sCD163 e CD19 come biomarcatori candidati in CIDP e MMN

Le neuropatie periferiche infiammatorie croniche sono caratterizzate da progressivo deterioramento della forza muscolare, perdita di sensibilità, riflessi diminuiti o assenti e alterato controllo motorio fine. Spesso è causata dalla demielinizzazione che è adatta al trattamento ma possono verificarsi anche danni agli assoni soprattutto in caso di trattamento insufficiente. La poliradicoloneuropatia demielinizzante infiammatoria cronica (CIDP) e la neuropatia motoria multifocale (MMN) vengono diagnosticate mediante esame elettrofisiologico, che mostra segni di demielinizzazione e blocchi di conduzione. Inoltre, nella CIDP un elevato livello di proteine ​​nel liquido cerebrospinale e nella MMN il rilevamento di anticorpi anti-GM1 nel sangue supportano la diagnosi.

I pazienti soffrono di una debolezza muscolare diffusa invalidante. La diagnosi si basa principalmente sull'esame neurofisiologico e, tuttavia, la diagnosi può essere difficile da formulare a causa della grande variabilità clinica e dei metodi di esame insensibili, inclusa la mancanza di biomarcatori.

Trattamento di CIDP e MMN CIDP e MMN sono neuropatie immuno-mediate in cui la prima scelta di trattamento è l'immunoglobulina per via endovenosa (IVIG), sebbene i meccanismi alla base dell'effetto dell'IVIG non siano ancora chiariti.

Uno studio precedente implica che i recettori Fc sulle cellule natural killer siano il bersaglio dell'IVIG, perché l'attività citotossica delle cellule NK è stata soppressa, in parte a causa di un declino dose-dipendente del numero di cellule NK circolanti. Inoltre, era presente un blocco dose-dipendente del CD16.

La somministrazione sottocutanea di immunoglobuline (SCIG) è stata studiata come via alternativa alle IVIG nella CIDP e nella MMN. La conclusione è stata che SCIG è fattibile, sicuro ed efficace. Pertanto SCIG ha migliorato la forza muscolare, le prestazioni di deambulazione e il punteggio di disabilità rispetto al placebo e IVIG. SCIG ha solo effetti collaterali locali rispetto a IVIG e inoltre la maggior parte dei pazienti ha preferito SCIG a IVIG, a causa dell'autonomia e del mantenimento di livelli stabili di prestazioni muscolari.

È noto che circa il 30% dei pazienti con CIDP nell'arco di un anno non ha più bisogno di cure per mantenere la forza muscolare. Il trattamento con immunoglobuline è costoso e può, se somministrato per via endovenosa, indurre gravi effetti collaterali (ad es. tromboembolia, anemia emolitica e dermatite esfoliativa). Pertanto, devono essere trattati solo i pazienti che rispondono chiaramente. D'altra parte, è importante trattare in tempo per ridurre la morbilità e la disabilità.

Metodi di esame attuali I pazienti sospettati di CIDP o MMN saranno diagnosticati in base all'anamnesi, agli esami clinici e ai risultati neurofisiologici. Tuttavia, la diagnosi include una pletora di criteri, che illustra la difficoltà di sviluppare standard esatti per CIDP e MMN che possono avere presentazioni cliniche variabili.

Inoltre, come descritto in precedenza, l'esame elettrofisiologico è raccomandato per tutti i pazienti con sospetto di CIDP o MMN. I criteri elettrofisiologici consistono nel blocco parziale della conduzione, nel rallentamento della velocità di conduzione, nella dispersione e nella riduzione dipendente dalla distanza dell'ampiezza del potenziale d'azione motorio composto. Per quanto riguarda l'anamnesi e gli esami clinici, l'esame elettrofisiologico non è sempre risolutivo. I criteri di Koski e i criteri di EFNS/PNS sono due diverse serie di criteri, che vengono utilizzati di frequente. Anche così è importante tenere presente che i criteri Koski hanno una sensibilità e una specificità del 63 e del 99 percento, mentre l'EFNS ha una sensibilità e una specificità dell'81 e del 97 percento. Inoltre, il trattamento precoce della CIDP ha reso la progressione più difficile da caratterizzare poiché è stata modificata una componente temporale.

