Валидация мочевого биомаркера в качестве диагностического инструмента для ОПП при сепсисе

ФОН:

Ранняя диагностика и прогнозирование острого повреждения почек у пациентов с сепсисом является ключом к дальнейшему пониманию этого заболевания и оценке новых вмешательств при этом состоянии. Было предложено много мочевых биомаркеров, но ни один из них, по-видимому, не дает постоянной дополнительной информации в дополнение к клиническим и обычным биохимическим параметрам. Некоторые авторы предлагают использовать панель мочевых биомаркеров для повышения точности. Однако этот подход до сих пор не апробирован на большой группе пациентов с сепсисом. Кроме того, были разработаны более новые и более эффективные аналитические методы, которые требуют испытаний в клинической практике.

ПАЦИЕНТЫ И МЕТОДЫ:

Будут включены не менее 150 последовательных пациентов, поступивших в отделение интенсивной терапии третичного уровня (ОИТ) с сепсисом. После катетеризации мочевого пузыря образцы мочи будут собираться в моменты времени 0, 4 часа и 24 часа после госпитализации, а затем ежедневно в дни 1-5. Образцы будут немедленно центрифугированы и заморожены при -80°C до проведения анализа. Образцы будут извлечены путем удаления более крупных белков (> 20 кДа) и этапа обессоливания перед масс-спектрометрическим анализом. Исследователи будут использовать капиллярный электрофорез-масс-спектрометрию (КЭ-МС) для оценки пептидов в моче, предсказывающих ОПП: 20 пептидов, составляющих маркерный паттерн ОПП, ранее установленный у когорты пациентов ОИТ. Одновременно образцы будут анализироваться с использованием времяпролетной масс-спектрометрии с лазерной десорбцией и ионизацией с использованием матрицы (MALDI-TOF MS), платформы, альтернативной CE-MS, которая в настоящее время разрабатывается для рутинного использования в отделениях интенсивной терапии. Доказательство концепции используемого метода было успешно применено к набору образцов мочи пациентов с диагнозом диабет с нормоальбуминурией (контрольная группа) и макроальбуминурией (случаи).

Клинические, демографические и биохимические данные пациентов будут собираться в течение первых 5 дней.

ПАЦИЕНТ РЕЗУЛЬТАТ

• в краткосрочной перспективе:

  • развитие острого повреждения почек по критериям RIFLE
  • смерть
  • потребность в заместительной почечной терапии во время пребывания в отделении интенсивной терапии

• в долгосрочной перспективе

  • смерть
  • потребность в заместительной почечной терапии
  • расчетная скорость клубочковой фильтрации, рассчитанная MDRD, через 3 месяца, 1 год и 2 года.

Используя пороговые значения, кривые рабочих характеристик приемника, отрицательную и положительную прогностическую ценность будут использовать для описания диагностической эффективности панели биомаркеров отдельно или в сочетании с основными клиническими и/или обычными биохимическими параметрами. Одномерная и многомерная логистическая регрессия смерти будет использоваться для оценки прогностического значения набора биомаркеров.

Кроме того, новые дискриминационные пороги протеомных паттернов, определенные с помощью более современных методов протеомного анализа, будут определены в обучающей выборке (половина когорты) и подтверждены в другой половине когорты. Используя платформу MALDI-TOF MS, исследователи будут оценивать пептиды в моче, которые были предикторами ОПП, в обучающей выборке (около 75 пациентов) с хорошими диагностическими характеристиками панели маркеров (точность выше 0,8). Эффективность панели биомаркеров будет оцениваться в слепом тестовом наборе из ок. 75 пациентов для оценки достоверности модели выявления ОПП.