Papel da Barreira Vascular Intestinal e Microbiota nos Transtornos do Espectro do Autismo (DSA/GVB)

A presença de sintomas gastrointestinais será avaliada no recrutamento (T0) utilizando o Índice de Gravidade Gastrointestinal.

Os sujeitos recrutados serão tratados com o suplemento alimentar à base de pós-bióticos, PostbiotiX Comfort®, uma vez por dia durante 1 mês.

O Índice de Gravidade Gastrointestinal será repetido no prazo de uma semana após o fim do tratamento (T1) para quantificar as alterações na regulação intestinal e um mês após o fim do tratamento (T2) para avaliar a estabilidade das alterações observadas.

Serão realizadas avaliações comportamentais padronizadas através de questionários reportados pelos pais/cuidadores para avaliar os efeitos da suplementação com pós-bióticos na regulação do sono. As perturbações do sono serão avaliadas através de instrumentos validados concebidos para investigar dificuldades relacionadas com o início e manutenção do sono, perturbações respiratórias do sono, distúrbios do despertar, transição vigília-sono, sonolência diurna excessiva e hiperidrose noturna.

A regulação do sono será avaliada utilizando a versão italiana da Escala de Perturbações do Sono para Crianças. A escala consiste em 26 itens avaliados numa escala de Likert de 5 pontos (1 = nunca; 2 = ocasionalmente; 3 = por vezes; 4 = frequentemente; 5 = sempre). A pontuação bruta total varia entre 26 e 130, com pontuações mais elevadas a indicar maior gravidade das perturbações do sono.

As avaliações serão realizadas em três momentos: linha de base (T0), no momento da inscrição no estudo de intervenção; pós-tratamento (T1), no prazo de uma semana após o final do tratamento; e seguimento (T

Avaliações comportamentais padronizadas serão realizadas através de questionários relatados por pais/cuidadores para avaliar os efeitos da suplementação com pós-bióticos na regulação comportamental. A regulação emocional e comportamental será avaliada através de instrumentos validados concebidos para investigar a presença e gravidade de problemas emocionais e comportamentais, incluindo sintomas internalizantes e externalizantes.

Os problemas comportamentais e emocionais serão avaliados utilizando as versões italianas da Child Behavior Checklist (CBCL) de acordo com a idade. O instrumento consiste em itens classificados numa escala de Likert de 3 pontos (0 = não é verdade; 1 = algo ou às vezes verdade; 2 = muito verdade ou frequentemente verdade). Pontuações mais elevadas indicam maior gravidade dos problemas emocionais e comportamentais. As pontuações brutas serão convertidas em pontuações T padronizadas (média = 50, desvio padrão = 10).

As avaliações serão realizadas em três momentos: linha de base (T0), na inscrição no estudo de intervenção; pós-tratamento (T1)

As avaliações comportamentais padronizadas serão realizadas através de questionários preenchidos pelos pais/cuidadores para avaliar os efeitos da suplementação com pós-bióticos no perfil sensorial.

O perfil sensorial será avaliado utilizando o Sensory Profile-2 (versão italiana), preenchido pelos pais/cuidadores para crianças dos 3 aos 8 anos. O questionário avalia o funcionamento sensorial, as respostas comportamentais de autorregulação e a frequência das respostas comportamentais aos estímulos sensoriais ambientais. As pontuações brutas são calculadas para cada domínio sensorial; pontuações mais altas indicam um maior desvio dos padrões típicos de processamento sensorial.

As avaliações serão realizadas em três momentos: linha de base (T0), na inscrição no estudo de intervenção; pós-tratamento (T1), até uma semana após o fim do tratamento; e acompanhamento (T2), até um mês após o fim do tratamento, para avaliar a estabilidade das alterações observadas. Todos os questionários preenchidos pelos pais/cuidadores serão posteriormente discutidos com

As amostras fecais obtidas de sujeitos de controlo e de crianças com ASD com e sem sintomas gastrointestinais. Para este último grupo, as amostras serão recolhidas antes do início da terapia de suplementação (T0) e após o tratamento (T1).

A caracterização taxonómica e funcional da microbiota fecal será realizada utilizando sequenciação metagenómica shotgun superficial. O ADN bacteriano total será extraído das amostras fecais e sequenciado utilizando plataformas Illumina. As análises taxonómicas serão realizadas com a resolução Species-level Genome Bin (SGB) (8.º nível taxonómico). As análises funcionais basear-se-ão nas abundâncias de famílias de genes e vias metabólicas desestratificadas, com anotação de vias realizada contra a base de dados MetaCyc. As análises de abundância diferencial (DAAs) serão realizadas em perfis taxonómicos expressos como abundâncias relativas e em perfis de famílias de genes e vias normalizados para cópias por milhão (CPM) Unidade de medida: Abundância relativa de taxas bacterianas (%)

Os seguintes testes laboratoriais serão realizados em amostras fecais obtidas de sujeitos de controlo e de crianças com ASD, com e sem sintomas gastrointestinais. Para este último grupo, as amostras serão recolhidas antes do início da terapia com suplementos (T0) e após o tratamento (T1). Será realizada uma análise metabolómica não direcionada nas amostras fecais para identificar metabolitos de origem bacteriana. Os metabolitos serão detetados e quantificados usando cromatografia líquida-espetrometria de massa (LC-MS) e cromatografia gasosa-espetrometria de massa (GC-MS), seguido de análise bioinformática.

Unidade de medida:

• Abundância relativa ou absoluta de metabolitos (intensidade de pico normalizada/concentração)

Os seguintes testes laboratoriais serão realizados em amostras fecais obtidas de sujeitos de controlo e crianças com TEA (Transtorno do Espectro do Autismo) com e sem sintomas gastrointestinais. Para o último grupo, as amostras serão recolhidas tanto antes do início da terapia com suplementos (T0) como após o tratamento (T1). A permeabilidade intestinal será avaliada quantificando os níveis fecais de zonulina e albumina utilizando ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA) disponíveis comercialmente. Níveis elevados de zonulina fecal serão interpretados como indicativos de desmontagem das junções apertadas e aumento da permeabilidade epitelial. Concentrações elevadas de albumina fecal serão interpretadas como um marcador de disfunção da barreira intestinal associada à fuga inflamatória através da mucosa intestinal. Ambos os biomarcadores serão analisados como indicadores de permeabilidade intestinal alterada e integridade da barreira intestinal.

Unidade de medida:

• Péptidos da família da zonulina: concentração (ex.: ng/mL ou ng/g de fezes)
• Albumina: concentração (ex.: ng/mL)

Serão realizadas análises de correlação para investigar as relações entre os perfis metagenómicos e metabolómicos e os resultados comportamentais e gastrointestinais em crianças com TEA. Esta análise inicial permitirá a identificação de associações significativas entre a diversidade microbiana, a abundância de metabolitos e as medidas clínicas potencialmente moduladas pelo tratamento pós-biótico.

Os dados metagenómicos, metabolómicos e de permeabilidade intestinal serão então integrados com os resultados comportamentais utilizando abordagens computacionais multi-ómicas avançadas. Após a normalização e harmonização dos dados através de pipelines padronizados, os conjuntos de dados metagenómicos e metabolómicos serão combinados utilizando estratégias de integração baseadas em rede e métodos multivariados, incluindo Análise de Correlação Canónica (CCA), Mínimos Quadrados Parciais Esparsos (sPLS) e Análise Fatorial Multi-Ómica (MOFA), para identificar assinaturas funcionais partilhadas, interações microbianas-metabólicas-chave e vias convergentes entre os conjuntos de dados.

Cruzada