Rol van de Darmvasculaire Barrière en Microbiota in Autismespectrumstoornissen (DSA/GVB)

De aanwezigheid van gastro-intestinale symptomen zal bij rekrutering (T0) worden beoordeeld met behulp van de GI Severity Index.

Gerekruteerde proefpersonen zullen gedurende 1 maand eenmaal daags worden behandeld met het op postbiotica gebaseerde voedingssupplement PostbiotiX Comfort®.

De GI Severity Index zal binnen een week na het einde van de behandeling (T1) worden herhaald om veranderingen in de darmregulatie te kwantificeren en een maand na het einde van de behandeling (T2) om de stabiliteit van de waargenomen veranderingen te beoordelen.

Gestandaardiseerde gedragsbeoordelingen zullen worden uitgevoerd via door ouders/verzorgers gerapporteerde vragenlijsten om de effecten van postbiotische suppletie op slaapregulatie te evalueren. Slaapstoornissen zullen worden beoordeeld via gevalideerde instrumenten die zijn ontworpen om moeilijkheden met betrekking tot slaapaanvang en -onderhoud, respiratoire slaapstoornissen, opwindingsstoornissen, waak-slaapovergang, overmatige slaperigheid overdag en nachtelijke hyperhidrose te onderzoeken.

Slaapregulatie zal worden beoordeeld met behulp van de Italiaanse versie van de Sleep Disturbance Scale for Children. De schaal bestaat uit 26 items beoordeeld op een 5-punts Likertschaal (1 = nooit; 2 = af en toe; 3 = soms; 4 = vaak; 5 = altijd). De totale ruwe score varieert van 26 tot 130, waarbij hogere scores een grotere ernst van slaapstoornissen aangeven.

Beoordelingen zullen op drie tijdstippen worden uitgevoerd: baseline (T0), bij inschrijving in de interventiestudie; na behandeling (T1), binnen één week na het einde van de behandeling; en follow-up (T

Gestandaardiseerde gedragsbeoordelingen zullen worden uitgevoerd via door ouders/verzorgers gerapporteerde vragenlijsten om de effecten van postbiotische suppletie op gedragsregulatie te evalueren. Emotionele en gedragsregulatie zal worden beoordeeld via gevalideerde instrumenten die zijn ontworpen om de aanwezigheid en ernst van emotionele en gedragsproblemen te onderzoeken, waaronder internaliserende en externaliserende symptomen.

Gedrags- en emotionele problemen zullen worden beoordeeld met behulp van de Italiaanse versies van de Child Behavior Checklist (CBCL) volgens leeftijd. Het instrument bestaat uit items die worden beoordeeld op een 3-punts Likertschaal (0 = niet waar; 1 = enigszins of soms waar; 2 = zeer waar of vaak waar). Hogere scores duiden op een grotere ernst van emotionele en gedragsproblemen. Ruwe scores worden omgezet in gestandaardiseerde T-scores (gemiddelde = 50, standaarddeviatie = 10).

Beoordelingen zullen worden uitgevoerd op drie tijdstippen: baseline (T0), bij inschrijving in de interventiestudie; na behandeling (T1)

Gestandaardiseerde gedragsbeoordelingen zullen worden uitgevoerd via vragenlijsten die door ouders/verzorgers zijn ingevuld om de effecten van postbiotische suppletie op het sensorische profiel te evalueren.

Het sensorische profiel zal worden beoordeeld met behulp van de Sensory Profile-2 (Italiaanse versie), ingevuld door ouders/verzorgers voor kinderen van 3-8 jaar. De vragenlijst evalueert sensorisch functioneren, gedragsreacties op zelfregulatie en de frequentie van gedragsreacties op sensorische prikkels uit de omgeving. Ruwe scores worden berekend voor elk sensorisch domein; hogere scores duiden op een grotere afwijking van typische sensorische verwerkingspatronen.

Beoordelingen zullen op drie tijdstippen worden uitgevoerd: baseline (T0), bij inschrijving in de interventiestudie; na behandeling (T1), binnen een week na het einde van de behandeling; en follow-up (T2), binnen een maand na het einde van de behandeling om de stabiliteit van de waargenomen veranderingen te beoordelen. Alle vragenlijsten die door de ouders/verzorgers zijn ingevuld, zullen vervolgens worden besproken met

Fecesmonsters verkregen van controlesubjecten en kinderen met ASS met en zonder gastro-intestinale symptomen. Voor de laatste groep zullen monsters zowel vóór de start van supplementtherapie (T0) als na behandeling (T1) worden verzameld.

