Rolle der Multiplex-PCR in der CAP

Lungenentzündung bleibt ein weltweites Gesundheitsproblem mit einer hohen Morbiditäts- und Mortalitätsrate. Die Identifizierung mikrobieller Krankheitserreger, die eine Lungenentzündung verursachen, ist ein wichtiger Bereich für die optimale klinische Behandlung von Lungenentzündungspatienten und stellt eine große Herausforderung für herkömmliche mikrobiologische Methoden dar. Die Entwicklung und Implementierung molekulardiagnostischer Tests für Lungenentzündungen war in den letzten Jahren ein großer Fortschritt in der mikrobiologischen Diagnostik von Atemwegserregern. Gezielte Antibiotikaauswahl und effektivere Deeskalation sowie verbesserte Betreuung von Lungenentzündungspatienten.

PCR ist ein einfacher, aber eleganter enzymatischer Assay, der die Amplifikation eines spezifischen DNA-Fragments aus einem komplexen DNA-Pool ermöglicht. Für die PCR werden nur Spurenmengen an DNA benötigt, um genügend Kopien für die Analyse mit herkömmlichen Labormethoden zu erzeugen. Aus diesem Grund ist die PCR ein empfindlicher Test.

Jeder PCR-Assay erfordert das Vorhandensein von Template-DNA, Primern, Nukleotiden und DNA-Polymerase. Die DNA-Polymerase ist das Schlüsselenzym, das einzelne Nukleotide miteinander verknüpft, um das PCR-Produkt zu bilden. Zu den Nukleotiden gehören die vier Basen – Adenin, Thymin, Cytosin und Guanin (A, T, C, G), die in der DNA vorkommen. Diese dienen als Bausteine, die von der DNA-Polymerase zur Herstellung des resultierenden PCR-Produkts verwendet werden. Die Primer in der Reaktion geben das genaue DNA-Produkt an, das amplifiziert werden soll. Bei den Primern handelt es sich um kurze DNA-Fragmente mit einer definierten Sequenz, die komplementär zur Ziel-DNA ist, die nachgewiesen und amplifiziert werden soll. Diese dienen als Verlängerungspunkt für die DNA-Polymerase, auf dem sie aufbauen kann. Die PCR bietet mehrere Vorteile. Erstens ist es eine einfach zu verstehende und anzuwendende Technik, die schnell zu Ergebnissen führt. Es handelt sich um eine hochempfindliche Technik mit dem Potenzial, Millionen bis Milliarden Kopien eines bestimmten Produkts für die Sequenzierung, Klonierung und Analyse herzustellen. Obwohl die PCR eine wertvolle Technik ist, weist sie doch Einschränkungen auf. Da es sich bei der PCR um eine hochempfindliche Technik handelt, kann jede Form der Kontamination der Probe durch selbst Spuren von DNA zu irreführenden Ergebnissen führen. Darüber hinaus sind zum Entwerfen von Primern für die PCR einige vorherige Sequenzdaten erforderlich. Daher kann die PCR nur verwendet werden, um das Vorhandensein oder Fehlen eines bekannten Krankheitserregers oder Gens festzustellen