Ruolo della Barriera Vascolare Intestinale e del Microbiota nei Disturbi dello Spettro Autistico (DSA/GVB)

La presenza di sintomi gastrointestinali sarà valutata al momento del reclutamento (T0) utilizzando l'Indice di Gravità Gastrointestinale.

I soggetti reclutati saranno trattati con l'integratore alimentare a base di postbiotici, PostbiotiX Comfort®, una volta al giorno per 1 mese.

L'Indice di Gravità Gastrointestinale sarà ripetuto entro una settimana dalla fine del trattamento (T1) per quantificare i cambiamenti nella regolazione intestinale e un mese dopo la fine del trattamento (T2) per valutare la stabilità dei cambiamenti osservati.

Valutazioni comportamentali standardizzate verranno condotte attraverso questionari riportati da genitori/caregiver per valutare gli effetti dell'integrazione postbiotica sulla regolazione del sonno. I disturbi del sonno verranno valutati attraverso strumenti validati progettati per indagare difficoltà relative all'addormentamento e al mantenimento del sonno, disturbi respiratori del sonno, disturbi dell'eccitazione, transizione veglia-sonno, eccessiva sonnolenza diurna e iperidrosi notturna.

La regolazione del sonno verrà valutata utilizzando la versione italiana della Sleep Disturbance Scale for Children. La scala consiste di 26 item valutati su una scala Likert a 5 punti (1 = mai; 2 = occasionalmente; 3 = a volte; 4 = spesso; 5 = sempre). Il punteggio grezzo totale varia da 26 a 130, con punteggi più alti che indicano una maggiore gravità dei disturbi del sonno.

Le valutazioni verranno condotte in tre momenti: baseline (T0), al momento dell'arruolamento nello studio interventistico; post-trattamento (T1), entro una settimana dalla fine del trattamento; e follow-up (T

Le valutazioni comportamentali standardizzate saranno condotte attraverso questionari riportati da genitori/caregiver per valutare gli effetti dell'integrazione postbiotica sulla regolazione comportamentale. La regolazione emotiva e comportamentale sarà valutata attraverso strumenti validati progettati per indagare la presenza e la gravità dei problemi emotivi e comportamentali, inclusi i sintomi internalizzanti ed esternalizzanti.

I problemi comportamentali ed emotivi saranno valutati utilizzando le versioni italiane della Child Behavior Checklist (CBCL) in base all'età. Lo strumento consiste di elementi valutati su una scala Likert a 3 punti (0 = non vero; 1 = in parte o a volte vero; 2 = molto vero o spesso vero). Punteggi più alti indicano una maggiore gravità dei problemi emotivi e comportamentali. I punteggi grezzi saranno convertiti in punteggi T standardizzati (media = 50, deviazione standard = 10).

Le valutazioni saranno eseguite in tre momenti temporali: baseline (T0), al momento dell'arruolamento nello studio interventistico; post-trattamento (T1)

Valutazioni comportamentali standardizzate saranno condotte attraverso questionari compilati dai genitori/assistenti per valutare gli effetti dell'integrazione postbiotica sul profilo sensoriale.

Il profilo sensoriale sarà valutato utilizzando il Sensory Profile-2 (versione italiana), compilato dai genitori/assistenti per bambini di età compresa tra 3 e 8 anni. Il questionario valuta il funzionamento sensoriale, le risposte comportamentali di autoregolazione e la frequenza delle risposte comportamentali agli stimoli sensoriali ambientali. Vengono calcolati punteggi grezzi per ogni dominio sensoriale; punteggi più alti indicano una maggiore deviazione dai modelli tipici di elaborazione sensoriale.

Le valutazioni saranno eseguite in tre momenti: baseline (T0), all'arruolamento nello studio interventistico; post-trattamento (T1), entro una settimana dalla fine del trattamento; e follow-up (T2), entro un mese dalla fine del trattamento per valutare la stabilità dei cambiamenti osservati. Tutti i questionari compilati dai genitori/assistenti saranno successivamente discussi con

Campioni fecali ottenuti da soggetti di controllo e bambini con ASD con e senza sintomi gastrointestinali. Per quest'ultimo gruppo, i campioni saranno raccolti sia prima dell'inizio della terapia integrativa (T0) che dopo il trattamento (T1).

