A TÚLÉLÉS ÉS MŰKÖDÉS TANULMÁNYA KRIOPONTOSÍTOTT vérlemezkékben

HIPOTÉZIS: A mélyhűtéssel akár 4-szeresére is meghosszabbítható a vérlemezkék túlélési ideje a hagyományos módszerrel konzerváltakhoz képest, 50%-os vagy annál nagyobb életképesség fenntartása mellett.

Közvetlen kapcsolat van a túlélési idő, a krioprezervált vérlemezkék életképessége és funkcionalitása között, az alkalmazott krioprotektív oldat modelljétől függően.

ELSŐDLEGES EREDMÉNY: a mélyhűtött vérlemezkék 28 napnál hosszabb túlélése MÁSODIK EREDMÉNY: a mélyhűtött vérlemezkék életképessége 50%-nál nagyobb

BEVÁLASZTÁSI KRITÉRIUMOK: A 22990 (Argentín Köztársaság) törvényben a vér és vérkomponensek adományozására vonatkozó követelményeknek megfelelő, 18 év feletti donoroktól származó koncentrátumok szerepelnek ebben a vizsgálatban, akiktől a vérlemezkék száma legalább 3 x 10 E11 gyűjthető.

KIZÁRÁSI KRITÉRIUMOK: Azok a vérlemezkekoncentrátumok, amelyek az alábbi jellemzők bármelyikével rendelkeznek, kizárásra kerülnek a vizsgálatból:

Koncentrátumok, amelyek nem felelnek meg az emberi felhasználáshoz szükséges összes szabványnak, vagy amelyek a vizsgálat időpontjában több mint 24 óra telt el beszerzésük óta.

Vakkísérleti vizsgálatot végeznek (azok, akik értékelik a vérlemezkék életképességét és funkcionalitását, nem ismerik a mélyhűtési időt vagy a krioprezerválószer koncentrációját)

Az A +, A-, B +, B-, AB +, AB-, O + és O- csoportot és faktort tartalmazó vérlemezkék aliquot részei azoktól a személyektől származnak, akik önkéntes donorként érkeznek a hemoterápiás központba, és kinyilvánítják döntésüket a jelen jegyzőkönyvben való részvételhez az erre a célra kialakított, tájékozott hozzájárulás aláírásával. A vérlemezkék kinyerése aferézissel történik a Trima ACCEL sejtleválasztó 7.0-s verziójával, TERUMO BCT márkanévvel.

Minden donoronként 200-300 ml térfogatban összesen legalább 3,3 x 1011 vérlemezke képződik.

A csoport: 70 darab, egyenként 3 ml-es aliquot részből áll, 1,9 x 109 vérlemezkével, amelyekhez a következő összetételű oldatot adjuk: 1 ml a következő keverékből (0,8 ml 100%-os dimetil-szulfoxid (DMSO) és 4 ml 0 nátrium) klorid, 9%). Ezután -80 °C-on lefagyasztják.

B csoport: 70 darab, egyenként 3 ml-es aliquot részből áll, 1,9 x 109 vérlemezkével, amelyhez 0,4 ml 20%-os UNC márkájú albumint és 0,6 ml-t a következő keverékből (1,4 ml dimetil-szulfoxid) tartalmazó oldatot adunk. (DMSO) 100% és 4 ml dextróz 5%). Ezután -80 °C-on lefagyasztják.

C csoport: 70 darab, egyenként 3 ml-es aliquot részből áll, 1,9 x 109 vérlemezkével, amelyhez 0,4 ml 20%-os UNC márkájú albumint és 0,6 ml-t a következő keverékből (1,4 ml dimetil-szulfoxid) tartalmazó oldatot adunk. (DMSO) 100% és 4 ml 0,9%-os nátrium-klorid). Ezután -80 °C-on lefagyasztják.

Az eredmények összehasonlításához referenciaként egy 71 darab, egyenként 3 ml-es alikvotból álló csoportot használunk, 1,9 x 109 besugárzott vérlemezkével, 22 °C-on, állandó keverés közben 5 napig (huszonnégy aliquot rész minden értékelt időtartamra). N).

Életképesség:

Ezt a Beckman-Coulter rendszer által végzett vérlemezkeszám, a mélyhűtött vérlemezkék felolvasztás utáni pH-értékének mérése (6,4 és 7,4 közötti várható értékek), valamint a vérlemezkék áramlási citometriával (CMF) végzett immunfenotipizálásával fogják értékelni. fluoreszcens anti CD61-PE antitestek.

Funkcionalitás:

Ezt a vérlemezkék immunfenotipizálásából fogják kiértékelni áramlási citometriával (CMF), fluoreszcens anti-CD41 és anti-CD62-FITC antitestek felhasználásával.

A CMF-analízis elvégzése előtt minden mintához 4 mikroliter 50 mmol-os ADP-oldatot adunk a vérlemezke-aktiváció indukálására.

Mind az életképesség-elemzést, mind a mélyhűtött termék funkcionalitását a kutatásban közreműködő 3 biokémikus végzi majd a kórház biokémiai elemző laboratóriumában.