Validering av en urinbiomarkør som diagnostisk verktøy for AKI i sepsis

BAKGRUNN:

Tidlig diagnose og prognose av akutt nyreskade hos pasienter med sepsis er nøkkelen til å fremme vår forståelse av denne sykdommen og i evalueringen av nye intervensjoner for denne tilstanden. Mange urinbiomarkører har blitt foreslått, men ingen enkelt ser ut til å konsekvent gi tilleggsinformasjon på toppen av kliniske og rutinemessige biokjemiske parametere. Noen forfattere har foreslått å bruke et panel med urinbiomarkører for å øke nøyaktigheten. Denne tilnærmingen har imidlertid så langt ikke blitt testet i en stor gruppe pasienter med sepsis. I tillegg er det utviklet nyere og mer effektive analytiske teknikker som krever testing i det kliniske feltet.

PASIENTER OG METODER:

Minst 150 påfølgende pasienter innlagt på tertiær intensivavdeling (ICU) med sepsis vil bli inkludert. Etter blærekateterisering vil det bli tatt urinprøver på tidspunkt 0, 4 timer og 24 timer etter innleggelse, og videre daglig på dag 1-5. Prøver vil umiddelbart sentrifugeres og fryses ved -80°C frem til analyse. Prøver vil bli ekstrahert ved å fjerne større proteiner (>20kDa) og avsaltingstrinn før massespektrometrianalyse. Etterforskere vil bruke kapillærelektroforese-massespektrometri (CE-MS) for å vurdere urinpeptider som forutsier AKI: 20 peptider som utgjør AKI-markørmønsteret som tidligere er etablert fra en kohort av ICU-pasienter. Samtidig vil prøver bli analysert ved hjelp av matrise-assistert laserdesorpsjon ionisering time-of-flight massespektrometri (MALDI-TOF MS), en alternativ plattform til CE-MS, som for tiden utvikles for rutinemessig intensiv bruk. Et proof of concept av teknikken involvert har blitt brukt på et sett med urinprøver fra pasienter diagnostisert med diabetes som presenterer normoalbuminuri (kontroller) og makroalbuminuri (tilfeller).

Kliniske, demografiske og biokjemiske data fra pasienter vil bli samlet inn i løpet av de første 5 dagene.

PASIENTRESULTAT

• på kort sikt:

  • utvikling av akutt nyreskade i henhold til RIFLE-kriterier
  • død
  • behov for nyreerstatningsterapi under intensivopphold

• på lengre sikt

  • død
  • behov for nyreerstatningsterapi
  • estimert glomerulær filtrasjonshastighet som beregnet av MDRD ved 3 måneder, 1 år og 2 år.

Ved å bruke cut-offs, kurver for mottakerdriftskarakteristikk, vil negative og positive prediktive verdier bli brukt for å beskrive diagnostisk ytelse til biomarkørpanelet alene, eller i kombinasjon med grunnleggende kliniske og/eller rutinemessige biokjemiske parametere. Univariat og multivariat logistisk regresjon for død vil bli brukt for å evaluere prognoseverdien til biomarkørsettet.

I tillegg vil nye diskriminerende avskjæringer av proteomiske mønstre som bestemt av nyere proteomiske analyseteknikker bli bestemt i et treningssett (halvparten av kohorten) og validert i den andre halvdelen av kohorten. Ved å bruke MALDI-TOF MS-plattformen vil etterforskerne vurdere urinpeptider som var prediktive for AKI i et treningssett (ca. 75 pasienter) med god diagnostisk ytelse av markørpanelet (nøyaktighet over 0,8). Ytelsen til biomarkørpanelet vil bli vurdert i et blindet testsett på ca. 75 pasienter for å evaluere validiteten til modellen i AKI-deteksjon.