Effetto del fumo sulle chemochine correlate ai macrofagi prima e dopo il trattamento non chirurgico della perimplantite iniziale (PICF)

1. Approvazione etica e determinazione della dimensione del campione

   Lo studio è stato approvato dal Comitato etico della ricerca clinica dell'Università di Başkent, Ankara, Türkiye (numero di protocollo di studio: D-KD24/01) in conformità con la Dichiarazione di Helsinki del 1975, come rivisto nel 2013.

   L'analisi di potenza è stata condotta utilizzando il software GPower. Sulla base di ricerche precedenti che confrontano i livelli di MIP-1α pre e post trattamento nei campioni PICF, la dimensione minima del campione richiesta è stata calcolata per essere 52 partecipanti, con 26 partecipanti in ciascun gruppo al fine di ottenere una potenza dell'80% (dimensione dell'effetto F = 0,2; Errore α = 0,05). Stima di un tasso di abbandono del 20%, il presente studio mirava a reclutare 63 pazienti.

2. Progettazione dello studio

   La pianificazione dello studio, il reclutamento dei pazienti, i trattamenti e la raccolta dei campioni sono stati eseguiti presso le cliniche del Dipartimento di Parilontologia, Facoltà di Odontoiatria, Università di Gazi, Türkiye, tra gennaio 2024 e ottobre 2024. A tutti gli individui a cui è stata diagnosticata la perimplantite (sanguinamento per-impianto al sondaggio (BOP+) e/o suppurazione, PPD di ≥ 6 mm e perdita ossea crestale radiografica di ≥ 3 mm apicali della porzione più coronale della parte intraosseo di L'impianto dentale alla loro visita iniziale presso le Cliniche di parodontologia della Facoltà di Odontoiatria dell'Università di Gazi, sono stati invitati a prendere parte allo studio.

3. Criteri di inclusione ed esclusione

   I criteri di inclusione erano: 1) disponibilità a partecipare allo studio, 2) con un impianto dentale che è stato caricato almeno un anno prima dell'inizio dello studio, a cui è stata diagnosticata la periimplantite e che ha PD di 6-7 mm , 3) Gli impianti erano in funzione da almeno 1 anni. I criteri di esclusione erano: 1) dopo aver ricevuto terapia parodontale o qualsiasi trattamento di decontaminazione orale o ricevuto antibiotici o steroidi negli ultimi sei mesi prima dell'inizio dello studio, 2) in gravidanza o all'allattamento, 3) Diagnosi di artrite reumatoide, lupus erythematosus, Malattie sistemiche scarsamente controllate (come diabete o ipertensione), 4) con una storia medica di radiazioni o terapia del cancro.

4. Studiare la popolazione

   Sono stati eseguiti esami parodontali e radiografici completi dei denti e degli impianti dentali per tutti i partecipanti al basale. I parametri clinici a livello di sito sono stati misurati in quattro siti di ciascun impianto (mesiale, buccale, distale e linguale/palatale). Le misurazioni includevano PPD (mm), BOP, indice di placca visibile (VPI) e larghezza del tessuto cheratinizzato perim-impianto (≥ 2 mm o <2 mM). Le radiografie peri-apicali sono state ottenute per misurare il livello osseo radiografico peri-impianto. Tutte le misurazioni cliniche sono state eseguite utilizzando una sonda parodontale. Tutte le misurazioni sono state condotte dallo stesso investigatore. I pazienti che avevano PPD ≥ 8 mm attorno ai loro impianti sono stati esclusi dallo studio.

   Per lo studio sono stati reclutati un totale di 63 pazienti con perimplantite che soddisfacevano i criteri di inclusione ed esclusione. A tutti i partecipanti sono state fornite informazioni verbali e scritte sulla natura dello studio e il consenso informato scritto è stato ottenuto da ciascun partecipante. La popolazione dello studio è stata successivamente divisa in due gruppi in base al fumo di sigaretta auto-segnalato. I fumatori erano individui che hanno riferito di fumare almeno una sigaretta al giorno per almeno un anno (fumo per i pazienti con perimplantite (SPI), n = 30), mentre non fumatori non erano individui che non avevano mai usato il tabacco in nessuna forma (non fumatori pazienti con perimplantite (NSPI), n = 33).

5. Trattamento peri-impianto e parodontale

   Tutti i pazienti di entrambi i gruppi hanno ricevuto un trattamento parodontale non chirurgico a bocca intera utilizzando scaler ad ultrasuoni sterili (Piezo Cavitron Ultrasonic Handpiece (HW-5L), EMS, Svizzera)), Currets (LSH6-H7, Osung MND, Korea) e Irrigazioni saline sterili. Il trattamento non chirurgico della perimplantite ha comportato il debridement di accumuli dura e morbidi sulle superfici dell'impianto mediante curette di titanio (scaler di impianto di titanio 204SD, Hu-Fededy) per 15 minuti, seguito dall'irrigazione con soluzione salina sterile. L'anestesia di infiltrazione è stata utilizzata se richiesto dal paziente. Le istruzioni di igiene orale personalizzate sono state fornite a tutti i partecipanti dopo il trattamento. Dopo 2 mesi (8 settimane), i pazienti hanno ricevuto una chiamata per una visita di controllo, tra cui un debridement supraging e istruzioni di igiene orale. Tutte le misurazioni cliniche e radiografiche sono state ripetute 4 mesi dopo il completamento del loro trattamento perimpianto non chirurgico.