È ancora controverso se CIDP e MMN siano entità specifiche della malattia o piuttosto sindromi. La MMN è per molti versi simile alla CIDP ma, a differenza della CIDP, la MMN è caratterizzata da assenza di disturbi sensoriali, progressione più lenta e presentazione asimmetrica.

Le cause specifiche delle malattie sono ancora sconosciute, ma è generalmente accettato che le patologie di CIDP e MMN siano immunologicamente basate su più trigger. Secondo questa teoria sono coinvolte sia la parte cellulare che quella umorale del sistema immunitario.

Diversi biomarcatori infiammatori sono stati studiati in relazione alla CIDP, comprese le citochine nel liquido cerebrospinale. Lo studio ha misurato l'interleuchina (IL)-12 e IL-15 (i principali fattori di crescita e differenziazione per le cellule Th-1) e IL-17 (un marcatore dell'espansione e dell'attivazione delle cellule Th-17). In particolare IL-12 è stato trovato coinvolto come potenziale marcatore di attivazione immunitaria nella CIDP.

La biopsia del nervo è stata utilizzata anche alla ricerca di biomarcatori in situ. La conclusione è stata che anche se il numero totale di cellule infiammatorie non distingueva bene tra CIDP e neuropatie non infiammatorie, il modello di cluster di macrofagi attorno ai vasi endoneurali potrebbe essere un semplice marker di infiammazione con buona sensibilità e specificità.

Inoltre, un altro studio ha scoperto che la CIDP è associata a un alto livello di aptoglobina nel liquido cerebrospinale. I meccanismi alla base di tutto ciò non sono ancora stati chiariti. Tuttavia, questo apre all'aptoglobina come possibile biomarcatore utile.

Cluster di differenziazione 19 (CD-19) - un promettente bersaglio di cellule B! Uno studio sulla polineuropatia autoimmune spontanea (SAP) nei topi con diabete non obesi knock-out B7-2, che è un modello animale e imita la forma cronica progressiva della CIDP umana, ha dimostrato che il trattamento con anticorpi monoclonali anti-CD19 (mAb) determina la deplezione delle cellule B e dei plasmablasti accompagnata da livelli sierici ridotti di IgG e IgM e deplezione dei plasmablasti e delle cellule B specifici per P0. Il CD-19 è una proteina che si trova sulla superficie delle cellule B normali e neoplastiche, dal primo stadio di sviluppo delle cellule pre-B fino ai primi stadi della differenziazione delle plasmacellule. La maggior parte dei tumori maligni del lignaggio delle cellule B esprime CD19 a livelli elevati. Pertanto, CD19 è un ampio marcatore del lignaggio delle cellule B e rappresenta un bersaglio potenzialmente importante per l'immunoterapia con mAb non coniugati. In un altro studio stimolando la cellula B CD19 isolata da campioni di sangue di pazienti con CIDP, l'immunoreattività delle cellule B è stata migliorata ma entro 3 giorni dalle infusioni di IVIG, il livello di cellule B nella CIDP è stato sottoregolato.

Cluster di differenziazione 163 (CD-163) - un nuovo modo per misurare CIDP e MMN? CD-163 è un recettore scavenger (riconosce e capta le macromolecole) che segna l'attivazione dei monociti-macrofagi. CD163 funziona per i macrofagi come recettore per i complessi emoglobina-aptoglobina. La forma solubile del recettore è chiamata sCD163 e si trova nel plasma, dove risulta essere regolata in un'ampia gamma di malattie infiammatorie.

Valori fortemente aumentati (>20 mg/l) sono osservati in malattie come la sindrome da attivazione dei macrofagi, la sindrome emofagocitica e l'insufficienza epatica acuta. Inoltre, il livello di sCD163 riflette l'attività della malattia. I pazienti con valori crescenti e alti hanno una prognosi sfavorevole. Valori aumentati (5-20 mg/l) si osservano nelle malattie epatiche, nella sepsi e nella malattia di Gaucher. I pazienti settici con valori superiori a 10 mg/l hanno un rischio 10 volte maggiore di esito fatale. Valori leggermente aumentati (3-5 mg/l) si riscontrano spesso nelle condizioni infiammatorie o infettive e nel cancro.

