Rôle de la barrière vasculaire intestinale et du microbiote dans les troubles du spectre autistique (DSA/GVB)

La présence de symptômes gastro-intestinaux sera évaluée au recrutement (T0) à l'aide de l'Indice de Sévérité Gastro-Intestinale.

Les sujets recrutés seront traités avec le complément alimentaire à base de postbiotiques, PostbiotiX Comfort®, une fois par jour pendant 1 mois.

L'Indice de Sévérité Gastro-Intestinale sera répété dans la semaine suivant la fin du traitement (T1) pour quantifier les changements dans la régulation intestinale et un mois après la fin du traitement (T2) pour évaluer la stabilité des changements observés.

Des évaluations comportementales standardisées seront réalisées via des questionnaires rapportés par les parents/soignants pour évaluer les effets de la supplémentation en postbiotiques sur la régulation du sommeil. Les troubles du sommeil seront évalués à l'aide d'instruments validés conçus pour étudier les difficultés liées à l'endormissement et au maintien du sommeil, les troubles respiratoires du sommeil, les troubles de l'éveil, la transition veille-sommeil, la somnolence diurne excessive et l'hyperhidrose nocturne.

La régulation du sommeil sera évaluée à l'aide de la version italienne de l'échelle des troubles du sommeil pour enfants. L'échelle comprend 26 items notés sur une échelle de Likert en 5 points (1 = jamais ; 2 = occasionnellement ; 3 = parfois ; 4 = souvent ; 5 = toujours). Le score brut total varie de 26 à 130, les scores plus élevés indiquant une plus grande sévérité des troubles du sommeil.

Les évaluations seront réalisées à trois moments : le point de départ (T0), lors de l'inclusion dans l'étude interventionnelle ; après le traitement (T1), dans la semaine suivant la fin du traitement ; et le suivi (T

Des évaluations comportementales standardisées seront réalisées au moyen de questionnaires rapportés par les parents/soignants pour évaluer les effets de la supplémentation en postbiotiques sur la régulation comportementale. La régulation émotionnelle et comportementale sera évaluée à l'aide d'instruments validés conçus pour étudier la présence et la sévérité des problèmes émotionnels et comportementaux, y compris les symptômes internalisés et externalisés.

Les problèmes comportementaux et émotionnels seront évalués en utilisant les versions italiennes de la Child Behavior Checklist (CBCL) selon l'âge. L'instrument se compose d'items évalués sur une échelle de Likert à 3 points (0 = pas vrai ; 1 = un peu ou parfois vrai ; 2 = très vrai ou souvent vrai). Des scores plus élevés indiquent une plus grande sévérité des problèmes émotionnels et comportementaux. Les scores bruts seront convertis en scores T standardisés (moyenne = 50, écart type = 10).

Les évaluations seront réalisées à trois moments : au départ (T0), lors de l'inclusion dans l'étude interventionnelle ; après le traitement (T1)

Des évaluations comportementales standardisées seront réalisées via des questionnaires rapportés par les parents/soignants afin d'évaluer les effets de la supplémentation en postbiotiques sur le profil sensoriel.

Le profil sensoriel sera évalué à l'aide du Sensory Profile-2 (version italienne), rempli par les parents/soignants pour les enfants âgés de 3 à 8 ans. Le questionnaire évalue le fonctionnement sensoriel, les réponses comportementales d'autorégulation et la fréquence des réponses comportementales aux stimuli sensoriels environnementaux. Les scores bruts sont calculés pour chaque domaine sensoriel ; des scores plus élevés indiquent une plus grande déviation par rapport aux schémas typiques de traitement sensoriel.

Les évaluations seront effectuées à trois moments : au départ (T0), lors de l'inclusion dans l'étude interventionnelle ; post-traitement (T1), dans la semaine suivant la fin du traitement ; et suivi (T2), dans le mois suivant la fin du traitement pour évaluer la stabilité des changements observés. Tous les questionnaires remplis par les parents/soignants seront ensuite discutés avec

Des échantillons fécaux ont été obtenus auprès de sujets témoins et d'enfants atteints de TSA avec et sans symptômes gastro-intestinaux. Pour ce dernier groupe, les échantillons seront collectés à la fois avant le début du traitement par compléments (T0) et après le traitement (T1).

