Az őssejtek és az őssejt-exoszómák hatása a retinitis pigmentosában szenvedő betegek vizuális funkcióira

A retinitis pigmentosa (RP) a látásvesztés és a visszafordíthatatlan vakság egyik vezető oka. Állítások szerint 1,4 millió embert érint a világon, és előfordulása 1:4000. Az őssejt-alkalmazások olyan módszerek, amelyek egyre nagyobb jelentőséget kapnak a regeneratív gyógyászat és a szemészet területén. A retina betegségekben, köztük a pigmentos retinitisben végzett számos kísérleti vizsgálaton kívül vannak olyan klinikai tanulmányok is, amelyek sikeres eredményekről számolnak be embereken. A jelenlegi klinikai gyakorlatban legszélesebb körben használt őssejtcsoport a mezenchimális őssejtek. Előnyük, hogy viszonylag könnyen beszerezhetők, és nem váltanak ki súlyos immunválaszt. A szem őssejtterápiáival kapcsolatos klinikai vizsgálatok azt sugallják, hogy az őssejtek a környező szövetek javát szolgálják azáltal, hogy támaszt, például növekedési faktorokat és extracelluláris vezikulákat választanak ki, főleg trofikus és parakrin hatásaik miatt. Az intraokuláris alkalmazásokban megfigyelhető volt a tendencia a mesenchymális őssejteknek a szem körül és kívül történő alkalmazására, beleértve a subtenon és suprachoroidalis alkalmazást olyan mellékhatások miatt, mint a retina leválás és az epiretinális membrán.

Egyéb sejttermékek, amelyeket állatkísérletekben és klinikai kutatásokban vizsgáltak az elmúlt években, az exoszómák. Az exoszómák a sejtekből felszabaduló extracelluláris vezikulák egy alcsoportja. Az exoszómák 30-150 nm méretű extracelluláris vezikulák, amelyek a CD63, CD9, CD81, syntenin-1 és TSG101 exoszomális fehérjék legalább egyikét hordozzák. Az exoszómák a szervezet különböző sejtjeiből választódnak ki, és megtalálhatók a testnedvekben is. Az exoszómák szerepet játszanak a biomolekulák, például lipidek, szénhidrátok, nukleinsavak és fehérjék egyik sejtből a másikba történő szállításában, így a genetikai információátvitelben, az ellentétes sejt átprogramozásában és az intercelluláris kommunikációban működnek. Az exoszómák egyik forrása a mezenchimális őssejtek, amelyek nagy mennyiségű exoszómát választanak ki. A mezenchimális őssejtekből származó exoszómákról beszámoltak arról, hogy terápiás hatást fejtenek ki, akárcsak a mezenchimális őssejteket. Úgy gondolják, hogy az őssejtek klinikai hatásukat is az általuk szekretált parakrin faktorokon keresztül fejtik ki, ahelyett, hogy beültetnék őket a szövetbe. A mesenchymális őssejtek hatásmechanizmusa azonban nem teljesen ismert, és úgy gondolják, hogy az exoszómák hozzájárulnak a hatáshoz. Az exoszómák tárolása és tartóssága előnyökkel járhat a terápiás alkalmazásokban a mezenchimális őssejtekhez képest, és több immunológiai előnyt biztosíthat az allogén alkalmazásokban a sejtes kezelésekhez képest, mivel nem tartalmaznak sejteket.

A mesenchymális őssejtek egyik forrása a Wharton zselé, amely a köldökzsinór mezenchimális szövete. A Wharton gélből származó őssejtek nagy differenciálódási képességük, nagy regenerációs képességük, állandó duplázódási idejük, nagy proliferációs képességük, alacsony immunogenitásuk, valamint a non-invazív módszerek miatt etikai problémákmentességük, valamint könnyű hozzáférhetőségük miatt jó őssejtek forrást jelentenek.

Ez a klinikai vizsgálat olyan betegeket von be, akiknél retinitis pigmentosa diagnosztizálódik. Az RP diagnózisát klinikai szemfenéki vizsgálat, klinikánkon végzett vizsgálatok és genetikai elemzések határozzák meg.

A vizsgálat elején minden önkéntes teljes szemészeti vizsgálaton esik át, beleértve a legjobban korrigált látásélességet, az elülső szegmens és a szemfenék vizsgálatát réslámpával, OCT (optikai koherencia tomográfia), VF (látótér), ERG (elektroretinogram), mfERG (multifokális ERG), OCTA (optikai koherencia tomográfia). A retina és érhártya vastagsága és ellipszoid sávszélessége OCT-ben, MD (átlagos eltérés) érték, amely érzékenységet mutat VF-ben, amplitúdó- és látenciaidőket ERG-ben és mf-ERG-ben, vaszkuláris sűrűség és vaszkuláris áramlási arányok OCTA-ban.

Az önkénteseket véletlenszerűen három csoportba osztják. Az 1. csoport a placebo csoport lesz (45 önkéntes), és 0,5 cm3-es sóoldattal fiziológiás sóoldatot kell alkalmazni a subtenon térben. A betegek 2. csoportja (45 önkéntes) Wharton gélből származó mezenchimális őssejt-szuszpenzió szubtenon injekcióján esik át. A 3. betegcsoportnál (45 önkéntes) Wharton zseléből származó mezenchimális őssejt exoszómákat tartalmazó szuszpenziót alkalmazunk a subtenon távolságra. Minden önkéntesnek egy szeme lesz benne. Az önkéntesek tájékozott beleegyezését kérik.

Az allogén humán Wharton gél szövetből származó mezenchimális őssejteket és exoszómáikat egészséges, 18 év feletti önkéntes nőktől nyerik steril körülmények között a HBV, HCV, HIV vírus és "Treponema Pallidum" (VDRL) tesztek elvégzése után. A születéstől kapott köldökzsinórszövetet steril transzferoldatban szállítják, és az Erciyes Egyetem Genome and Stem Cell GMP (jó gyártási gyakorlatok) tanúsított laboratóriumaiban dolgozzák fel őssejtek előállítására. Az exoszómákat ultracentrifugálási módszerrel ugyanabban a létesítményben nyerik ki.

A subtenon-távolságba történő injekcióhoz a kötőhártyát és a csapot az alsó temporális területtől kb. 10 mm-re egy kis bemetszéssel felnyitják, majd a sclerával párhuzamosan 20 gauge-es ívelt subtenon kanült továbbítanak a hátsó subtenon területére. Minden önkéntesnek antibiotikumot és szteroid cseppeket írnak fel a műtét után.

Az elülső szegmentum és szemfenéki vizsgálat, OCT (optikai koherencia tomográfia), VF 1. napján, 1. hónapjában, 2. hónapjában, 3. hónapjában és 6. hónapjában teljes szemészeti vizsgálatot és vizsgálatokat végzünk és ismét rögzítünk. látótér) ), ERG (elektroretinogram), mfERG (multifokális ERG), OCTA (optikai koherencia tomográfia) vizsgálatok kerülnek elvégzésre.

Ezen túlmenően az 1., 3. és 6. havi viziteknél a vizuális funkciókat szubjektíven értékelő kérdőívet adunk ki. (National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire - 25 / National Eye Institute (USA) Visual Function Questionnaire ). Két álarcos nyomozó fog elemzéseket végezni.

Az eljárás utáni 1. nap, 1. hónap, 2. hónap, 3. hónap és 6. hónap adatait a vizsgálati csoportok között és a csoportokon belül összehasonlítjuk.