Rollen til tarmens vaskulære barriere og mikrobiota i autismespekterforstyrrelser (DSA/GVB)

Tilstedeværelsen av gastrointestinale symptomer vil bli vurdert ved rekruttering (T0) ved hjelp av GI Severity Index.

De rekrutterte forsøkspersonene vil bli behandlet med det postbiotikabasert kosttilskuddet, PostbiotiX Comfort®, en gang daglig i 1 måned.

GI Severity Index vil bli gjentatt innen en uke etter behandlingens slutt (T1) for å kvantifisere endringer i tarmregulering og en måned etter behandlingens slutt (T2) for å vurdere stabiliteten til de observerte endringene.

Standardiserte atferdsvurderinger vil bli utført gjennom forespørsler rapportert av foreldre/omsorgspersoner for å evaluere effekten av postbiotisk tilskudd på søvnregulering. Søvnforstyrrelser vil bli vurdert gjennom validerte instrumenter designet for å undersøke vanskeligheter knyttet til søvnsøkning og vedlikehold, respiratoriske søvnforstyrrelser, oppvåkningsforstyrrelser, våken-søvnovergang, overdreven dagsøvnighet og nattlig hyperhidrose.

Søvnregulering vil bli vurdert ved hjelp av den italienske versjonen av Sleep Disturbance Scale for Children. Skalaen består av 26 elementer vurdert på en 5-punkts Likert-skala (1 = aldri; 2 = av og til; 3 = noen ganger; 4 = ofte; 5 = alltid). Den totale råpoengsummen varierer fra 26 til 130, der høyere poengsummer indikerer større alvorlighet av søvnforstyrrelser.

Vurderinger vil bli utført på tre tidspunkter: utgangspunkt (T0), ved inkludering i intervensjonsstudien; etter behandling (T1), innen en uke etter behandlingens slutt; og oppfølging (T

Standardiserte atferdsvurderinger vil bli gjennomført gjennom forespørsler rapportert av foreldre/omsorgspersoner for å evaluere effekten av postbiotisk tilskudd på atferdsregulering. Emosjonell og atferdsmessig regulering vil bli vurdert gjennom validerte instrumenter designet for å undersøke tilstedeværelsen og alvorlighetsgraden av emosjonelle og atferdsmessige problemer, inkludert internaliserende og eksternaliserende symptomer.

Atferds- og emosjonelle problemer vil bli vurdert ved bruk av de italienske versjonene av Child Behavior Checklist (CBCL) i henhold til alder. Instrumentet består av elementer vurdert på en 3-punkts Likert-skala (0 = ikke sant; 1 = noe eller noen ganger sant; 2 = veldig sant eller ofte sant). Høyere poengsummer indikerer større alvorlighetsgrad av emosjonelle og atferdsmessige problemer. Råpoengsummer vil bli konvertert til standardiserte T-poengsummer (gjennomsnitt = 50, standardavvik = 10).

Vurderinger vil bli utført på tre tidspunkter: utgangspunkt (T0), ved påmelding i intervensjonsstudien; etter behandling (T1)

Standardiserte atferdsvurderinger vil bli gjennomført gjennom foreldre/omsorgspersoners rapporterte spørreskjemaer for å evaluere effektene av postbiotisk tilskudd på sensorisk profil.

Den sensoriske profilen vil bli vurdert ved hjelp av Sensory Profile-2 (italiensk versjon), som fylles ut av foreldre/omsorgspersoner for barn i alderen 3-8 år. Spørreskjemaet evaluerer sensorisk funksjon, selvregulerende atferdsresponser og hyppigheten av atferdsresponser på miljømessige sensoriske stimuli. Råpoeng beregnes for hvert sensoriske domene; høyere poeng indikerer større avvik fra typiske sensoriske prosesseringsmønstre.

Vurderingene vil bli utført på tre tidspunkter: utgangspunkt (T0), ved inkludering i intervensjonsstudien; etter behandling (T1), innen en uke etter behandlingens slutt; og oppfølging (T2), innen en måned etter behandlingens slutt for å vurdere stabiliteten til de observerte endringene. Alle spørreskjemaer som er fylt ut av foreldre/omsorgspersoner vil deretter bli diskutert med

Avføringsprøver hentet fra kontrollpersoner og barn med ASD med og uten gastrointestinale symptomer. For den sistnevnte gruppen vil prøver samles både før oppstart av supplementterapi (T0) og etter behandling (T1).

