B系統急性リンパ芽球性白血病に対するリダイレクトされたハプロ同一性ナチュラルキラー細胞注入のパイロット研究

1.0。根拠

AML 細胞に対する NK 細胞の十分に確立された細胞毒性とは対照的に、ALL 細胞を溶解する能力は一般に低く、予測が困難です。 我々は、悪性B細胞によって広く発現される分子であるCD19に対するキメラ受容体をCD56+ CD3- NK細胞に形質導入することにより、この固有の耐性を克服しようとしました。 CD3zeta にリンクされた抗 CD19 受容体の発現は、NK 耐性を克服し、NK 細胞を介した白血病細胞の殺害を著しく強化しました。 この結果は、4-1BB 共刺激分子をキメラ抗 CD19-CD3zeta 受容体に追加することによって大幅に改善されました。この構築物を発現する NK 細胞によって生成される細胞毒性は、シグナル伝達受容体が 4-1BB を欠いている NK 細胞の細胞毒性を一様に上回りました。明らかであった (Imai et al., Blood 2005)。 抗 CD19 受容体を発現する NK 細胞は、白血病のマウスモデルでも強力な抗 ALL 活性を発揮しました (Shimasaki et al., Cytotherapy 2012)。 私たちの調査結果は、NK細胞によるシグナル伝達受容体の強制発現が抑制シグナルを回避し、抗ALL NK細胞療法の有効性を高める新しい手段を提供する可能性があることを示しています。

私たちの前臨床研究で示されている遺伝子組み換え NK 細胞の優れた抗白血病効果は、非 HSCT 設定で耐久性のあるハプロ同一性 NK 細胞を注入する実証された実現可能性と、細胞療法における NUH チームによる確立された専門知識 (世界で唯一のセンター) とともに示されています。細胞療法の認定財団 (FACT) によって認定されたアジアは、これらの NK 細胞の臨床試験の説得力のある理論的根拠を形成します。

主要な試薬 (抗 CD19 BB ゼータ mRNA) の調製は、GMP 準拠の MaxCyte エレクトロポレーターがある NUH のティッシュ エンジニアリング & セル セラピー (TECT) 研究所で行われます。 NK 細胞の大規模な増殖の可能性が実証されています (Shimasaki et al. Cytotherapy 2012)、および TECT ラボで検証された大規模エレクトロポレーションの実現可能性。

フローサイトメトリーおよび MRD 技術を使用して、持続性疾患の存在を判断し、限られた量の残存疾患 (正常骨髄細胞中の白血病性リンパ芽球が 1% 未満) の患者のみをこの研究に含めます。 同じ MRD メソッドを使用して、治療注入の効果を監視します。 研究に適格な患者は多くの抗白血病薬に耐性のある疾患を患っているため、コンディショニングレジメン自体が白血病細胞数に大きな影響を与えるとは考えていません。 それにもかかわらず、コンディショニング療法自体がいくつかの有益な効果をもたらす可能性があるため、処置のすべての段階、すなわち、コンディショニングの前、最中、および後に、白血病芽細胞の存在について末梢血および/または骨髄をスクリーニングすることが重要です。そしてNK細胞注入後。 白血病細胞の存在は、フローサイトメトリーまたは抗原受容体遺伝子の PCR 増幅によって綿密に監視されます (いずれかの方法の感度: 10,000 個に 1 個の白血病細胞)。各介入の相対的な効果を明らかにします。

2.0。仮説と目的

この研究でテストされる主な仮説は、エレクトロポレーションによる抗 CD19-BB-ゼータ受容体を発現する NK 細胞の注入が、抵抗性 B 系統 ALL の患者に測定可能な臨床反応を生み出すことができるということです。

3.0。主な目的

• 臨床現場での mRNA エレクトロポレーションによる抗 CD19 キメラ抗原受容体による NK 細胞のリダイレクトの実現可能性と安全性を判断すること。
• 強力な化学療法後にMRD法によって決定された持続性疾患を有するB系統ALLの研究参加者における抗CD19リダイレクトNK細胞の有効性を決定すること。

4.0。副次的な目的

• 集中化学療法後に残存病変があるB系統ALLの研究参加者において、リダイレクトされたNK細胞の持続性と表現型を研究すること。

5.0。エンドポイント

この研究では、治療反応は、NK細胞注入前と注入後のいくつかの間隔でMRDレベルを比較することによって測定されます。 . 部分奏効は、MRD レベルの 1 log 以上の減少と定義されますが、MRD レベルの 1 log 未満の減少は無反応と見なされます。

以前の研究に基づいて、ドナー NK 細胞は、コンディショニング レジメンによって引き起こされる一時的な免疫抑制の効果がなくなった後 (通常は注入後 1 か月以内)、ほとんどの場合、ハプロ同一のレシピエントの復活した細胞性免疫によって排除されます。 しかし、おそらく、NK細胞の生着は、正常な造血細胞でのNK細胞の死滅により、汎血球減少症の長期化のリスクを伴う可能性があり、より長期間持続する可能性があります。 この可能性があるため、リダイレクトされた NK 細胞注入を受けている患者の HSCT レスキューを計画します。 実際、この研究に適格なほとんどの患者にとって、HSCT は、NK 細胞注入を受けるかどうかに関係なく、治療介入となります。 これらの考慮事項により、NK細胞療法の潜在的な利点は、この研究に適格な患者、つまり他に有効であると証明された治療法がない持続性白血病の患者にとってリスクを上回るはずです.

CD19 は初期 B 細胞前駆体を含む B 細胞に普遍的に発現するため、正常なレシピエント B 細胞も、抗 CD19 キメラ受容体で形質導入されたドナー NK 細胞の標的になります。 したがって、一過性の B 細胞リンパ球減少症と低ガンマグロビン血症が予想されます。 CD19 +血球数を監視し、月に1回Igレベルを測定し、参加者のIgGレベルが年齢固有の範囲よりも低い場合は、静脈内免疫グロブリン（IVIG）を提供します.

6.0。研究デザインのまとめ

末梢血細胞は、ドナーからアフェレーシスによって収集されます。 照射された K562-mb15-41BBL 細胞との共培養による 10 日間の ex vivo 増殖後 (Fujisaki et al, Cancer Res 2009; Lapteva et al. Cytotherapy 2012) および T 細胞枯渇、ハプロ同一性 NK 細胞は抗 CD19-BB-zeta mRNA でエレクトロポレーションされます。 注入前に、患者は免疫抑制療法を受けて、NK細胞の一時的な生着を促進します。 注入後、彼らはIL-2を受け取り、in vivoでのNK細胞の生存率と拡大をサポートします。 NK細胞注入の効果は、治療前後のMRDレベルを比較することによって決定されます。

エレクトロポレーション後の受容体発現は一過性であり、通常 48 時間後には低下し、96 時間後には検出できなくなります。 NK細胞療法の目的は持続的な免疫を誘導することではなく、腫瘍細胞の負担を急速に軽減することであり、注入されたNK細胞は約2週間の注入後に宿主の免疫系によって拒絶されるため、発現の一過性は大きな影響を与えるべきではありません.抗腫瘍の可能性。 さらに、この戦略を使用することにより、挿入変異誘発および形質導入された残留 T 細胞の長期持続性に関する安全性の懸念は適用されません。 いずれの場合でも、CliniMACS デバイスを使用して T 細胞の増殖産物を枯渇させ、移植片内の T 細胞の数を <0.05 x に制限することにより、最終産物に残存する T 細胞の数を可能な限り最小限に抑えます。 10^6/kg。