6. I campioni PICF di raccolta di campioni sono stati raccolti da tutti i partecipanti prima (T0) e 4 mesi dopo il trattamento non chirurgico perimpianto (T1). È stato utilizzato un protocollo di campionamento di 30 secondi. Prima del campionamento, l'area del campione è stata isolata con involtini di cotone ed essiccata usando un leggero flusso d'aria. Un singolo campione PICF è stato raccolto da ciascuna tasca dell'impianto utilizzando strisce periopaper (oralflow Inc., New York, USA). Queste strisce di carta sono state posizionate 1-2 mm sotto la fessura della tasca e mantenute per 30 secondi. Per ridurre al minimo l'evaporazione, la quantificazione del volume è stata eseguita immediatamente dopo il campionamento utilizzando un dispositivo Periotron 8000 (Oralflow Inc., New York, USA). Il Periotron 8000 è stato calibrato prima di iniziare lo studio e ricalibrato periodicamente. Dopo aver quantificato il volume PICF, ogni striscia di carta è stata posizionata in un tubo Eppendorf asciutto. I campioni sono stati conservati a -80 ° C fino a quando non sono stati trasferiti in ghiaccio secco all'Università di Turku, Institute of Dentistry, Finlandia, per analisi biochimiche.
7. Analisi dei biomarcatori

Ogni campione PICF è stato eluito in 200 µL di soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) contenente albumina sierica bovina allo 0,5%. I tubi sono stati quindi centrifugati a 10.000 g a 4 ° C per 10 minuti. Le concentrazioni di CCL-2, CCL-8, CCL-3 e CXCL-9 sono state rilevate con Luminex® 200 ™ utilizzando kit immunologici multiplex (saggi di chemochine umane Bio-Plex Pro ™, Bio-Rad Laboratories, California, USA) secondo gli USA, secondo gli USA) secondo la California) secondo la California) le raccomandazioni del produttore. Le concentrazioni (PG/mL) sono state convertite nella quantità di mediatore raccolta a 30 secondi (pg/30 s). I limiti inferiori di quantificazione (LLOQ) per ciascuna chemochina erano i seguenti: 0,3 pg/ml per CCL-2, 0,03 pg/ml per CCL-8, 0,4 pg/ml per CCL-3 e 1,8 pg/ml per CXCL- 9.

8. Analisi statistica

L'analisi dei dati è stata eseguita utilizzando IBM SPSS Statistics (versione 29.0 per Windows; IBM Corp). La normalità dei risultati è stata valutata con il test Shapiro-Wilk. Le differenze di gruppo nelle variabili categoriche sono state valutate utilizzando il test di Pearson Chi-quadrato, mentre la distribuzione dell'età tra i gruppi è stata confrontata utilizzando il test t di campioni indipendenti. Il test U di Mann-Whitney è stato applicato per confrontare i risultati clinici e biochimici tra i gruppi. Per confrontare gli esiti di base (T0) e di 4 mesi post-operatorio (T1) delle variabili biochimiche e cliniche all'interno di ciascun gruppo, è stato utilizzato il test firmato Wilcoxon. L'analisi delle misure ripetute del test di varianza (controllato per età) è stata utilizzata per determinare se esiste una differenza nell'efficacia del trattamento nel tempo. Le conversioni logaritmiche (LOG10) sono state applicate ai livelli di chemochine (PG/30 s) prima dell'analisi delle misure ripetute del test di varianza. Un valore p di <0,05 è stato considerato statisticamente significativo per tutti i parametri. Un modello di regressione logistica di quattro parametri è stato utilizzato per calcolare le concentrazioni di chemochine in PICF. CCL-2 è stato rilevato in tutti i campioni, mentre CCL-8 era al di sotto del limite di rilevamento (LOD) in 77 campioni (T0: 55%, T1: 85%), CCL-3 in 30 campioni (T0: 15%, T1 : 40%) e CXCL-9 in 26 campioni (T0: 15%, T1: 34%). Nelle analisi descrittive, a causa di un elevato numero di dati mancanti, CCL-8 è stato escluso dai confronti statistici, mentre le concentrazioni di CCL-3 e CXCL-9 al di sotto della curva di regressione sono state sostituite con un valore pari alla metà del loro limite più basso di quantificazione ( LOD/2)