sCD163 e CD19 como biomarcadores candidatos em CIDP e MMN

As neuropatias periféricas inflamatórias crônicas são caracterizadas por deterioração progressiva da força muscular, perda de sensibilidade, reflexos diminuídos ou ausentes e controle motor fino prejudicado. Muitas vezes, é causada por desmielinização que é adequada para tratamento, mas também podem ocorrer danos aos axônios, especialmente em caso de tratamento insuficiente. A polirradiculoneuropatia desmielinizante inflamatória crônica (PDIC) e a neuropatia motora multifocal (MMN) são diagnosticadas pelo exame eletrofisiológico, que mostra sinais de desmielinização e bloqueios de condução. Além disso, no CIDP, um nível elevado de proteína no líquido cefalorraquidiano e na detecção de anticorpos anti-GM1 no sangue no MMN corroboram o diagnóstico.

Os pacientes sofrem de uma fraqueza difusa incapacitante dos músculos. O diagnóstico baseia-se principalmente no exame neurofisiológico e, no entanto, o diagnóstico pode ser difícil devido à grande variação clínica e métodos de exames insensíveis, incluindo a falta de biomarcadores.

Tratamento de CIDP e MMN CIDP e MMN são neuropatias imunomediadas em que a primeira escolha de tratamento é a imunoglobulina intravenosa (IVIG), embora os mecanismos subjacentes ao efeito da IVIG ainda não estejam esclarecidos.

Um estudo anterior sugere que os receptores Fc nas células natural killer são o alvo da IVIG, porque a atividade citotóxica das células NK foi suprimida, em parte causada por um declínio dose-dependente no número de células NK circulantes. Além disso, estava presente um bloqueio dependente da dose de CD16.

A administração subcutânea de imunoglobulinas (SCIG) tem sido estudada como uma via alternativa à IVIG em CIDP e MMN. A conclusão foi que o SCIG é viável, seguro e eficaz. Assim, o SCIG melhorou a força muscular, o desempenho da caminhada e o escore de incapacidade em comparação com o placebo e o IVIG. O SCIG tem apenas efeitos colaterais locais em comparação com o IVIG e, além disso, a maioria dos pacientes preferiu o SCIG ao IVIG, por causa da autonomia e manutenção de níveis estáveis ​​de desempenho muscular.

É sabido que cerca de 30% dos pacientes com CIDP ao longo do ano não precisam mais de tratamento para manter a força muscular. O tratamento com imunoglobulina é caro e pode, quando administrado por via intravenosa, induzir efeitos colaterais graves (p. tromboembolismo, anemia hemolítica e dermatite esfoliativa). Portanto, apenas os pacientes que respondem claramente devem ser tratados. Por outro lado, é importante tratar a tempo para reduzir a morbidade e a incapacidade.

Métodos de exame atuais Os pacientes com suspeita de CIDP ou MMN serão diagnosticados com base no histórico médico, exames clínicos e achados neurofisiológicos. No entanto, o diagnóstico inclui uma infinidade de critérios, o que ilustra a dificuldade de desenvolver padrões exatos para CIDP e MMN que podem ter apresentações clínicas variáveis.

Além disso, conforme descrito anteriormente, o exame eletrofisiológico é recomendado para todos os pacientes com suspeita de PDIC ou MMN. Os critérios eletrofisiológicos consistem em bloqueio parcial da condução, desaceleração da velocidade de condução, dispersão e redução dependente da distância da amplitude do potencial de ação motora composta. Quanto à história médica e exames clínicos, o exame eletrofisiológico nem sempre é conclusivo. Os critérios de Koski e os critérios da EFNS/PNS são dois conjuntos diferentes de critérios, frequentemente usados. Mesmo assim, é importante ter em mente que os critérios de Koski têm sensibilidade e especificidade de 63 e 99 por cento, enquanto o EFNS tem sensibilidade e especificidade de 81 e 97 por cento. Além disso, o tratamento precoce do PDIC tornou a progressão mais difícil de caracterizar, pois um componente temporal foi alterado.

Ainda é controverso se CIDP e MMN são doenças específicas ou síndromes. O MMN é em muitos aspectos semelhante ao CIDP, mas, ao contrário do CIDP, o MMN é caracterizado por nenhum distúrbio sensorial, progressão mais lenta e apresentação assimétrica.

As causas específicas das doenças ainda são desconhecidas, mas é geralmente aceito que as patologias de CIDP e MMN são de base imunológica com múltiplos gatilhos. De acordo com essa teoria, tanto a parte celular quanto a humoral do sistema imunológico estão envolvidas.

Vários biomarcadores inflamatórios foram estudados em relação ao CIDP, incluindo citocinas no LCR. O estudo mediu a interleucina (IL)-12 e IL-15 (os principais fatores de crescimento e diferenciação para células Th-1) e IL-17 (um marcador de expansão e ativação de células Th-17). Especialmente a IL-12 foi encontrada envolvida como marcador potencial de ativação imune em CIDP.