Ipotesi I pazienti trattati con SCIG per CIDP e MMN hanno concentrazioni più elevate di sCD163 e CD19 nel liquido cerebrospinale e nel siero rispetto ai soggetti sani di controllo ed è correlata alla gravità della malattia.

I pazienti con nuova diagnosi di CIDP o MMN hanno livelli più elevati di sCD163 e CD19 rispetto ai pazienti trattati regolarmente con SCIG.

Scopo Definire la concentrazione di sCD163 e CD19 nel liquido cerebrospinale e nel siero in pazienti con CIDP o MMN rispetto ai controlli (pazienti con sintomi o malattia neurologici non specificati).

Metodo Fonti dei dati I dati utilizzati in questo studio proverranno da diverse fonti, come il registro di registrazione civile danese, il registro nazionale danese dei pazienti e il registro nazionale danese delle prescrizioni.

Le informazioni della cartella clinica saranno incluse e utilizzate in questo progetto, compresa la storia medica passata, l'uso effettivo di droghe, i risultati delle analisi biochimiche e dell'imaging cerebrale, le anomalie agli esami clinici e le conclusioni del lavoro diagnostico dei medici.

Popolazione di studio

La popolazione in studio sarà composta da quattro sottogruppi:

Reclutamento Tutti i partecipanti riceveranno informazioni sul progetto e sarà chiesto di fornire il proprio contenuto alla partecipazione.

I partecipanti riceveranno informazioni scritte e orali sullo studio. Le informazioni orali si svolgeranno presso il Dipartimento di Neurologia, Aarhus Universitetshospital. Inoltre, verrà distribuito l'opuscolo "Før du deltager i et sundhedsvidenskabeligt forsøg" (sulla partecipazione a una sperimentazione clinica).

Le informazioni saranno fornite dal consulente Henning Andersen, MD Lars Makrvardsen o stallone. med Malalai Musleh. È possibile per i partecipanti portare un accompagnatore e viene loro offerta una settimana per considerare la partecipazione.

Verrà richiesto l'accesso alla cartella clinica del paziente, che verrà fornita nel materiale informativo scritto.

Se compaiono nuove conoscenze sugli svantaggi della partecipazione allo studio, i partecipanti saranno informati immediatamente. Inoltre, il partecipante sarà informato se le valutazioni durante lo studio portano a conoscenza dello stato di salute generale del paziente, a meno che ciò non sia stato chiaramente rifiutato dal paziente.

Entro la fine dello studio è possibile per i partecipanti contattare il coordinatore dello studio per ottenere informazioni sui risultati dello studio.

I partecipanti non riceveranno alcuna forma di pagamento, ma potranno ricevere un compenso per il trasporto La partecipazione implica l'estrazione di 3-5 ml di liquido spinale e un campione di sangue di circa 10 ml, che verrà utilizzato per l'analisi di alcuni biomarcatori, come sCD163, CD19 e proteine ​​della mielina.

Altro esame

I pazienti con CIDP e il trattamento con SCIG o IVIG più pazienti con CIDP naïve ai farmaci saranno sottoposti a un esame clinico con quanto segue:

• Punteggio di compromissione della neuropatia (NIS)
• Punteggio complessivo della somma di disabilità (ODSS)
• Neuropathy Symptom Score (NSS) Disturbi o trattamenti che controindicano una puntura lombare. Nel caso in cui un paziente incluso risulti soddisfare i criteri di esclusione dopo le analisi del liquido spinale, il paziente verrà sostituito da un nuovo paziente.

In ogni momento durante il lavoro diagnostico e di conseguenza nel progetto di ricerca gli investigatori lo faranno nel rispetto delle condizioni mentali e fisiche dei pazienti. Il progetto di ricerca sarà svolto secondo la legge sul trattamento dei dati personali e, inoltre, il progetto sarà presentato al sistema informativo regionale comune per la regione Midtjylland.

