Convalida di un biomarcatore urinario come strumento diagnostico per l'AKI nella sepsi

SFONDO:

La diagnosi precoce e la prognosi del danno renale acuto nei pazienti con sepsi è la chiave per approfondire la nostra comprensione di questa malattia e nella valutazione di nuovi interventi per questa condizione. Sono stati proposti molti biomarcatori urinari, ma nessuno sembra fornire costantemente informazioni aggiuntive oltre ai parametri biochimici clinici e di routine. Alcuni autori hanno proposto di utilizzare un pannello di biomarcatori urinari per aumentare l'accuratezza. Tuttavia, questo approccio non è stato finora testato in un ampio gruppo di pazienti con sepsi. Inoltre, sono state sviluppate tecniche analitiche più nuove e più performanti che giustificano test in campo clinico.

PAZIENTI E METODI:

Saranno inclusi almeno 150 pazienti consecutivi ricoverati in un'unità di terapia intensiva (ICU) di terapia terziaria con sepsi. Dopo il cateterismo vescicale, i campioni urinari saranno raccolti nei punti temporali 0, 4 ore e 24 ore dopo il ricovero, e ulteriormente ogni giorno nei giorni 1-5. I campioni saranno immediatamente centrifugati e congelati a -80°C fino al momento dell'analisi. I campioni saranno estratti rimuovendo le proteine ​​più grandi (>20kDa) e la fase di desalificazione prima dell'analisi di spettrometria di massa. I ricercatori utilizzeranno l'elettroforesi capillare-spettrometria di massa (CE-MS) per valutare i peptidi urinari predittivi di AKI: 20 peptidi che costituiscono il modello di marcatore AKI precedentemente stabilito da una coorte di pazienti in terapia intensiva. Contemporaneamente, i campioni saranno analizzati utilizzando la spettrometria di massa a tempo di volo di ionizzazione per desorbimento laser assistita da matrice (MALDI-TOF MS), una piattaforma alternativa a CE-MS, che è attualmente in fase di sviluppo per l'uso di routine in terapia intensiva. Una prova di concetto della tecnica coinvolta è stata applicata con successo a una serie di campioni di urina di pazienti con diagnosi di diabete che presentavano normoalbuminuria (controlli) e macroalbuminuria (casi).

I dati clinici, demografici e biochimici dei pazienti saranno raccolti durante i primi 5 giorni.

RISULTATO DEL PAZIENTE

• a breve termine:

  • sviluppo di danno renale acuto secondo i criteri RIFLE
  • morte
  • necessità di terapia renale sostitutiva durante la degenza in terapia intensiva

• a più lungo termine

  • morte
  • necessità di terapia renale sostitutiva
  • tasso di filtrazione glomerulare stimato come calcolato da MDRD a 3 mesi, 1 anno e 2 anni.

Utilizzando i cut-off, le curve delle caratteristiche operative del ricevitore, il valore predittivo negativo e positivo verranno utilizzati per descrivere le prestazioni diagnostiche del pannello di biomarcatori da solo o in combinazione con parametri clinici di base e/o biochimici di routine. La regressione logistica univariata e multivariata per la morte sarà utilizzata per valutare il valore prognostico del set di biomarcatori.

Inoltre, nuovi cut-off discriminatori dei modelli proteomici determinati dalle più recenti tecniche di analisi proteomica saranno determinati in un set di addestramento (metà della coorte) e convalidati nell'altra metà della coorte. Utilizzando la piattaforma MALDI-TOF MS, i ricercatori valuteranno i peptidi urinari predittivi di AKI in un set di addestramento (ca. 75 pazienti) con buone prestazioni diagnostiche del pannello dei marcatori (accuratezza superiore a 0,8). Le prestazioni del pannello di biomarcatori saranno valutate in un set di test in cieco di ca. 75 pazienti per valutare la validità del modello nel rilevamento di AKI.