A biópsia de nervo também tem sido utilizada na busca de biomarcadores in situ. A conclusão foi que, embora o número total de células inflamatórias não distinga bem entre CIDP e neuropatias não inflamatórias, o padrão de aglomerados de macrófagos ao redor dos vasos endoneural pode ser um marcador simples de inflamação com boa sensibilidade e especificidade.

Além disso, outro estudo descobriu que o CIDP está associado a um alto nível de haptoglobina no LCR. Os mecanismos subjacentes por trás disso ainda não foram esclarecidos. No entanto, isso abre para a haptoglobina como um possível biomarcador útil.

Cluster de diferenciação 19 (CD-19) - um alvo promissor para células B! Um estudo sobre polineuropatia autoimune espontânea (SAP) em camundongos diabéticos não obesos B7-2 knockout, que é um modelo animal e imita a forma progressiva crônica do CIDP humano, mostrou que o tratamento com anticorpo monoclonal anti-CD19 (mAb) resulta em depleção de células B e plasmablastos acompanhada por diminuição dos níveis séricos de IgG e IgM e depleção de plasmablastos e células B específicos de P0. O CD-19 é uma proteína encontrada na superfície das células B normais e neoplásicas, desde o estágio inicial de desenvolvimento das células pré-B até os estágios iniciais da diferenciação das células plasmáticas. A maioria das malignidades da linhagem de células B expressa CD19 em níveis elevados. Portanto, CD19 é um marcador amplo da linhagem de células B e representa um alvo potencialmente importante para imunoterapia com mAb não conjugado. Em outro estudo, estimulando a célula B CD19 isolada de amostras de sangue de pacientes com CIDP, a imunorreatividade das células B foi aumentada, mas dentro de 3 dias após as infusões de IVIG, o nível de células B no CIDP foi regulado negativamente.

Cluster de diferenciação 163 (CD-163) - uma nova maneira de medir CIDP e MMN? O CD-163 é um receptor scavenger (reconhece e capta macromoléculas) que marca a ativação monócito-macrófago. CD163 funciona para macrófagos como um receptor para complexos de hemoglobina-haptoglobina. A forma solúvel do receptor é chamada sCD163 e é encontrada no plasma, onde se encontra regulada em uma grande variedade de doenças inflamatórias.

Valores fortemente aumentados (>20 mg/l) são observados em doenças como a síndrome de ativação de macrófagos, síndrome hemofagocítica e insuficiência hepática aguda. Além disso, o nível de sCD163 reflete a atividade da doença. Pacientes com valores crescentes e altos apresentam prognóstico desfavorável. Valores aumentados (5-20 mg/l) são observados na doença hepática, sepse e doença de Gaucher. Pacientes sépticos com valores superiores a 10 mg/l têm um risco 10 vezes maior de desfecho fatal. Valores ligeiramente aumentados (3-5 mg/l) são freqüentemente observados em condições inflamatórias ou infecciosas e no câncer.

Hipótese Os pacientes tratados com SCIG para CIDP e MMN têm concentrações mais altas de sCD163 e CD19 em seu líquido cefalorraquidiano e soro em comparação com indivíduos de controle saudáveis ​​e está relacionado à gravidade da doença.

Os pacientes recentemente diagnosticados com CIDP ou MMN têm níveis mais altos de sCD163 e CD19 do que os pacientes tratados regularmente com SCIG.

Objetivo Definir a concentração de sCD163 e CD19 no líquido cefalorraquidiano e soro em pacientes com PDIC ou MMN em comparação com controles (pacientes com sintomas ou doença neurológica não especificada).

Fontes de dados do método Os dados usados ​​neste estudo serão provenientes de várias fontes, como o Registro de Registro Civil Dinamarquês, o Registro Nacional de Pacientes Dinamarquês e o registro nacional de prescrições dinamarquês.

As informações do prontuário médico serão incluídas e usadas neste projeto, incluindo histórico médico passado, uso real de drogas, resultados de análises bioquímicas e imagens cerebrais, anormalidades nos exames clínicos e as conclusões dos diagnósticos médicos.

População do estudo

A população do estudo será composta por quatro subgrupos:

Recrutamento Todos os participantes receberão informações sobre o projeto e serão solicitados a ceder seu conteúdo para participação.

Os participantes receberão informações escritas e orais sobre o estudo. A informação oral terá lugar no Departamento de Neurologia, Aarhus Universitetshospital. Além disso, será distribuído o panfleto " Før du deltager i et sundhedsvidenskabeligt forsøg" (sobre a participação em um ensaio clínico).

As informações serão dadas pelo consultor Henning Andersen, MD Lars Makrvardsen ou stud. com Malalai Musleh. É possível que os participantes tragam um acompanhante e lhes é oferecida uma semana para considerar a participação.

Será solicitado o acesso ao prontuário do paciente, o qual será fornecido no material informativo escrito.

Se surgirem novos conhecimentos sobre as desvantagens de participar no estudo, os participantes serão informados imediatamente. Além disso, o participante será informado se as avaliações durante o estudo trouxerem conhecimento sobre o estado geral de saúde do paciente, a menos que isso tenha sido claramente rejeitado pelo paciente.

Ao final do estudo, é possível que os participantes entrem em contato com o coordenador do estudo para obter informações sobre os resultados do estudo.

