Función de la Barrera Vascular Intestinal y la Microbiota en los Trastornos del Espectro Autista (DSA/GVB)

La presencia de síntomas gastrointestinales se evaluará en el reclutamiento (T0) utilizando el Índice de Gravedad Gastrointestinal.

Los sujetos reclutados serán tratados con el suplemento dietético basado en postbióticos, PostbiotiX Comfort®, una vez al día durante 1 mes.

El Índice de Gravedad Gastrointestinal se repetirá dentro de una semana después del final del tratamiento (T1) para cuantificar los cambios en la regulación intestinal y un mes después del final del tratamiento (T2) para evaluar la estabilidad de los cambios observados.

Se realizarán evaluaciones conductuales estandarizadas a través de cuestionarios reportados por padres/cuidadores para evaluar los efectos de la suplementación con postbióticos en la regulación del sueño. Las alteraciones del sueño se evaluarán mediante instrumentos validados diseñados para investigar dificultades relacionadas con el inicio y mantenimiento del sueño, alteraciones respiratorias del sueño, trastornos del despertar, transición vigilia-sueño, somnolencia diurna excesiva e hiperhidrosis nocturna.

La regulación del sueño se evaluará utilizando la versión italiana de la Escala de Alteraciones del Sueño para Niños. La escala consta de 26 ítems calificados en una escala Likert de 5 puntos (1 = nunca; 2 = ocasionalmente; 3 = a veces; 4 = frecuentemente; 5 = siempre). La puntuación bruta total oscila entre 26 y 130, donde puntuaciones más altas indican mayor gravedad de las alteraciones del sueño.

Las evaluaciones se realizarán en tres momentos: línea base (T0), al inicio del estudio de intervención; post-tratamiento (T1), dentro de la primera semana tras finalizar el tratamiento; y seguimiento (T

Se realizarán evaluaciones conductuales estandarizadas a través de cuestionarios reportados por padres/cuidadores para evaluar los efectos de la suplementación con posbióticos en la regulación conductual. La regulación emocional y conductual se evaluará mediante instrumentos validados diseñados para investigar la presencia y gravedad de problemas emocionales y conductuales, incluyendo síntomas internalizantes y externalizantes.

Los problemas conductuales y emocionales se evaluarán utilizando las versiones italianas de la Lista de Verificación de la Conducta Infantil (CBCL) según la edad. El instrumento consta de ítems calificados en una escala Likert de 3 puntos (0 = no es cierto; 1 = algo o a veces cierto; 2 = muy cierto o a menudo cierto). Puntuaciones más altas indican mayor gravedad de problemas emocionales y conductuales. Las puntuaciones brutas se convertirán en puntuaciones T estandarizadas (media = 50, desviación estándar = 10).

Las evaluaciones se realizarán en tres momentos: línea base (T0), al inicio del estudio de intervención; postratamiento (T1)

Se realizarán evaluaciones conductuales estandarizadas mediante cuestionarios reportados por padres/cuidadores para evaluar los efectos de la suplementación con postbióticos en el perfil sensorial.

El perfil sensorial se evaluará utilizando el Sensory Profile-2 (versión italiana), completado por padres/cuidadores para niños de 3 a 8 años. El cuestionario evalúa el funcionamiento sensorial, las respuestas conductuales de autorregulación y la frecuencia de las respuestas conductuales a los estímulos sensoriales ambientales. Se calculan puntuaciones brutas para cada dominio sensorial; puntuaciones más altas indican una mayor desviación de los patrones típicos de procesamiento sensorial.

Las evaluaciones se realizarán en tres momentos: línea base (T0), al inicio del estudio de intervención; postratamiento (T1), dentro de la semana siguiente al final del tratamiento; y seguimiento (T2), dentro del mes siguiente al final del tratamiento para evaluar la estabilidad de los cambios observados. Todos los cuestionarios completados por los padres/cuidadores se discutirán posteriormente con

Se obtendrán muestras fecales de sujetos de control y de niños con TEA con y sin síntomas gastrointestinales. Para el último grupo, las muestras se recogerán tanto antes del inicio de la terapia con suplementos (T0) como después del tratamiento (T1).