La profilazione tassonomica e funzionale del microbiota fecale sarà eseguita utilizzando il sequenziamento metagenomico shotgun superficiale. Il DNA batterico totale sarà estratto dai campioni fecali e sequenziato utilizzando piattaforme Illumina. Le analisi tassonomiche saranno eseguite a risoluzione di Species-level Genome Bin (SGB) (8° livello tassonomico). Le analisi funzionali saranno basate sulle abbondanze di famiglie geniche destratificate e di pathway metabolici, con annotazione dei pathway eseguita rispetto al database MetaCyc. Le analisi di abbondanza differenziale (DAAs) saranno eseguite sui profili tassonomici espressi come abbondanze relative e sui profili di famiglie geniche e pathway normalizzati a copie per milione (CPM). Unità di misura: Abbondanza relativa di taxa batterici (%)

I seguenti test di laboratorio saranno eseguiti su campioni fecali ottenuti da soggetti di controllo e bambini con ASD con e senza sintomi gastrointestinali. Per quest'ultimo gruppo, i campioni saranno raccolti sia prima dell'inizio della terapia integrativa (T0) che dopo il trattamento (T1). L'analisi metabolomica non mirata sarà eseguita su campioni fecali per identificare metaboliti di origine batterica. I metaboliti saranno rilevati e quantificati utilizzando la cromatografia liquida-spettrometria di massa (LC-MS) e la cromatografia gassosa-spettrometria di massa (GC-MS), seguita dall'analisi bioinformatica.

Unità di misura:

• Abbondanza relativa o assoluta dei metaboliti (intensità di picco normalizzata/concentrazione)

I seguenti test di laboratorio saranno eseguiti su campioni fecali ottenuti da soggetti di controllo e da bambini con ASD, con e senza sintomi gastrointestinali. Per quest'ultimo gruppo, i campioni saranno raccolti sia prima dell'inizio della terapia integrativa (T0) sia dopo il trattamento (T1). La permeabilità intestinale sarà valutata quantificando i livelli fecali di zonulina e albumina utilizzando test immunoassorbenti legati all'enzima (ELISA) disponibili in commercio. Livelli elevati di zonulina fecale saranno interpretati come indicativi del disassemblaggio delle giunzioni strette e dell'aumentata permeabilità epiteliale. Concentrazioni elevate di albumina fecale saranno interpretate come un marcatore di disfunzione della barriera intestinale associata a perdite infiammatorie attraverso la mucosa intestinale. Entrambi i biomarcatori saranno analizzati come indicatori di permeabilità intestinale alterata e integrità della barriera intestinale.

Unità di misura:

• Peptidi della famiglia della zonulina: concentrazione (ad esempio, ng/mL o ng/g di feci)
• Albumina: concentrazione (ad esempio, ng/mL)

Le analisi di correlazione verranno eseguite per indagare le relazioni tra i profili metagenomici e metabolomici e gli esiti comportamentali e gastrointestinali nei bambini con ASD. Questa analisi iniziale consentirà l'identificazione di associazioni significative tra la diversità microbica, l'abbondanza di metaboliti e le misure cliniche potenzialmente modulabili dal trattamento postbiotico.

I dati metagenomici, metabolomici e di permeabilità intestinale verranno quindi integrati con gli esiti comportamentali utilizzando approcci computazionali multi-omici avanzati. Dopo la normalizzazione e l'armonizzazione dei dati tramite pipeline standardizzate, i set di dati metagenomici e metabolomici verranno combinati utilizzando strategie di integrazione basate su reti e metodi multivariati, inclusi l'Analisi di Correlazione Canonica (CCA), i Minimi Quadrati Parziali Sparsi (sPLS) e l'Analisi Fattoriale Multi-Omica (MOFA), per identificare firme funzionali condivise, interazioni microbiche-metaboliche chiave e percorsi convergenti tra i set di dati.

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