B 계통 급성 림프구성 백혈병에 대한 방향 전환된 일배체 자연 살해 세포 주입의 파일럿 연구

1.0. 이론적 해석

AML 세포에 대한 NK 세포의 잘 확립된 세포독성과는 대조적으로, ALL 세포를 용해시키는 능력은 일반적으로 낮고 예측하기 어렵습니다. 우리는 악성 B 세포에 의해 광범위하게 발현되는 분자인 CD19에 대해 지시된 키메라 수용체로 CD56+ CD3-NK 세포를 형질도입함으로써 이러한 본질적인 저항성을 극복하고자 했습니다. CD3zeta에 연결된 항-CD19 수용체의 발현은 NK 저항성을 극복하고 백혈병 세포의 NK 세포 매개 살상을 현저하게 향상시켰습니다. 이 결과는 키메라 항-CD19-CD3제타 수용체에 4-1BB 공동자극 분자를 추가함으로써 상당히 개선되었습니다. 명백했다(Imai et al., Blood 2005). 항-CD19 수용체를 발현하는 NK 세포는 또한 쥐과 백혈병 모델에서 강력한 항-ALL 활성을 나타냈다(Shimasaki et al., Cytotherapy 2012). 우리의 연구 결과는 NK 세포에 의한 신호 수용체의 강제 발현이 억제 신호를 우회하여 항 ALL NK 세포 요법의 효과를 향상시키는 새로운 수단을 제공할 수 있음을 나타냅니다.

우리의 전임상 연구에서 나타난 유전자 변형 NK 세포의 뛰어난 항백혈병 효능은 비조혈모세포이식 환경에서 내구성이 있는 일배체 NK 세포를 주입할 수 있는 입증된 타당성과 세포 치료에 대한 NUH 팀의 확립된 전문성(국내 유일의 센터 Foundation for the Accreditation of Cellular Therapy(FACT)의 인증을 받은 아시아는 이러한 NK 세포의 임상 시험에 대한 강력한 근거를 형성합니다.

주요 시약(anti-CD19-BB-zeta mRNA)의 준비는 GMP 호환 MaxCyte 전기천공기가 있는 NUH의 조직 공학 및 세포 치료(TECT) 실험실에서 마무리됩니다. NK 세포의 대규모 확장 가능성이 입증되었습니다(Shimasaki et al. Cytotherapy 2012) 및 TECT 실험실에서 검증된 대규모 전기천공의 타당성.

유세포 분석 및 MRD 기술을 사용하여 지속적인 질병의 존재를 확인하고 이 연구에는 제한된 양의 잔여 질병(정상 골수 세포 중 백혈병 림프모세포의 1% 미만)이 있는 환자만 포함할 것입니다. 동일한 MRD 방법을 사용하여 치료 주입의 효과를 모니터링합니다. 연구 대상 환자가 많은 항백혈병 약물에 내성이 있는 질병을 가질 것이기 때문에 컨디셔닝 요법 자체가 백혈병 세포 수에 많은 영향을 미칠 것으로 예상하지 않습니다. 그럼에도 불구하고 컨디셔닝 요법 자체가 약간의 유익한 효과를 가질 수 있기 때문에 절차의 모든 단계, 즉 컨디셔닝 전, 도중 및 후에 백혈병 모세포의 존재에 대해 말초 혈액 및/또는 골수를 스크리닝하는 것이 중요합니다. 그리고 NK 세포 주입 후. 백혈병 세포의 존재는 항원 수용체 유전자의 PCR 증폭 또는 유세포 분석으로 면밀히 모니터링되어 각 개입의 상대적 효과에 대해 약간의 정보를 제공합니다.

2.0. 가설 및 목적

이 연구에서 테스트할 주요 가설은 전기천공에 의해 항-CD19-BB-제타 수용체를 발현하는 NK 세포의 주입이 저항성 B-계통 ALL을 가진 환자에서 측정 가능한 임상 반응을 생성할 수 있다는 것입니다.

3.0. 주요 목표

• 임상 환경에서 mRNA 전기천공에 의해 항-CD19 키메라 항원 수용체로 NK 세포를 리디렉션하는 가능성 및 안전성을 결정합니다.
• 집중 화학 요법 후 MRD 방법에 의해 결정된 바와 같이 지속성 질병이 있는 B 계통 ALL을 갖는 연구 참가자에서 항-CD19 방향전환된 NK 세포의 효능을 결정하기 위함.

