Papel de la PCR multiplex en CAP

La neumonía sigue siendo un problema de salud mundial con una alta tasa de morbilidad y mortalidad. La identificación de patógenos microbianos que causan neumonía es un área importante para el manejo clínico óptimo de los pacientes con neumonía y es un gran desafío para los métodos microbiológicos convencionales. El desarrollo e implementación de pruebas de diagnóstico molecular de neumonía ha supuesto un gran avance en el diagnóstico microbiológico de patógenos respiratorios en los últimos años. Selección específica de antibióticos, reducción más eficaz y mejor gestión de los pacientes con neumonía.

La PCR es un ensayo enzimático simple pero elegante que permite la amplificación de un fragmento de ADN específico a partir de un conjunto complejo de ADN. Sólo se necesitan trazas de ADN para que la PCR genere copias suficientes para analizarlas utilizando métodos de laboratorio convencionales. Por este motivo, la PCR es un ensayo sensible.

Cada ensayo de PCR requiere la presencia de ADN molde, cebadores, nucleótidos y ADN polimerasa. La ADN polimerasa es la enzima clave que une los nucleótidos individuales para formar el producto de PCR. Los nucleótidos incluyen las cuatro bases (adenina, timina, citosina y guanina (A, T, C, G)) que se encuentran en el ADN. Estos actúan como componentes básicos que utiliza la ADN polimerasa para crear el producto de PCR resultante. Los cebadores de la reacción especifican el producto de ADN exacto que se va a amplificar. Los cebadores son fragmentos cortos de ADN con una secuencia definida complementaria al ADN objetivo que se va a detectar y amplificar. Estos sirven como un punto de extensión para que se desarrolle la ADN polimerasa. La PCR tiene múltiples ventajas. En primer lugar, es una técnica sencilla de comprender y utilizar, y produce resultados rápidamente. Es una técnica altamente sensible con el potencial de producir de millones a miles de millones de copias de un producto específico para secuenciación, clonación y análisis. Aunque la PCR es una técnica valiosa, tiene limitaciones. Debido a que la PCR es una técnica altamente sensible, cualquier forma de contaminación de la muestra incluso con cantidades mínimas de ADN puede producir resultados engañosos. Además, para diseñar cebadores para PCR, se necesitan algunos datos de secuencia previos. Por lo tanto, la PCR sólo se puede utilizar para identificar la presencia o ausencia de un patógeno o gen conocido.