Papel do PCR Multiplex no CAP

A pneumonia continua sendo um problema de saúde mundial com alta taxa de morbidade e mortalidade. A identificação de patógenos microbianos que causam pneumonia é uma área importante para o manejo clínico ideal de pacientes com pneumonia e é um grande desafio para os métodos microbiológicos convencionais. O desenvolvimento e implementação de testes de diagnóstico molecular para pneumonia tem sido um grande avanço no diagnóstico microbiológico de patógenos respiratórios nos últimos anos. Seleção direcionada de antibióticos e desescalonamento mais eficaz e melhor gestão para pacientes com pneumonia.

PCR é um ensaio enzimático simples, mas elegante, que permite a amplificação de um fragmento específico de DNA a partir de um pool complexo de DNA. Apenas vestígios de DNA são necessários para que a PCR gere cópias suficientes para serem analisadas usando métodos laboratoriais convencionais. Por esta razão, a PCR é um ensaio sensível.

Cada ensaio de PCR requer a presença de DNA modelo, primers, nucleotídeos e DNA polimerase. A DNA polimerase é a enzima chave que une nucleotídeos individuais para formar o produto de PCR. Os nucleotídeos incluem as quatro bases – adenina, timina, citosina e guanina (A, T, C, G) – encontradas no DNA. Eles atuam como blocos de construção usados ​​pela DNA polimerase para criar o produto de PCR resultante. Os iniciadores da reação especificam o produto exato de DNA a ser amplificado. Os iniciadores são fragmentos curtos de DNA com uma sequência definida complementar ao DNA alvo que será detectado e amplificado. Eles servem como um ponto de extensão para a construção da DNA polimerase. Existem múltiplas vantagens na PCR. Primeiro, é uma técnica simples de entender e usar, e produz resultados rapidamente. É uma técnica altamente sensível com potencial para produzir milhões a bilhões de cópias de um produto específico para sequenciamento, clonagem e análise. Embora a PCR seja uma técnica valiosa, ela apresenta limitações. Como a PCR é uma técnica altamente sensível, qualquer forma de contaminação da amostra, mesmo por vestígios de DNA, pode produzir resultados enganosos. Além disso, para projetar primers para PCR, são necessários alguns dados de sequência anteriores. Portanto, a PCR só pode ser usada para identificar a presença ou ausência de um patógeno ou gene conhecido.