4.0. 보조 목표

• 집중 화학 요법 후 잔류 질환이 있는 B 계통 ALL을 가진 연구 참가자에서 방향 전환된 NK 세포의 지속성 및 표현형을 연구합니다.

5.0. 끝점

이 연구에서 치료 반응은 NK 세포 주입 전과 주입 후 여러 간격으로 MRD 수준을 비교하여 측정됩니다. 골수에서 MRD 음성, 즉 유세포 분석 또는 PCR에 의한 < 0.01% 모세포의 달성은 완전 반응으로 간주됩니다. . 부분 반응은 MRD 수준의 ≥ 1 로그 감소로 정의되는 반면, MRD 수준의 < 1 로그 감소는 무반응으로 간주됩니다.

이전 연구에 기초하여, 컨디셔닝 요법으로 인한 일시적인 면역억제 효과가 중단된 후(일반적으로 주입 후 1개월 이내) 일배체 수용자의 부활 세포 면역에 의해 대부분의 경우 기증자 NK 세포가 제거될 것입니다. 그러나 NK 세포 생착은 정상적인 조혈 세포에서 NK 세포 사멸로 인해 장기간 범혈구감소증의 위험 가능성과 함께 더 오랜 기간 동안 지속될 수 있습니다. 이러한 가능성 때문에 우리는 방향 전환된 NK 세포 주입을 받는 환자의 조혈모세포이식 구조를 계획할 것입니다. 실제로, 이 연구에 적합한 대부분의 환자에게 HSCT는 NK 세포 주입 여부에 관계없이 치료 개입이 될 것입니다. 이러한 고려 사항으로 인해 NK 세포 요법의 잠재적 이점은 이 연구에 적합한 환자, 즉 다른 입증된 효과적인 치료법이 없는 지속성 백혈병 환자에 대한 위험을 능가해야 합니다.

CD19는 초기 B 세포 전구체를 포함한 B 세포에서 보편적으로 발현되기 때문에 정상적인 수용자 B 세포도 항-CD19 키메라 수용체로 형질도입된 기증자 NK 세포의 표적이 될 것입니다. 따라서 일시적인 B 세포 림프구 감소증 및 저감마글로빈혈증이 예상됩니다. 우리는 CD19+ 혈구 수를 모니터링하고 한 달에 한 번 Ig 수준을 측정하고 참가자의 IgG 수준이 연령별 범위보다 낮은 경우 참가자에게 정맥 면역 글로불린(IVIG)을 제공합니다.

6.0. 연구 설계 요약

말초 혈액 세포는 기증자로부터 성분채집술에 의해 수집될 것입니다. 조사된 K562-mb15-41BBL 세포와의 공동배양에 의해 10일 동안 생체외 확장 후(Fujisaki et al, Cancer Res 2009; Lapteva et al. Cytotherapy 2012) 및 T 세포 고갈, 일배체 NK 세포는 항-CD19-BB-제타 mRNA로 전기천공될 것입니다. 주입 전에 환자는 NK 세포의 일시적 생착을 촉진하기 위해 면역억제 요법을 받게 됩니다. 주입 후 IL-2를 받아 생체 내에서 NK 세포 생존 및 확장을 지원합니다. NK 세포 주입의 효과는 치료 전과 후의 MRD 수준을 비교하여 결정됩니다.

전기천공 후 수용체 발현은 일시적이며 일반적으로 48시간 후 감소하여 96시간 후에 감지할 수 없게 됩니다. NK 세포 요법의 목적은 지속적인 면역을 유도하는 것이 아니라 종양 세포 부하를 빠르게 줄이는 것이며 주입된 NK 세포는 주입 약 2주 후에 숙주 면역 체계에 의해 거부되기 때문에 발현의 일시적인 특성이 크게 영향을 미치지 않아야 합니다. 항 종양 잠재력. 더욱이, 이 전략을 사용함으로써, 삽입 돌연변이 유발 및 형질도입된 잔류 T 세포의 장기 지속성에 관한 안전 문제가 적용되지 않습니다. 어쨌든 CliniMACS 장치를 사용하여 T 세포의 확장된 제품을 고갈시키고 이식편의 T 세포 수를 <0.05 x로 제한하여 최종 제품의 잔류 T 세포 수를 최대한 최소화합니다. 10^6/kg.