Ruolo della PCR Multiplex nella PAC

La polmonite rimane un problema sanitario mondiale con un alto tasso di morbilità e mortalità. L'identificazione degli agenti patogeni microbici che causano la polmonite è un'area importante per la gestione clinica ottimale dei pazienti affetti da polmonite e rappresenta una grande sfida per i metodi microbiologici convenzionali. Negli ultimi anni lo sviluppo e l’implementazione di test diagnostici molecolari per la polmonite hanno rappresentato un importante progresso nella diagnosi microbiologica dei patogeni respiratori. Selezione mirata degli antibiotici, riduzione più efficace e migliore gestione dei pazienti affetti da polmonite.

La PCR è un test enzimatico semplice ma elegante, che consente l'amplificazione di uno specifico frammento di DNA da un complesso pool di DNA. Sono necessarie solo tracce di DNA affinché la PCR generi abbastanza copie da poter essere analizzate utilizzando metodi di laboratorio convenzionali. Per questo motivo, la PCR è un test sensibile.

Ciascun test PCR richiede la presenza di DNA modello, primer, nucleotidi e DNA polimerasi. La DNA polimerasi è l'enzima chiave che collega insieme i singoli nucleotidi per formare il prodotto PCR. I nucleotidi comprendono le quattro basi – adenina, timina, citosina e guanina (A, T, C, G) – che si trovano nel DNA. Questi fungono da elementi costitutivi utilizzati dalla DNA polimerasi per creare il prodotto PCR risultante. I primer nella reazione specificano l'esatto prodotto del DNA da amplificare. I primer sono brevi frammenti di DNA con una sequenza definita complementare al DNA target che deve essere rilevato e amplificato. Questi servono come punto di estensione su cui costruire la DNA polimerasi. La PCR presenta molteplici vantaggi. Innanzitutto è una tecnica semplice da comprendere e da utilizzare e produce risultati rapidamente. Si tratta di una tecnica altamente sensibile con il potenziale di produrre da milioni a miliardi di copie di un prodotto specifico per il sequenziamento, la clonazione e l'analisi. Sebbene la PCR sia una tecnica preziosa, presenta dei limiti. Poiché la PCR è una tecnica altamente sensibile, qualsiasi forma di contaminazione del campione anche da parte di tracce di DNA può produrre risultati fuorvianti. Inoltre, per progettare primer per la PCR, sono necessari alcuni dati di sequenza preliminari. Pertanto, la PCR può essere utilizzata solo per identificare la presenza o l'assenza di un agente patogeno o di un gene noto