Os participantes não receberão nenhuma forma de pagamento, mas podem receber uma compensação pelo transporte proteínas de mielina.

outro exame

Pacientes com CIDP e tratamento com SCIG ou IVIG mais pacientes com CIDP virgens de medicamento serão submetidos a um exame clínico com o seguinte:

• Pontuação de comprometimento da neuropatia (NIS)
• Pontuação geral da soma da incapacidade (ODSS)
• Escore de sintomas de neuropatia (NSS) Distúrbios ou tratamentos que contra-indicam uma punção lombar. Caso um paciente incluído venha a preencher os critérios de exclusão após as análises do líquor, o paciente será substituído por um novo paciente.

Durante todo o processo de diagnóstico e, conseqüentemente, no projeto de pesquisa, os investigadores farão isso respeitando a condição mental e física do paciente. O projeto de pesquisa será realizado de acordo com a Lei de Processamento de Dados Pessoais e, além disso, o projeto será submetido ao sistema de informação regional comum para a região de Midtjylland.

Análises O líquido cefalorraquidiano e o soro serão analisados ​​no Departamento de Medicina Clínica do Aarhus University Hospital. As amostras de fluido espinhal e sangue serão depositadas em um biobanco de pesquisa no Aarhus University Hospital. O plano é realizar todas as análises bioquímicas ao mesmo tempo em que todas as amostras são coletadas. Ao final do projeto, as amostras serão pseudo-anônimas. Qualquer excesso de material biológico será transferido para um biobanco para pesquisas futuras.

As concentrações de sCD163 no líquido cefalorraquidiano e no soro serão analisadas por técnicas já estabelecidas no Departamento de Clínica Médica do Aarhus University Hospital.

As concentrações de CD19 no líquido cefalorraquidiano e no soro serão analisadas por técnicas estabelecidas no Departamento de Imunologia do Aarhus University Hospital.

Poder e análises estatísticas Devido à raridade de CIDP e MMN e ao pequeno número de pacientes, não é relevante fazer cálculos de poder.

O programa STATA será utilizado para análises estatísticas. Serão utilizados testes paramétricos ou não paramétricos dependendo da distribuição normal dos dados. Em todas as análises estatísticas será utilizado um nível de significância de 5%.

Perspectivas Devido às muitas variantes clínicas das polineuropatias inflamatórias e à falta de biomarcadores, o diagnóstico da PDIC permanece difícil. É muito importante identificar novos métodos para diagnóstico e monitoramento de pacientes com PDIC. Isso também pode permitir uma melhor previsão do prognóstico e do nível de tratamento necessário.

A patologia do CIDP ainda é desconhecida, mas sabe-se que é imunomediada. Em vários estudos, o sCD163 demonstrou ser regulado em uma ampla gama de doenças inflamatórias, sugerindo que o sCD163 seja um biomarcador relevante para CIDP.

Também foi provado que CD19 é um alvo promissor de células B para o desenvolvimento de agentes modificadores de doenças em neuropatias autoimunes.

Esses achados podem ser usados ​​como marcadores diagnósticos em pacientes com PDIC e MMN. Considerações éticas Todos os participantes serão informados oralmente e por escrito sobre o estudo e serão considerados para decidir se desejam participar. O consentimento assinado será dado.

Os exames realizados nos pacientes envolvidos neste projeto de pesquisa são punção lombar, coleta de sangue e exame clínico.

A punção lombar é um procedimento usado para coletar líquido cefalorraquidiano (LCR) para análise. O LCR é uma fonte promissora de biomarcadores no CIDP, uma vez que as raízes nervosas proximais, que são afetadas no início da doença, estão em contato anatômico próximo com o espaço do LCR. Durante o procedimento, uma agulha oca é usada para penetrar no canal espinhal no nível da terceira à quarta ou quarta à quinta vértebra lombar na região lombar. O LCR escorre pela agulha e é coletado. A punção lombar envolve algum risco, que inclui cefaléia pós-punção lombar com incidência de 12%, mais comum em pacientes mais jovens. Na maioria das vezes, a dor de cabeça é de curta duração e pode ser curada com a aplicação de um emplastro de sangue. Além disso, a punção lombar pode causar dor lombar temporária e acúmulo de sangue sob a pele. Existe um risco muito baixo de sangramento no espaço epidural com compressão dos nervos espinhais e um risco ainda menor de infecções (meningite ou meningoencefalite).

No entanto, é importante destacar que a punção lombar faz parte do treino diagnóstico de rotina para neuropatia. No entanto, os pacientes CIDP tratados com SCIG ou IVIG terão uma punção lombar apenas para fins de pesquisa. Não há outros riscos associados à coleta de uma amostra extra de líquido cefalorraquidiano ou sangue. Considerando o baixo risco envolvido neste projeto, a gravidade e os custos da doença e o potencial para identificar um biomarcador relevante no CIDP, consideramos este projeto eticamente aceitável.

Publicação Os resultados positivos, negativos e inconclusivos deste estudo serão publicados. Os resultados serão escritos em um artigo para publicação em um jornal inglês revisado por pares.