Kísérleti tanulmány az átirányított haploidentikus természetes ölősejt-infúziókról B-vonalú akut limfoblasztos leukémia esetén

1.0. Indoklás

Ellentétben az NK-sejtek AML-sejtekkel szembeni jól bevált citotoxicitásával, az ALL-sejtek lízisére való képességük általában alacsony és nehezen megjósolható. Ezt az intrinzik rezisztenciát úgy próbáltuk leküzdeni, hogy CD56+ CD3-NK sejteket transzdukáltunk kiméra receptorokkal, amelyek a CD19 ellen irányulnak, amely molekula a rosszindulatú B-sejtek széles körben expresszálódik. A CD3zetához kapcsolódó anti-CD19 receptorok expressziója legyőzte az NK-rezisztenciát, és jelentősen fokozta a leukémiás sejtek NK-sejtek által közvetített pusztítását. Ezt az eredményt jelentősen javította a 4-1BB kostimulátor molekula hozzáadásával a kiméra anti-CD19-CD3zeta receptorhoz: az ezt a konstrukciót expresszáló NK-sejtek által termelt citotoxicitás egyenletesen meghaladta azon NK-sejtekét, amelyek jelátviteli receptoraiból hiányzott a 4-1BB, még természetes citotoxicitás mellett is. nyilvánvaló volt (Imai et al., Blood 2005). Az anti-CD19 receptorokat expresszáló NK-sejtek szintén erőteljes anti-ALL aktivitást fejtettek ki a leukémia egérmodelljében (Shimasaki et al., Cytotherapy 2012). Eredményeink azt mutatják, hogy a jelátviteli receptorok NK-sejtek általi kényszerített expressziója megkerülheti a gátló szignálokat, új eszközt biztosítva az anti-ALL NK sejtterápia hatékonyságának fokozására.

A géntechnológiával módosított NK-sejtek preklinikai vizsgálatainkban kimutatott nagy anti-leukémiás hatékonysága, a tartós haploidentikus NK-sejtek nem HSCT-környezetben történő infúziójának bizonyított megvalósíthatósága, valamint a NUH csapatának sejtterápiás szakértelme (az egyetlen központ az országban). Ázsia, amelyet a Cellular Therapy Akkreditációs Alapítványa (FACT) akkreditált), meggyőző indokot jelent ezen NK-sejtek klinikai tesztelésére.

A kulcsreagens (anti-CD19-BB-zéta mRNS) elkészítése a NUH Tissue Engineering & Cell Therapy (TECT) Laboratóriumában történik, ahol a GMP-kompatibilis MaxCyte elektroporátor található. Kimutatták az NK-sejtek nagy léptékű terjeszkedésének megvalósíthatóságát (Shimasaki et al. Citoterápia 2012), valamint a TECT laboratóriumban validált nagyléptékű elektroporáció megvalósíthatósága.

Áramlási citometriás és MRD technológiákat fogunk használni a perzisztáló betegség jelenlétének meghatározására, és ebbe a vizsgálatba csak korlátozott számú reziduális betegségben szenvedő betegeket vonunk be (<1% leukémiás limfoblasztok a normál csontvelősejtek között). Ugyanazokat az MRD-módszereket fogjuk alkalmazni a kezelési infúziók hatásainak nyomon követésére. Nem számítunk arra, hogy a kondicionáló kezelés önmagában nagy hatással lesz a leukémiás sejtek számára, mivel a vizsgálatra alkalmas betegek olyan betegségben szenvednek, amely rezisztens számos leukémia elleni gyógyszerrel szemben. Mindazonáltal, mivel magának a kondicionálásnak is lehetnek jótékony hatásai, fontos lesz a perifériás vér és/vagy csontvelő szűrése leukémiás blastsejtek jelenlétére az eljárás minden szakaszában, azaz a kondicionálás előtt, alatt és után. és az NK sejt infúzió után. A leukémiás sejtek jelenlétét az antigén-receptor gének áramlási citometriájával vagy PCR-amplifikációjával szorosan ellenőrizni fogják (mindkét módszer érzékenysége: 1 leukémiás sejt 10 000-ből), hogy megvilágítsák az egyes beavatkozások relatív hatását.

2.0. Hipotézisek és célkitűzések

A tanulmányban tesztelendő fő hipotézis az, hogy az anti-CD19-BB-zéta receptorokat expresszáló NK-sejtek elektroporációval történő infúziója mérhető klinikai válaszokat eredményezhet rezisztens B-vonalú ALL-ben szenvedő betegekben.

3.0. Elsődleges célok

• Meghatározni az NK-sejtek anti-CD19 kiméra antigénreceptorral történő mRNS elektroporációval történő átirányításának megvalósíthatóságát és biztonságosságát klinikai környezetben.
• Az anti-CD19 átirányított NK sejtek hatékonyságának meghatározása olyan B-vonalú ALL-ben szenvedő kutatásban résztvevőkben, akiknél intenzív kemoterápia után MRD módszerekkel meghatározott tartós betegségben szenvednek.