Le profilage taxonomique et fonctionnel du microbiote fécal sera réalisé par séquençage métagénomique shotgun superficiel. L'ADN bactérien total sera extrait des échantillons fécaux et séquencé sur des plateformes Illumina. Les analyses taxonomiques seront effectuées à la résolution des bacs de génomes au niveau de l'espèce (SGB) (8ème rang taxonomique). Les analyses fonctionnelles seront basées sur les abondances désagrégées de familles de gènes et de voies métaboliques, avec une annotation des voies réalisée contre la base de données MetaCyc. Des analyses d'abondance différentielle (DAAs) seront effectuées sur les profils taxonomiques exprimés en abondances relatives et sur les profils de familles de gènes et de voies normalisés en copies par million (CPM). Unité de mesure : Abondance relative des taxons bactériens (%)

Les tests de laboratoire suivants seront effectués sur des échantillons fécaux obtenus à partir de sujets témoins et d'enfants avec TSA avec et sans symptômes gastro-intestinaux. Pour ce dernier groupe, les échantillons seront collectés à la fois avant le début de la thérapie par suppléments (T0) et après le traitement (T1). Une analyse métabolomique non ciblée sera réalisée sur les échantillons fécaux pour identifier les métabolites d'origine bactérienne. Les métabolites seront détectés et quantifiés en utilisant la chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS) et la chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS), suivies d'une analyse bioinformatique.

Unité de mesure :

• Abondance relative ou absolue des métabolites (intensité de pic normalisée/concentration)

Les tests de laboratoire suivants seront effectués sur des échantillons fécaux obtenus à partir de sujets témoins et d'enfants atteints de TSA avec et sans symptômes gastro-intestinaux. Pour ce dernier groupe, les échantillons seront collectés à la fois avant le début de la thérapie par suppléments (T0) et après le traitement (T1). La perméabilité intestinale sera évaluée en quantifiant les taux fécaux de zonuline et d'albumine à l'aide de dosages immuno-enzymatiques (ELISA) disponibles dans le commerce. Des taux fécaux élevés de zonuline seront interprétés comme indicateurs de désassemblage des jonctions serrées et d'augmentation de la perméabilité épithéliale. Des concentrations fécales élevées d'albumine seront interprétées comme un marqueur de dysfonctionnement de la barrière intestinale associé à une fuite inflammatoire à travers la muqueuse intestinale. Les deux biomarqueurs seront analysés comme indicateurs d'une perméabilité intestinale altérée et de l'intégrité de la barrière intestinale.

Unité de mesure :

• Peptides de la famille de la zonuline : concentration (par exemple, ng/mL ou ng/g de matières fécales)
• Albumine : concentration (par exemple, ng/mL)

Des analyses de corrélation seront réalisées pour étudier les relations entre les profils métagénomiques et métabolomiques et les résultats comportementaux et gastro-intestinaux chez les enfants atteints de TSA. Cette analyse initiale permettra d'identifier les associations significatives entre la diversité microbienne, l'abondance des métabolites et les mesures cliniques potentiellement modulées par le traitement postbiotique.

Les données métagénomiques, métabolomiques et de perméabilité intestinale seront ensuite intégrées aux résultats comportementaux en utilisant des approches computationnelles multi-omiques avancées. Après normalisation et harmonisation des données via des pipelines standardisés, les ensembles de données métagénomiques et métabolomiques seront combinés en utilisant des stratégies d'intégration basées sur des réseaux et des méthodes multivariées, incluant l'Analyse Canonique des Corrélations (CCA), les Moindres Carrés Partiels Épars (sPLS) et l'Analyse Factorielle Multi-Omiques (MOFA), pour identifier les signatures fonctionnelles partagées, les interactions clés microbiennes-métaboliques et les voies convergentes entre les ensembles de données.

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