Analisi Il liquido spinale e il siero saranno analizzati presso il Department of Clinical Medicine, Aarhus University Hospital. I campioni di liquido spinale e sangue saranno depositati in una biobanca di ricerca presso l'ospedale universitario di Aarhus. Il piano è di eseguire tutte le analisi biochimiche contemporaneamente alla raccolta di tutti i campioni. Alla fine del progetto, i campioni saranno pseudo anonimizzati. L'eventuale materiale biologico in eccesso sarà trasferito a una biobanca per ricerche future.

Le concentrazioni di sCD163 nel liquido spinale e nel siero saranno analizzate con tecniche già consolidate presso il Dipartimento di Medicina Clinica, Aarhus University Hospital.

Le concentrazioni di CD19 nel liquido spinale e nel siero saranno analizzate con tecniche consolidate presso il Dipartimento di Immunologia, Aarhus University Hospital.

Potenza e analisi statistiche A causa della rarità di CIDP e MMN e del numero limitato di pazienti, non è rilevante effettuare calcoli di potenza.

Per le analisi statistiche verrà utilizzato il programma STATA. Saranno utilizzati test parametrici o non parametrici a seconda della normale distribuzione dei dati. In tutte le analisi statistiche verrà utilizzato un livello di significatività del 5%.

Prospettive A causa delle numerose varianti cliniche delle polineuropatie infiammatorie e della mancanza di biomarcatori, rimane difficile diagnosticare la CIDP. È molto importante identificare nuovi metodi per la diagnosi e il monitoraggio dei pazienti con CIDP. Ciò può anche consentire una migliore previsione della prognosi e del livello di trattamento necessario.

La patologia della CIDP è ancora sconosciuta, ma è noto che è immuno-mediata. In diversi studi è stato dimostrato che sCD163 è regolato in una gamma più ampia di malattie infiammatorie, suggerendo che sCD163 sia un biomarcatore rilevante per CIDP.

È stato anche dimostrato che il CD19 è un promettente bersaglio delle cellule B per lo sviluppo di agenti modificanti la malattia nelle neuropatie autoimmuni.

Questi risultati possono essere utilizzati come marcatori diagnostici nei pazienti con CIDP e MMN. Considerazioni etiche Tutti i partecipanti saranno informati oralmente e per iscritto sullo studio e saranno presi in considerazione in vista della loro partecipazione. Verrà dato il consenso firmato.

Gli esami eseguiti sui pazienti coinvolti in questo progetto di ricerca sono la puntura lombare, il prelievo di sangue e l'esame clinico.

Una puntura lombare è una procedura utilizzata per raccogliere il liquido spinale cerebrale (CSF) per l'analisi. Il CSF è una promettente fonte di biomarcatori nella CIDP poiché le radici nervose prossimali, che sono colpite all'inizio della malattia, sono in stretto contatto anatomico con lo spazio del CSF. Durante la procedura viene utilizzato un ago cavo per penetrare nel canale spinale a livello della terza-quarta o della quarta-quinta vertebra lombare nella parte bassa della schiena. Il CSF gocciola quindi attraverso l'ago e viene raccolto. L'esecuzione di una puntura lombare comporta alcuni rischi, che includono mal di testa post puntura lombare con un'incidenza del 12%, più comune nei pazienti più giovani. Il più delle volte, il mal di testa ha una breve durata e può essere curato con l'applicazione di un cerotto. Inoltre, la puntura lombare può causare dolore lombare temporaneo e un accumulo di sangue sotto la pelle. C'è un rischio molto basso di sanguinamento nello spazio epidurale con compressione dei nervi spinali e un rischio ancora più basso di infezioni (meningite o meningoencefalite).

Tuttavia, è importante sottolineare che la puntura lombare fa parte dell'allenamento diagnostico di routine per la neuropatia. Tuttavia, i pazienti CIDP trattati con SCIG o IVIG avranno una puntura lombare solo a scopo di ricerca. Non ci sono ulteriori rischi associati alla raccolta di un campione extra di liquido spinale o sangue. In considerazione del basso rischio coinvolto in questo progetto, della gravità e dei costi della malattia e della possibilità di identificare un biomarcatore rilevante nella CIDP, consideriamo questo progetto eticamente accettabile.

Pubblicazione I risultati positivi, negativi e inconcludenti di questo studio saranno pubblicati. I risultati saranno scritti in un articolo per la pubblicazione in una rivista peer reviewed scritta in inglese.