Роль кишечного сосудистого барьера и микробиоты в расстройствах аутистического спектра (DSA/GVB)

Наличие желудочно-кишечных симптомов будет оцениваться при включении в исследование (T0) с использованием Индекса тяжести ЖКТ.

Участники, включенные в исследование, будут получать пищевую добавку на основе постбиотиков PostbiotiX Comfort® один раз в день в течение 1 месяца.

Индекс тяжести ЖКТ будет повторно измерен в течение одной недели после окончания лечения (T1) для количественной оценки изменений в регуляции работы кишечника и через один месяц после окончания лечения (T2) для оценки стабильности наблюдаемых изменений.

Стандартизированные поведенческие оценки будут проводиться с помощью анкет, заполняемых родителями/опекунами, для оценки влияния приема постбиотиков на регуляцию сна. Нарушения сна будут оцениваться с помощью валидированных инструментов, предназначенных для исследования трудностей, связанных с засыпанием и поддержанием сна, респираторными нарушениями сна, расстройствами пробуждения, переходом от бодрствования ко сну, чрезмерной дневной сонливостью и ночным гипергидрозом.

Регуляция сна будет оцениваться с использованием итальянской версии Шкалы нарушений сна у детей. Шкала состоит из 26 пунктов, оцениваемых по 5-балльной шкале Лайкерта (1 = никогда; 2 = иногда; 3 = время от времени; 4 = часто; 5 = всегда). Общий сырой балл варьируется от 26 до 130, причем более высокие баллы указывают на большую тяжесть нарушений сна.

Оценки будут проводиться в три временные точки: исходный уровень (T0) при включении в интервенционное исследование; после лечения (T1) в течение одной недели после окончания лечения; и последующее наблюдение (T

Стандартизированные поведенческие оценки будут проводиться с помощью анкет, заполняемых родителями/опекунами, для оценки влияния приема постбиотиков на поведенческую регуляцию. Эмоциональная и поведенческая регуляция будет оцениваться с помощью валидированных инструментов, предназначенных для исследования наличия и тяжести эмоциональных и поведенческих проблем, включая интернализирующие и экстернализирующие симптомы.

Поведенческие и эмоциональные проблемы будут оцениваться с использованием итальянских версий Опросника поведения детей (CBCL) в соответствии с возрастом. Инструмент состоит из пунктов, оцениваемых по 3-балльной шкале Лайкерта (0 = не соответствует; 1 = частично или иногда соответствует; 2 = полностью или часто соответствует). Более высокие баллы указывают на большую тяжесть эмоциональных и поведенческих проблем. Сырые баллы будут преобразованы в стандартизированные Т-баллы (среднее = 50, стандартное отклонение = 10).

Оценки будут проводиться в три временные точки: исходный уровень (T0), при включении в интервенционное исследование; после лечения (T1)

Стандартизированные поведенческие оценки будут проводиться с использованием анкет, заполняемых родителями/опекунами, для оценки влияния приема постбиотиков на сенсорный профиль.

Сенсорный профиль будет оцениваться с помощью Sensory Profile-2 (итальянская версия), который заполняется родителями/опекунами для детей в возрасте 3-8 лет. Анкета оценивает сенсорное функционирование, поведенческие реакции саморегуляции и частоту поведенческих реакций на сенсорные стимулы окружающей среды. Необработанные баллы рассчитываются для каждой сенсорной области; более высокие баллы указывают на большее отклонение от типичных паттернов сенсорной обработки.

Оценки будут проводиться в три временных точки: исходный уровень (T0) при включении в интервенционное исследование; после лечения (T1) в течение одной недели после окончания лечения; и контрольное наблюдение (T2) в течение одного месяца после окончания лечения для оценки стабильности наблюдаемых изменений. Все анкеты, заполненные родителями/опекунами, впоследствии будут обсуждаться с

Образцы фекалий были получены от контрольных субъектов и детей с РАС с желудочно-кишечными симптомами и без них. Для последней группы образцы будут собираться как до начала терапии добавками (T0), так и после лечения (T1).

Таксономическое и функциональное профилирование фекальной микробиоты будет выполнено с использованием неглубокого метагеномного секвенирования shotgun. Общая бактериальная ДНК будет экстрагирована из фекальных образцов и секвенирована на платформах Illumina. Таксономические анализы будут проводиться на уровне разрешения видовых геномных бин (SGB) (8-й таксономический ранг). Функциональные анализы будут основаны на дестратифицированной распространенности генов семейств и метаболических путей, с аннотацией путей по базе данных MetaCyc. Анализы дифференциальной распространенности (DAA) будут проводиться на таксономических профилях, выраженных в виде относительной распространенности, и на профилях генов семейств и путей, нормализованных до копий на миллион (CPM). Единица измерения: относительная распространенность бактериальных таксонов (%).

Следующие лабораторные исследования будут проводиться на образцах фекалий, полученных от контрольных субъектов и детей с РАС с желудочно-кишечными симптомами и без них. Для последней группы образцы будут собираться как до начала терапии добавками (T0), так и после лечения (T1). Ненаправленный метаболомный анализ будет проводиться на образцах фекалий для идентификации метаболитов бактериального происхождения. Метаболиты будут обнаружены и количественно определены с использованием жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) и газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС), с последующим биоинформатическим анализом.

Единица измерения:

• Относительное или абсолютное содержание метаболитов (нормализованная интенсивность пика/концентрация)

Следующие лабораторные исследования будут выполнены на образцах кала, полученных от контрольной группы и детей с РАС, как с желудочно-кишечными симптомами, так и без них. Для последней группы образцы будут собраны как до начала терапии добавками (T0), так и после лечения (T1). Кишечная проницаемость будет оценена путем количественного определения уровней зонулина и альбумина в кале с использованием коммерчески доступных иммуноферментных анализов (ИФА). Повышенные уровни зонулина в кале будут интерпретироваться как свидетельство разборки плотных контактов и увеличения эпителиальной проницаемости. Повышенные концентрации альбумина в кале будут интерпретироваться как маркер дисфункции кишечного барьера, связанной с воспалительной утечкой через слизистую оболочку кишечника. Оба биомаркера будут проанализированы как показатели изменённой кишечной проницаемости и целостности кишечного барьера.

Единица измерения:

• Пептиды семейства зонулина: концентрация (например, нг/мл или нг/г кала)
• Альбумин: концентрация (например, нг/мл)

Корреляционный анализ будет проведен для исследования взаимосвязей между метагеномными и метаболомными профилями и поведенческими и желудочно-кишечными исходами у детей с РАС. Этот первоначальный анализ позволит выявить значимые ассоциации между микробным разнообразием, содержанием метаболитов и клиническими показателями, потенциально модулируемыми постбиотическим лечением.

Затем метагеномные, метаболомные данные и данные о кишечной проницаемости будут интегрированы с поведенческими исходами с использованием передовых вычислительных мульти-омиксных подходов. После нормализации и гармонизации данных с помощью стандартизированных конвейеров метагеномные и метаболомные наборы данных будут объединены с использованием сетевых стратегий интеграции и многомерных методов, включая канонический корреляционный анализ (CCA), разреженный метод частичных наименьших квадратов (sPLS) и факторный анализ мульти-омиксных данных (MOFA), для выявления общих функциональных сигнатур, ключевых микробно-метаболических взаимодействий и конвергентных путей в различных наборах данных.

Перекрестный