’ADN polymérase pour créer le produit PCR résultant. Les amorces de la réaction spécifient le produit ADN exact à amplifier. Les amorces sont de courts fragments d'ADN avec une séquence définie complémentaire de l'ADN cible qui doit être détecté et amplifié. Ceux-ci servent de point d’extension sur lequel l’ADN polymérase peut s’appuyer. La PCR présente de multiples avantages. Premièrement, c’est une technique simple à comprendre et à utiliser, et elle produit des résultats rapidement. Il s’agit d’une technique très sensible susceptible de produire des millions, voire des milliards de copies d’un produit spécifique à des fins de séquençage, de clonage et d’analyse. Bien que la PCR soit une technique intéressante, elle présente des limites. La PCR étant une technique très sensible, toute forme de contamination de l’échantillon par même des traces d’ADN peut produire des résultats trompeurs. De plus, afin de concevoir des amorces pour la PCR, certaines données de séquence préalables sont nécessaires. Par conséquent, la PCR ne peut être utilisée que pour identifier la présence ou l’absence d’un agent pathogène ou d’un gène connu.