Taxonomische en functionele profilering van de fecale microbiota zal worden uitgevoerd met behulp van ondiepe shotgun-metagenoomsequencing. Totaal bacterieel DNA zal worden geëxtraheerd uit fecesmonsters en gesequenced met Illumina-platforms. Taxonomische analyses zullen worden uitgevoerd op Species-level Genome Bin (SGB)-resolutie (8e taxonomische rang). Functionele analyses zullen gebaseerd zijn op gedestratificeerde genfamilie- en metabole pathway-abundanties, waarbij pathway-annotatie wordt uitgevoerd tegen de MetaCyc-database. Differentiële abundantieanalyses (DAA's) zullen worden uitgevoerd op taxonomische profielen uitgedrukt als relatieve abundanties en op genfamilie- en pathway-profielen genormaliseerd naar kopieën per miljoen (CPM). Maateenheid: Relatieve abundantie van bacteriële taxa (%)

De volgende laboratoriumtests zullen worden uitgevoerd op fecale monsters verkregen van controlesubjecten en kinderen met ASS met en zonder gastro-intestinale symptomen. Voor de laatste groep zullen monsters worden verzameld zowel vóór de start van de supplementtherapie (T0) als na de behandeling (T1). Ongecategoriseerde metabolomische analyse zal worden uitgevoerd op fecale monsters om metabolieten van bacteriële oorsprong te identificeren. Metabolieten zullen worden gedetecteerd en gekwantificeerd met behulp van vloeistofchromatografie-massaspectrometrie (LC-MS) en gaschromatografie-massaspectrometrie (GC-MS), gevolgd door bio-informatica-analyse.

Meeteenheid:

• Relatieve of absolute metabolietabundantie (genormaliseerde piekintensiteit/concentratie)

De volgende laboratoriumtests zullen worden uitgevoerd op fecale monsters verkregen van controlepersonen en kinderen met ASS met en zonder gastro-intestinale symptomen. Voor de laatstgenoemde groep zullen monsters worden verzameld zowel vóór de start van de supplementtherapie (T0) als na behandeling (T1). De intestinale permeabiliteit zal worden beoordeeld door het kwantificeren van fecale niveaus van zonuline en albumine met behulp van commercieel verkrijgbare enzymgekoppelde immunosorbent assays (ELISA). Verhoogde fecale zonulinewaarden zullen worden geïnterpreteerd als indicatief voor de desintegratie van tight junctions en verhoogde epitheliale permeabiliteit. Verhoogde fecale albumineconcentraties zullen worden geïnterpreteerd als een marker van intestinale barrièrefunctiestoornis geassocieerd met inflammatoire lekkage over het darmslijmvlies. Beide biomarkers zullen worden geanalyseerd als indicatoren van veranderde intestinale permeabiliteit en integriteit van de darmbarrière.

Maat van eenheid:

• Zonulinefamiliepeptiden: concentratie (bijv. ng/mL of ng/g feces)
• Albumine: concentratie (bijv. ng/mL)

Correlatieanalyses zullen worden uitgevoerd om de relaties tussen metagenomische en metabolomische profielen en gedrags- en gastro-intestinale uitkomsten bij kinderen met ASS te onderzoeken. Deze initiële analyse zal het mogelijk maken om significante associaties te identificeren tussen microbiële diversiteit, metabolietschatting en klinische metingen die mogelijk worden gemoduleerd door postbiotische behandeling.

Metagenomische, metabolomische en darmpermeabiliteitsgegevens zullen vervolgens worden geïntegreerd met gedragsuitkomsten met behulp van geavanceerde computationele multi-omics benaderingen. Na gegevensnormalisatie en -harmonisatie via gestandaardiseerde pijplijnen, zullen metagenomische en metabolomische datasets worden gecombineerd met behulp van netwerkgebaseerde integratiestrategieën en multivariate methoden, waaronder Canonische Correlatieanalyse (CCA), sparse Partiële Kleinste Kwadraten (sPLS) en Multi-Omics Factor Analyse (MOFA), om gedeelde functionele kenmerken, belangrijke microbiële-metabole interacties en convergente paden tussen datasets te identificeren.

Kruis