L'effetto delle cellule staminali e degli esosomi delle cellule staminali sulle funzioni visive nei pazienti con retinite pigmentosa

La retinite pigmentosa (RP) è una delle principali cause di perdita della vista e cecità irreversibile. Si afferma che 1,4 milioni di persone ne sono affette nel mondo e la sua prevalenza è di 1:4000. Le applicazioni delle cellule staminali sono metodi che stanno acquisendo sempre più importanza nel campo della medicina rigenerativa e dell'oftalmologia. Oltre a molti studi sperimentali sulle malattie della retina, inclusa la retinite pigmentosa, ci sono anche studi clinici che riportano risultati positivi sugli esseri umani. Il gruppo di cellule staminali più utilizzato nella pratica clinica attuale è quello delle cellule staminali mesenchimali. I vantaggi sono che sono relativamente facili da ottenere e non inducono gravi risposte immunitarie. Studi clinici nelle terapie con cellule staminali per l'occhio suggeriscono che le cellule staminali apportano benefici al tessuto circostante secernendo supporto come fattori di crescita e vescicole extracellulari, principalmente a causa dei loro effetti trofici e paracrini. Nelle applicazioni intraoculari, c'è stata la tendenza ad applicare cellule staminali mesenchimali attorno/all'esterno dell'occhio, inclusa l'applicazione subtenonica e sopracoroidea a causa di effetti collaterali come il distacco della retina e la membrana epiretinica.

Altri prodotti cellulari che sono stati studiati negli studi sugli animali e nella ricerca clinica negli ultimi anni sono gli esosomi. Gli esosomi sono un sottogruppo di vescicole extracellulari rilasciate dalle cellule. Gli esosomi sono vescicole extracellulari di dimensioni 30-150 nm e trasportano almeno una delle proteine ​​esosomiali CD63, CD9, CD81, syntenin-1 e TSG101. Gli esosomi sono secreti da diverse cellule dell'organismo e si trovano anche nei fluidi corporei. Gli esosomi svolgono un ruolo nel trasporto di biomolecole come lipidi, carboidrati, acidi nucleici e proteine ​​da una cellula all'altra e in questo modo funzionano nel trasferimento di informazioni genetiche e nella riprogrammazione della cellula opposta e nella comunicazione intercellulare. Una delle fonti di esosomi sono le cellule staminali mesenchimali che secernono un'elevata quantità di esosomi. È stato riportato che gli esosomi derivati ​​​​da cellule staminali mesenchimali hanno effetti terapeutici, proprio come le cellule staminali mesenchimali. Si pensa che le cellule staminali esercitino i loro effetti clinici anche attraverso fattori paracrini che secernono piuttosto che essere impiantate nel tessuto. Tuttavia, il meccanismo d'azione delle cellule staminali mesenchimali non è stato completamente compreso e si ritiene che gli esosomi contribuiscano all'effetto. La conservazione e la durata degli esosomi possono fornire vantaggi nelle applicazioni terapeutiche rispetto alle cellule staminali mesenchimali e possono fornire maggiori vantaggi immunologici nelle applicazioni allogeniche rispetto ai trattamenti cellulari poiché non contengono cellule.

Una delle fonti da cui si possono ottenere cellule staminali mesenchimali è la gelatina di Wharton, che è il tessuto mesenchimale del cordone ombelicale. Le cellule staminali provenienti dal gel di Wharton sono una buona fonte di cellule staminali grazie alla loro elevata capacità di differenziazione, elevata capacità di rigenerazione, tempo di raddoppio costante, elevata capacità di proliferazione, bassa immunogenicità e nessun problema etico dovuto a metodi non invasivi e facile disponibilità.

Questo studio clinico arruolerà pazienti con diagnosi di retinite pigmentosa. La diagnosi di RP viene effettuata mediante l'esame clinico del fondo oculare, gli esami nella nostra clinica e l'analisi genetica.

All'inizio dello studio, tutti i volontari saranno sottoposti a un esame oftalmologico completo che include l'acuità visiva corretta, l'esame del segmento anteriore e del fondo con una lampada a fessura, OCT (tomografia a coerenza ottica), FV (campo visivo), ERG (elettroretinogramma), mfERG (ERG multifocale), OCTA (tomografia a coerenza ottica). Verranno registrati lo spessore retinico e coroidale e la larghezza di banda dell'ellissoide in OCT, il valore MD (deviazione media) che mostra la sensibilità in FV, l'ampiezza e i tempi di latenza in ERG e mf-ERG, la densità vascolare e i rapporti di flusso vascolare in OCTA.

I volontari saranno randomizzati in tre. Il primo gruppo sarà il gruppo placebo (45 volontari) e 0,5 cc di soluzione salina fisiologica verranno applicati allo spazio subtenonico. Il 2° gruppo di pazienti (45 volontari) verrà sottoposto a iniezione subtenonica di sospensione di cellule staminali mesenchimali derivate da gel di Wharton. Una sospensione contenente esosomi di cellule staminali mesenchimali da gelatina di Wharton verrà applicata alla distanza del subtenone al 3° gruppo di pazienti (45 volontari). Sarà incluso un solo occhio di ogni volontario. Il consenso informato sarà ottenuto dai volontari.

Cellule staminali mesenchimali derivate da tessuto gel di Wharton umano allogenico e i loro esosomi saranno ottenuti da volontarie sane, che hanno più di 18 anni, in condizioni sterili dopo HBV, HCV, virus HIV e test "Treponema Pallidum" (VDRL). Il tessuto cordonale ottenuto dalla nascita sarà trasportato in una soluzione di trasferimento sterile e sarà processato per ottenere cellule staminali nei laboratori certificati Erciyes University Genome and Stem Cell GMP (buone pratiche di fabbricazione). Gli esosomi saranno ottenuti con il metodo dell'ultracentrifugazione nella stessa struttura.

Per l'iniezione nella distanza subtenonica, la congiuntiva e il tenone verranno aperti con una piccola incisione a circa 10 mm di distanza dall'area temporale inferiore, quindi una cannula subtenonica curva di calibro 20 verrà fatta avanzare parallelamente alla sclera e iniettata nell'area subtenonica posteriore. A tutti i volontari verranno prescritti antibiotici e gocce di steroidi dopo la procedura chirurgica.

Verranno eseguiti e registrati nuovamente l'esame oftalmologico completo e gli esami all'inizio dello studio il 1° giorno, 1° mese, 2° mese, 3° mese e 6° mese dell'esame del segmento anteriore e del fondo oculare, OCT (tomografia a coerenza ottica), FV ( campo visivo) ), ERG (elettroretinogramma), mfERG (ERG multifocale), OCTA (tomografia a coerenza ottica).

Inoltre, alle visite del 1°, 3° e 6° mese verrà somministrato un questionario di valutazione soggettiva delle funzioni visive. (Questionario sul funzionamento visivo del National Eye Institute - 25 / Questionario sulla funzione visiva del National Eye Institute (USA) ). Due investigatori mascherati eseguiranno le analisi.

I dati post-procedura del 1° giorno, 1° mese, 2° mese, 3° mese e 6° mese saranno confrontati tra i gruppi di studio e all'interno dei gruppi.