Validace močového biomarkeru jako diagnostického nástroje pro AKI při sepsi

POZADÍ:

Včasná diagnostika a prognóza akutního poškození ledvin u pacientů se sepsí je klíčem k dalšímu pochopení tohoto onemocnění a při hodnocení nových intervencí pro tento stav. Bylo navrženo mnoho močových biomarkerů, ale zdá se, že žádný z nich konzistentně neposkytuje dodatečné informace kromě klinických a rutinních biochemických parametrů. Někteří autoři navrhli použít ke zvýšení přesnosti panel močových biomarkerů. Tento přístup však dosud nebyl testován u velké skupiny pacientů se sepsí. Kromě toho byly vyvinuty novější a výkonnější analytické techniky, které vyžadují testování v klinické oblasti.

PACIENTI A METODY:

Bude zahrnuto nejméně 150 po sobě jdoucích pacientů přijatých na jednotku intenzivní péče terciární péče (JIP) se sepsí. Po katetrizaci močového měchýře budou vzorky moči odebírány v časových bodech 0, 4 hodiny a 24 hodin po přijetí a dále denně v den 1-5. Vzorky budou okamžitě odstředěny a zmraženy při -80 °C až do analýzy. Vzorky budou extrahovány odstraněním větších proteinů (>20 kDa) a krokem odsolení před analýzou hmotnostní spektrometrií. Vyšetřovatelé použijí kapilární elektroforézu-hmotnostní spektrometrii (CE-MS) k hodnocení peptidů v moči prediktivních pro AKI: 20 peptidů tvořících vzor markerů AKI dříve vytvořený z kohorty pacientů na JIP. Současně budou vzorky analyzovány pomocí matrice asistované laserové desorpční ionizační hmotnostní spektrometrie (MALDI-TOF MS), alternativní platformy k CE-MS, která je v současné době vyvíjena pro rutinní použití na JIP. Důkaz koncepce použité techniky byl úspěšně aplikován na soubor vzorků moči od pacientů s diagnózou diabetu s normoalbuminurií (kontroly) a makroalbuminurií (případy).

Klinická, demografická a biochemická data pacientů budou shromažďována během prvních 5 dnů.

VÝSLEDEK PACIENTA

• v krátkodobém horizontu:

  • rozvoj akutního poškození ledvin podle kritérií RIFLE
  • smrt
  • potřeba renální substituční terapie během pobytu na JIP

• v delším časovém horizontu

  • smrt
  • potřeba renální substituční terapie
  • odhadovaná rychlost glomerulární filtrace vypočtená pomocí MDRD za 3 měsíce, 1 rok a 2 roky.

Pomocí hraničních hodnot, křivek provozních charakteristik přijímače, negativní a pozitivní prediktivní hodnoty budou použity k popisu diagnostického výkonu panelu biomarkerů samostatně nebo v kombinaci se základními klinickými a/nebo rutinními biochemickými parametry. K hodnocení prognostické hodnoty souboru biomarkerů bude použita jednorozměrná a vícerozměrná logistická regrese pro smrt.

Kromě toho budou v tréninkové sadě (polovina kohorty) stanoveny nové diskriminační mezní hodnoty proteomických vzorců, jak jsou určeny novějšími technikami proteomické analýzy, a ověřeny ve druhé polovině kohorty. Pomocí platformy MALDI-TOF MS budou vyšetřovatelé hodnotit močové peptidy, které byly prediktivní pro AKI, v tréninkovém souboru (cca 75 pacientů) s dobrým diagnostickým výkonem panelu markerů (přesnost nad 0,8). Výkon panelu biomarkerů bude hodnocen v zaslepeném testovacím souboru cca. 75 pacientů k vyhodnocení validity modelu v detekci AKI.