Taksonomisk og funksjonell profilering av tarmmikrobiota vil utføres ved hjelp av grunnleggende shotgun-metagenomisk sekvensering. Total bakteriell DNA vil ekstraheres fra avføringsprøver og sekvenseres ved bruk av Illumina-plattformer. Taksonomiske analyser vil utføres på Species-level Genome Bin (SGB)-oppløsning (8. taksonomiske rang). Funksjonelle analyser vil baseres på destratifiserte genfamilie- og metabolske veiabundanser, med veiannotering utført mot MetaCyc-databasen. Differensiell abundansanalyse (DAA) vil utføres på taksonomiske profiler uttrykt som relative abundanser og på genfamilie- og veiprofiler normalisert til kopier per million (CPM) Måleenhet: Relativ abundans av bakterielle taxa (%)

Følgende laboratorietester vil bli utført på avføringsprøver fra kontrollpersoner og barn med ASD med og uten gastrointestinale symptomer. For sistnevnte gruppe vil prøver bli samlet både før start av supplementterapi (T0) og etter behandling (T1). Målrettet metabolomisk analyse vil bli utført på avføringsprøver for å identifisere metabolitter av bakteriell opprinnelse. Metabolitter vil bli detektert og kvantifisert ved hjelp av væskekromatografi-massespektrometri (LC-MS) og gasskromatografi-massespektrometri (GC-MS), etterfulgt av bioinformatisk analyse.

Måleenhet:

• Relativ eller absolutt metabolittforekomst (normalisert toppintensitet/konsentrasjon)

Følgende laboratorieprøver vil bli utført på avføringsprøver hentet fra kontrollpersoner og barn med ASD med og uten gastrointestinale symptomer. For sistnevnte gruppe vil prøver bli samlet både før oppstart av supplementterapi (T0) og etter behandling (T1). Tarmpermeabilitet vil bli vurdert ved å kvantifisere avføringsnivåer av zonulin og albumin ved hjelp av kommersielt tilgjengelige enzymkoblede immunosorbent assayer (ELISA). Økte avføringsnivåer av zonulin vil bli tolket som indikativt for oppløsning av tette forbindelser og økt epitelpermeabilitet. Forhøyede avføringskonsentrasjoner av albumin vil bli tolket som en markør for tarmbarriere-dysfunksjon assosiert med inflammatorisk lekkasje gjennom tarmslimhinnen. Begge biomarkørene vil bli analysert som indikatorer på endret tarmpermeabilitet og tarmbarriereintegritet.

Måleenhet:

• Zonulin-familiepeptider: konsentrasjon (f.eks., ng/mL eller ng/g avføring)
• Albumin: konsentrasjon (f.eks., ng/mL)

Korrelasjonsanalyser vil bli utført for å undersøke sammenhengene mellom metagenomiske og metabolomiske profiler og atferdsmessige og gastrointestinale utfall hos barn med ASD. Denne innledende analysen vil muliggjøre identifikasjon av signifikante assosiasjoner mellom mikrobiell diversitet, metabolittoverflod og kliniske mål som potensielt moduleres av postbiotisk behandling.

Metagenomiske, metabolomiske og tarmpermeabilitetsdata vil deretter bli integrert med atferdsmessige utfall ved bruk av avanserte beregningsmessige multi-omics-tilnærminger. Etter datanormalisering og harmonisering gjennom standardiserte prosedyrer, vil metagenomiske og metabolomiske datasett bli kombinert ved bruk av nettverksbaserte integreringsstrategier og multivariate metoder, inkludert kanonisk korrelasjonsanalyse (CCA), sparse partial least squares (sPLS) og multi-omics faktoranalyse (MOFA), for å identifisere delte funksjonelle signaturer, nøkkelinteraksjoner mellom mikrober og metabolitter og konvergerende baner på tvers av datasett.

Kryss