Влияние стволовых клеток и экзосом стволовых клеток на зрительные функции у пациентов с пигментным ретинитом

Пигментный ретинит (РП) является одной из ведущих причин потери зрения и необратимой слепоты. Установлено, что в мире им поражено 1,4 млн человек, а его распространенность составляет 1:4000. Применение стволовых клеток — это методы, которые приобретают все большее значение в области регенеративной медицины и офтальмологии. В дополнение ко многим экспериментальным исследованиям заболеваний сетчатки, включая пигментный ретинит, существуют также клинические исследования, сообщающие об успешных результатах на людях. Наиболее широко используемой группой стволовых клеток в современной клинической практике являются мезенхимальные стволовые клетки. Преимущества заключаются в том, что их относительно легко получить и они не вызывают тяжелых иммунных реакций. Клинические исследования в области лечения глаз стволовыми клетками показывают, что стволовые клетки приносят пользу окружающим тканям, секретируя поддержку, такую ​​как факторы роста и внеклеточные везикулы, в основном из-за их трофических и паракринных эффектов. При внутриглазном применении наблюдается тенденция к применению мезенхимальных стволовых клеток вокруг/снаружи глаза, включая субтеноновое и супрахориоидальное применение из-за побочных эффектов, таких как отслойка сетчатки и эпиретинальная мембрана.

Другими клеточными продуктами, которые изучались в исследованиях на животных и в клинических исследованиях в последние годы, являются экзосомы. Экзосомы представляют собой подгруппу внеклеточных везикул, высвобождаемых из клеток. Экзосомы представляют собой внеклеточные везикулы размером 30-150 нм и несут по крайней мере один из экзосомальных белков CD63, CD9, CD81, синтенин-1 и TSG101. Экзосомы секретируются различными клетками организма, а также обнаруживаются в жидкостях организма. Экзосомы играют роль в транспортировке биомолекул, таких как липиды, углеводы, нуклеиновые кислоты и белки, из одной клетки в другую и, таким образом, они функционируют в передаче генетической информации и перепрограммировании противоположной клетки и межклеточной коммуникации. Одним из источников экзосом являются мезенхимальные стволовые клетки, секретирующие большое количество экзосом. Сообщалось, что экзосомы, полученные из мезенхимальных стволовых клеток, обладают терапевтическим эффектом, как и мезенхимальные стволовые клетки. Считается, что стволовые клетки также проявляют свои клинические эффекты через паракринные факторы, которые они выделяют, а не имплантируются в ткани. Однако механизм действия мезенхимальных стволовых клеток до конца не изучен, и считается, что этому эффекту способствуют экзосомы. Хранение и долговечность экзосом могут обеспечить преимущества в терапевтических применениях по сравнению с мезенхимальными стволовыми клетками и могут обеспечить больше иммунологических преимуществ в аллогенных применениях по сравнению с клеточным лечением, поскольку они не содержат клеток.

Одним из источников, из которых могут быть получены мезенхимальные стволовые клетки, является Уортоновское желе, представляющее собой мезенхимальную ткань пуповины. Стволовые клетки, полученные из геля Wharton, являются хорошим источником стволовых клеток благодаря их высокой способности к дифференцировке, высокой способности к регенерации, постоянному времени удвоения, высокой способности к пролиферации, низкой иммуногенности и отсутствию этических проблем благодаря неинвазивным методам и легкой доступности.

В это клиническое исследование будут включены пациенты с диагнозом пигментный ретинит. Диагноз РП ставится на основании клинического осмотра глазного дна, обследований в нашей клинике и генетического анализа.

В начале исследования все добровольцы пройдут полное офтальмологическое обследование, включающее максимально корригированную остроту зрения, осмотр переднего сегмента и глазного дна с помощью щелевой лампы, ОКТ (оптическую когерентную томографию), ФЖ (поле зрения), ЭРГ (электроретинограмму), мфЭРГ (мультифокальная ЭРГ), ОКТА (оптическая когерентная томография). Будут регистрироваться толщина сетчатки и хориоидеи и полоса пропускания эллипсоида в ОКТ, значение MD (среднее отклонение), показывающее чувствительность в VF, амплитуда и время задержки в ERG и mf-ERG, плотность сосудов и соотношение кровотока в сосудах в OCTA.

Добровольцы будут рандомизированы по трое. 1-я группа будет группой плацебо (45 добровольцев), и 0,5 см3 физиологического раствора будут наноситься на субтеноново пространство. 2-й группе пациентов (45 добровольцев) будет проведена субтеноновая инъекция суспензии мезенхимальных стволовых клеток, полученной из геля Wharton. Пациентам 3-й группы (45 добровольцев) на субтеноновое расстояние будет наноситься суспензия, содержащая экзосомы мезенхимальных стволовых клеток из Вартонского желе. Будет включен один глаз каждого добровольца. От добровольцев будет получено информированное согласие.

Аллогенные человеческие мезенхимальные стволовые клетки, полученные из геля Wharton, и их экзосомы будут получены от здоровых женщин-добровольцев старше 18 лет в стерильных условиях после проведения тестов на вирусы ВГВ, ВГС, ВИЧ и "Treponema pallidum" (VDRL). Ткань пуповины, полученная с рождения, будет перенесена в стерильном растворе для переноса и будет обработана для получения стволовых клеток в лабораториях, сертифицированных по геному и стволовым клеткам Университета Эрджиес и GMP (надлежащая производственная практика). Экзосомы будут получены методом ультрацентрифугирования в том же помещении.

Для инъекции в субтеноновое пространство конъюнктиву и сухожилие вскрывают небольшим разрезом примерно в 10 мм от нижней височной области, затем изогнутую субтеноновую канюлю 20 калибра продвигают параллельно склере и вводят в заднюю субтеноновую область. Всем добровольцам будут назначены антибиотики и стероидные капли после операции.

Полный офтальмологический осмотр и обследования в начале исследования будут проводиться и повторно записываться в 1-й день, 1-й месяц, 2-й месяц, 3-й месяц и 6-й месяц осмотра переднего отрезка глаза и глазного дна, ОКТ (оптическая когерентная томография), ФЖ ( поле зрения) ), ЭРГ (электроретинограмма), мфЭРГ (мультифокальная ЭРГ), ОКТА (оптическая когерентная томография).

Кроме того, во время визитов в 1, 3 и 6 месяцев будет проводиться опросник для субъективной оценки зрительных функций. (Опросник зрительной функции Национального института глаз - 25 / Опросник зрительной функции Национального института глаза (США)). Два следователя в масках проведут анализ.

Данные 1-го дня, 1-го месяца, 2-го месяца, 3-го месяца и 6-го месяца после процедуры будут сравниваться между исследовательскими группами и внутри групп.