Disponibilità Metabolica della Metionina nelle Chips di Tempeh tra Donne in Età Riproduttiva Utilizzando il Metodo dell'Ossidazione degli Amminoacidi Indicatori (IAAO) (IAAO)

Per la valutazione pre-studio, i partecipanti dovranno misurare il loro peso corporeo, altezza e dispendio energetico a riposo (REE) utilizzando la calorimetria indiretta.

Il protocollo di studio è un protocollo sperimentale di 3 giorni che consiste in 2 giorni di adattamento e 1 giorno di studio di ossidazione dell'amminoacido indicatore (IAAO). Per ogni protocollo sperimentale di 3 giorni, ai partecipanti verrà fornita una dieta di riferimento per 3 giorni o una dieta a base di tempeh per 3 giorni. Per iniziare un altro protocollo sperimentale di 3 giorni per lo stesso partecipante, sarà richiesto un intervallo di almeno 1 settimana per garantire l'eliminazione completa del tracciante.

Durante ogni periodo di adattamento, a ogni partecipante verranno somministrati 4 pasti uguali al giorno (colazione, pranzo, cena e spuntino) che soddisfano il 100% del loro fabbisogno energetico e proteico giornaliero (Fabbisogno energetico = Dispendio energetico a riposo (REE) × 1,7; Fabbisogno proteico = 1,0 g/kg/giorno × peso corporeo). I pasti forniti includeranno una formula priva di proteine (obbligatoria), biscotti al caramello privi di proteine (obbligatori), una miscela di amminoacidi cristallini o una combinazione della miscela di amminoacidi cristallini con patatine di tempeh. I pasti devono essere terminati dai partecipanti entro 15 minuti. Verrà fornito anche un integratore multivitaminico giornaliero e un integratore di colina da 500 mg. Oltre all'acqua naturale, è consentita solo una tazza di tè o caffè senza zucchero o panna durante i giorni di adattamento.

Durante il periodo di studio IAAO, dopo un digiuno notturno di 12 ore, i partecipanti si recheranno presso il laboratorio metabolico del Kolej Tun Syed Nasir (KTSN) per 8 ore. Verranno forniti un totale di 9 pasti orari isonitrogeni e isocalorici, con ogni pasto che contribuisce per 1/10 al fabbisogno energetico totale (REE × 1,5) e al fabbisogno proteico (1,0 g/kg/giorno). I pasti consisteranno in una formula priva di proteine (obbligatoria), biscotti al caramello privi di proteine (obbligatori) e una miscela di amminoacidi cristallini o una combinazione della miscela di amminoacidi cristallini con patatine di tempeh. Ogni pasto deve essere consumato entro 15 minuti. I pasti totali forniti soddisferanno il 90% del fabbisogno energetico e proteico dei partecipanti. Durante il giorno sperimentale, verranno forniti anche un integratore multivitaminico giornaliero e 500 mg di colina.

Durante il primo al quarto pasto, i partecipanti dovranno solo consumare i pasti forniti. A partire dal quinto pasto, i partecipanti riceveranno un'incorporazione isotopica orale costante. La fenilalanina, un amminoacido indispensabile il cui metabolismo finale produce anidride carbonica, verrà utilizzata come tracciante per misurare l'ossidazione. Inoltre, NaH13CO3 (bicarbonato di sodio-¹³C) verrà somministrato come dose di priming per consentire alla 13CO2 (CO₂ marcata con carbonio-13) nel respiro di raggiungere un plateau entro 2-3 ore. Una dose di 0,176 mg/kg di NaH13CO3 e 0,66 mg/kg di L-[1-13C]fenilalanina verrà somministrata come isotopo di priming durante il quinto pasto. Dal quinto pasto fino all'ultimo pasto, verrà fornita continuamente 1,2 mg/kg di L-[1-13C]fenilalanina. La quantità di fenilalanina fornita come tracciante (escluso l'isotopo di priming) verrà sottratta dalla fornitura dietetica per mantenere un'assunzione totale di fenilalanina di 30 mg/kg/giorno. Verrà fornito anche un totale di 40 mg/kg/giorno (160% del fabbisogno totale di amminoacidi aromatici) di tirosina per garantire che nessuna fenilalanina marcata venga idrossilata per soddisfare il fabbisogno di tirosina. Dopo il quinto pasto, il tasso di produzione di anidride carbonica espirata (VCO2) verrà misurato utilizzando la calorimetria indiretta per 15 minuti.

Per la raccolta dei campioni di respiro, i campioni verranno raccolti ogni 15 minuti prima che il protocollo del tracciante venga avviato (cioè prima del quinto pasto) e ogni 15 minuti dopo che viene raggiunto lo stato stazionario isotopico (circa 2,5 ore dopo la somministrazione dell'isotopo) fino alla fine dello studio. Ulteriori campioni di respiro verranno raccolti 30 minuti dopo la fine dello studio. Ogni campione di respiro verrà raccolto in triplicato utilizzando tubi da 10 mL non rivestiti di silicone. L'arricchimento di 13CO2 nel respiro verrà analizzato utilizzando uno spettrometro di massa a rapporto isotopico a flusso continuo ed espresso come percentuale atomica in eccesso (APE) rispetto al basale. Verrà calcolata la frazione di 13CO2 (F13CO2) dall'ossidazione di L-[1-13C]fenilalanina rispetto alla quantità somministrata.

Utilizzando un modello di regressione lineare ad effetti misti, le pendenze di risposta IAAO di riferimento e di test verranno generate dalle misurazioni F13CO2 e dai corrispondenti apporti di metionina, con un'origine comune della risposta F13CO2 all'apporto di metionina di base. La disponibilità metabolica (MA) della metionina nella proteina di test sarà determinata con il metodo del rapporto delle pendenze utilizzando la seguente equazione:

MA (%) = (Proteina di test / Proteina di riferimento) × 100.