4.0. Másodlagos célok

• Az átirányított NK-sejtek perzisztenciájának és fenotípusának tanulmányozása olyan B-vonalú ALL-ben szenvedő résztvevőknél, akiknek intenzív kemoterápia után maradványbetegségük van.

5.0. Végpontok

Ebben a vizsgálatban a kezelésre adott választ az NK-sejt-infúzió előtti és több időközönkénti MRD-szintek összehasonlításával mérik. A csontvelőben az MRD-negativitás elérése, azaz a 0,01%-nál kisebb blastok áramlási citometriával vagy PCR-rel teljes válasznak minősül. . A részleges választ az MRD-szintek ≥ 1 log-os csökkenéseként határozzuk meg, míg az MRD-szintek < 1 log-os csökkenését nem válasznak tekintjük.

Korábbi vizsgálatok alapján a donor NK-sejtek a legtöbb esetben a haploidentikus recipiens újjáéledő celluláris immunitásával eliminálódnak, miután a kondicionáló séma okozta átmeneti immunszuppresszió hatása megszűnt (jellemzően az infúziót követő 1 hónapon belül). Elképzelhető azonban, hogy az NK-sejtek beültetése hosszabb ideig fennmaradhat, és fennáll a hosszan tartó pancytopenia kockázata, ami az NK-sejtek elpusztulása miatt a normál vérképző sejteken. Emiatt a lehetőség miatt HSCT-mentést tervezünk az átirányított NK-sejt-infúzióban részesülő betegeknél. Valójában a vizsgálatra jogosult betegek többsége számára a HSCT lenne a kezelési beavatkozás, függetlenül attól, hogy kapnak-e NK-sejt-infúziót vagy sem. Ezen megfontolások miatt az NK-sejtes terápia lehetséges előnyeinek meg kell haladniuk a kockázatokat azon betegek esetében, akik alkalmasak erre a vizsgálatra, azaz olyan tartós leukémiában szenvedő betegekre, akik számára nem áll rendelkezésre más bizonyítottan hatékony kezelés.

Mivel a CD19 univerzálisan expresszálódik B-sejteken, beleértve a korai B-sejt-prekurzorokat, a normál recipiens B-sejt célpontja lesz az anti-CD19 kiméra receptorokkal transzdukált donor NK-sejteknek. Ezért átmeneti B-sejtes lymphopenia és hypogammaglobinémia várható. Havonta egyszer ellenőrizzük a CD19+ vérsejtszámot és mérjük az Ig szintet, valamint intravénás immunglobulinokat (IVIG) adunk a résztvevőknek, ha az IgG szintjük alacsonyabb az életkor specifikus tartományoknál.

6.0. A tanulmányterv összefoglalása

A perifériás vérsejteket aferézissel gyűjtik a donoroktól. 10 napos ex vivo expanziót követően besugárzott K562-mb15-41BBL sejtekkel történő együtttenyésztéssel (Fujisaki és munkatársai, Cancer Res 2009; Lapteva és mtsai. Citoterápia 2012) és a T-sejt kimerülése miatt a haploidentikus NK sejteket anti-CD19-BB-zéta mRNS-sel elektroporálják. Az infúzió beadása előtt a betegek immunszuppresszív terápiát kapnak, hogy elősegítsék az NK-sejtek átmeneti beültetését. Az infúzió után IL-2-t kapnak az NK-sejtek életképességének és in vivo terjedésének támogatására. Az NK-sejt-infúzió hatásait a kezelés előtti és utáni MRD-szintek összehasonlításával határozzák meg.

A receptor expressziója az elektroporáció után átmeneti, és jellemzően 48 óra elteltével csökken, 96 óra elteltével már kimutathatatlan. Mivel az NK-sejtterápia célja nem a tartós immunitás kiváltása, hanem a tumorsejt-terhelés gyors csökkentése, és az infundált NK-sejteket a gazdaszervezet immunrendszere körülbelül 2 hetes infúzió után kilöki, az expresszió átmeneti jellege nem befolyásolhatja jelentősen. daganatellenes potenciál. Ezen túlmenően ennek a stratégiának a használatával az inszerciós mutagenezissel és a transzdukált maradék T-sejtek hosszú távú fennmaradásával kapcsolatos biztonsági aggályok nem érvényesülnek. Mindenesetre minimalizáljuk a maradék T-sejtek számát a végtermékben, amennyire csak lehetséges, ha a CliniMACS eszközzel kimerítjük a T-sejtek expandált termékét, és a graftban a T-sejtek számát 0,05-szeresre korlátozzuk. 10^6/kg.