Se realizará un perfil taxonómico y funcional de la microbiota fecal mediante secuenciación metagenómica shotgun superficial. El ADN bacteriano total se extraerá de las muestras fecales y se secuenciará utilizando plataformas Illumina. Los análisis taxonómicos se realizarán con la resolución de Species-level Genome Bin (SGB) (8º rango taxonómico). Los análisis funcionales se basarán en las abundancias de familias de genes desestratificadas y de vías metabólicas, con la anotación de vías realizada contra la base de datos MetaCyc. Los análisis de abundancia diferencial (DAAs) se realizarán en perfiles taxonómicos expresados como abundancias relativas y en perfiles de familias de genes y vías normalizados a copias por millón (CPM) Unidad de medida: Abundancia relativa de taxones bacterianos (%)

Los siguientes análisis de laboratorio se realizarán en muestras fecales obtenidas de sujetos control y niños con TEA con y sin síntomas gastrointestinales. Para este último grupo, las muestras se recogerán tanto antes del inicio de la terapia con suplementos (T0) como después del tratamiento (T1). Se realizará un análisis metabolómico no dirigido en las muestras fecales para identificar metabolitos de origen bacteriano. Los metabolitos se detectarán y cuantificarán mediante cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) y cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS), seguido de análisis bioinformático.

Unidad de medida:

• Abundancia relativa o absoluta de metabolitos (intensidad de pico/concentración normalizada)

Se realizarán las siguientes pruebas de laboratorio en muestras fecales obtenidas de sujetos de control y niños con TEA con y sin síntomas gastrointestinales. Para el último grupo, las muestras se recogerán tanto antes del inicio de la terapia con suplementos (T0) como después del tratamiento (T1). La permeabilidad intestinal se evaluará cuantificando los niveles fecales de zonulina y albúmina utilizando ensayos de inmunoabsorción ligados a enzimas (ELISA) disponibles comercialmente. Los niveles elevados de zonulina fecal se interpretarán como indicativos del desensamblaje de las uniones estrechas y del aumento de la permeabilidad epitelial. Las concentraciones elevadas de albúmina fecal se interpretarán como un marcador de disfunción de la barrera intestinal asociada con la fuga inflamatoria a través de la mucosa intestinal. Ambos biomarcadores se analizarán como indicadores de permeabilidad intestinal alterada e integridad de la barrera intestinal.

Unidad de medida:

• Péptidos de la familia de la zonulina: concentración (por ejemplo, ng/mL o ng/g de heces)
• Albúmina: concentración (por ejemplo, ng/mL)

Se realizarán análisis de correlación para investigar las relaciones entre los perfiles metagenómicos y metabolómicos y los resultados conductuales y gastrointestinales en niños con TEA. Este análisis inicial permitirá la identificación de asociaciones significativas entre la diversidad microbiana, la abundancia de metabolitos y las medidas clínicas potencialmente moduladas por el tratamiento postbiótico.

Los datos metagenómicos, metabolómicos y de permeabilidad intestinal se integrarán luego con los resultados conductuales utilizando enfoques computacionales multi-ómicos avanzados. Tras la normalización y armonización de los datos mediante pipelines estandarizados, los conjuntos de datos metagenómicos y metabolómicos se combinarán utilizando estrategias de integración basadas en redes y métodos multivariados, incluidos el Análisis de Correlación Canónica (CCA), los Mínimos Cuadrados Parciales Dispersos (sPLS) y el Análisis Factorial Multi-Ómico (MOFA), para identificar firmas funcionales compartidas, interacciones microbianas-metabólicas clave y vías convergentes entre los conjuntos de datos.

Cruz