Validación de un biomarcador urinario como herramienta diagnóstica de LRA en sepsis

FONDO:

El diagnóstico precoz y el pronóstico de la insuficiencia renal aguda en pacientes con sepsis es clave para profundizar en el conocimiento de esta enfermedad y en la evaluación de nuevas intervenciones para esta afección. Se han propuesto muchos biomarcadores urinarios, pero ninguno parece proporcionar de forma consistente información adicional además de los parámetros bioquímicos clínicos y de rutina. Algunos autores han propuesto utilizar un panel de biomarcadores urinarios para aumentar la precisión. Sin embargo, hasta ahora este enfoque no se ha probado en un grupo grande de pacientes con sepsis. Además, se han desarrollado técnicas analíticas más nuevas y de mayor rendimiento que garantizan la realización de pruebas en el campo clínico.

PACIENTES Y MÉTODOS:

Se incluirán al menos 150 pacientes consecutivos ingresados ​​en una unidad de cuidados intensivos (UCI) de cuidados terciarios con sepsis. Después del cateterismo vesical, se recolectarán muestras de orina en los puntos de tiempo 0, 4 horas y 24 horas después de la admisión, y más diariamente en los días 1-5. Las muestras se centrifugarán inmediatamente y se congelarán a -80 °C hasta su análisis. Las muestras se extraerán mediante la eliminación de proteínas más grandes (>20 kDa) y el paso de desalinización antes del análisis de espectrometría de masas. Los investigadores utilizarán electroforesis capilar-espectrometría de masas (CE-MS) para evaluar los péptidos urinarios predictivos de LRA: 20 péptidos que constituyen el patrón de marcador de LRA establecido previamente a partir de una cohorte de pacientes de la UCI. Simultáneamente, las muestras se analizarán mediante espectrometría de masas de tiempo de vuelo de ionización por desorción láser asistida por matriz (MALDI-TOF MS), una plataforma alternativa a CE-MS, que actualmente se está desarrollando para uso rutinario en la UCI. Se ha aplicado con éxito una prueba de concepto de la técnica empleada a un conjunto de muestras de orina de pacientes diagnosticados de diabetes que presentaban normoalbuminuria (controles) y macroalbuminuria (casos).

Se recogerán datos clínicos, demográficos y bioquímicos de los pacientes durante los primeros 5 días.

EL RESULTADO DEL PACIENTE

• A corto plazo:

  • desarrollo de insuficiencia renal aguda según criterios RIFLE
  • muerte
  • necesidad de terapia de reemplazo renal durante la estancia en la UCI

• a largo plazo

  • muerte
  • necesidad de terapia de reemplazo renal
  • tasa de filtración glomerular estimada calculada por MDRD a los 3 meses, 1 año y 2 años.

Mediante el uso de puntos de corte, las curvas de características operativas del receptor y el valor predictivo negativo y positivo se utilizarán para describir el rendimiento diagnóstico del panel de biomarcadores solo o en combinación con parámetros clínicos básicos y/o bioquímicos de rutina. Se utilizará la regresión logística univariante y multivariante para la muerte para evaluar el valor de pronóstico del conjunto de biomarcadores.

Además, se determinarán en un conjunto de entrenamiento (la mitad de la cohorte) y se validarán en la otra mitad de la cohorte los nuevos puntos de corte discriminatorios de patrones proteómicos determinados por técnicas de análisis proteómico más recientes. Usando la plataforma MALDI-TOF MS, los investigadores evaluarán los péptidos urinarios que fueron predictivos de LRA en un conjunto de entrenamiento (aprox. 75 pacientes) con un buen rendimiento diagnóstico del panel de marcadores (precisión superior a 0,8) . El rendimiento del panel de biomarcadores se evaluará en un conjunto de pruebas ciegas de ca. 75 pacientes para evaluar la validez del modelo en la detección de LRA.