Biomarcatori precoci nei portatori genetici premanifesti della malattia di Huntington: uno studio pilota (BIO-MH)

La malattia di Huntington (HD) è una malattia autosomica dominante, neurodegenerativa, fatale, causata da una mutazione nel gene hangingtingtin (HTT),1 che si manifesta con disturbi neurologici, psichiatrici e cognitivi. La malattia provoca un grave danno fisico, funzionale e sociale, con un grande impatto sulla qualità della vita dei pazienti e di chi li assiste. Ad oggi, la fisiopatologia della MH rimane in gran parte sconosciuta. La degenerazione neuronale dei gangli della base gioca un ruolo primario nel causare sintomi neuropsichiatrici. Tuttavia, un coinvolgimento corticale è stato evocato nella genesi di altri sintomi della malattia, come i disturbi del sistema visivo.2 Ad oggi è disponibile solo il trattamento sintomatico per i problemi motori e psichiatrici nei pazienti con MH. Il campo di ricerca è ora focalizzato sullo studio delle strategie neuroprotettive genetiche per prevenire la progressione della malattia.3 L'obiettivo terapeutico ideale sarebbe quello di iniziare il trattamento non appena la malattia diventa sintomatica, poiché la mutazione HD è presente fin dalla nascita. Purtroppo l’età ed i sintomi di esordio sono molto variabili, legati principalmente all’entità della mutazione4 ma non solo. Si ritiene che numerosi altri fattori genetici e ambientali svolgano un ruolo nella transizione dallo stadio pre-sintomatico a quello sintomatico, che rimane in gran parte imprevedibile.5 Inoltre, la diagnosi di HD sintomatica si basa tradizionalmente sull’esordio dei sintomi motori (corea, distonia, bradicinesia, problemi di coordinazione).6 Esistono alcune prove che sottili alterazioni strutturali della risonanza magnetica cerebrale e lievi problemi cognitivi e psichiatrici possono essere presenti anche nella fase pre-sintomatica, suggerendo che la fase sintomatica potrebbe iniziare prima della comparsa dei sintomi motori classici.7 Studi clinici che utilizzano la risonanza magnetica morfologica e funzionale hanno recentemente dimostrato un coinvolgimento precoce della corteccia visiva (area associativa visiva, corteccia occipitale laterale), che può spiegare la funzione visuospaziale e i disturbi della percezione visiva già osservati nello stadio pre-sintomatico e sintomatico iniziale dell'MH.8 Il collicolo superiore (SC) è una struttura mesencefalica coinvolta nell'integrazione degli stimoli visivi, nella generazione di saccadi oculari orientate e nei compiti di attenzione.9 Una disfunzione precoce del CS è stata dimostrata in altre malattie dei gangli della base, come il morbo di Parkinson (PD)10 e la distonia focale.11 Questa struttura potrebbe anche essere coinvolta precocemente nella patogenesi dei disturbi visivi e dei cambiamenti saccadici oculari descritti in HD.12 Ad oggi non esistono dati riguardanti lo stato funzionale delle SC in risposta agli stimoli visivi nella MH.

I problemi di andatura e di equilibrio nell'HD sono comuni nella fase sintomatica della malattia e rappresentano un rischio importante di cadute insieme a movimenti involontari anomali.13 Possono essere presenti nella fase iniziale della malattia, con una gravità lieve. Ad oggi non sono disponibili dati sulla valutazione specifica dell'andatura nei portatori pre-sintomatici di HD. Sottili problemi di andatura con conseguente alterazione dei parametri spaziotemporali, non rilevabili con l'esame clinico standard, potrebbero essere presenti anche nei portatori asintomatici del gene HD. Le nuove tecnologie basate su strumenti di realtà virtuale 3D potrebbero essere di grande interesse nella diagnosi di problemi di deambulazione molto precoci nei soggetti MH pre-sintomatici.

Anche i problemi cognitivi sono comuni nella MH, e vanno dal lieve deterioramento cognitivo nei soggetti pre-manifesti14 alla demenza nella malattia avanzata.15 Il deterioramento cognitivo ed emotivo è correlato alla degenerazione dei gangli della base nella MH, che coinvolge progressivamente le regioni limbiche frontali e sottocorticali.16 È noto che i dati di tracciamento oculare sono buoni indicatori dell’orientamento dell’attenzione. Recentemente, il nostro team ha dimostrato che la PD è associata in particolare alla disfunzione del SC.10,17 Allo stesso tempo, i pazienti con PD hanno difficoltà a produrre e riconoscere le espressioni emotive facciali e vocali e sono meno reattivi agli stimoli negativi rispetto a HS.18 Poiché la malattia di Parkinson e la MH condividono disfunzioni simili della rete dei gangli basali, potrebbero condividere anche cambiamenti cognitivi ed emotivi simili, che possono essere presenti fin dall'esordio della MH, a causa di deficit strutturali e/o funzionali nelle aree limbiche frontali e sottocorticali. Ad oggi, nessuno studio ha indagato il comportamento emotivo e le reazioni di orientamento correlate al protocollo specifico di MRI funzionale (fMRI) nei portatori di HD presintomatici.

Obiettivi:

L'obiettivo primario del nostro studio è indagare la funzione delle SC in risposta alla stimolazione visiva utilizzando una fMRI nei portatori del gene HD premanifesto (PMGC) rispetto ai soggetti sani (HS). La nostra ipotesi principale è la disfunzione del CS nella fase pre-sintomatica della malattia (ruolo del CS come biomarcatore precoce della malattia).

Gli obiettivi secondari saranno:

1. Studiare i parametri dell'andatura utilizzando apparecchiature di realtà virtuale 3D in PMGC rispetto a HC, per dimostrare che sono anormali nella fase pre-sintomatica della malattia.
2. Studiare il comportamento cognitivo/emotivo nel PMGC rispetto all'HC, per dimostrare che è anormale nella fase pre-sintomatica della malattia.
3. Studiare la correlazione tra andatura, neuroimaging, dati cognitivi/emotivi e varie variabili cliniche e neuropsicologiche.
4. Studiare i potenziali profili di sottotipi presintomatici nei portatori di MH, sulla base di analisi di correlazione di neuroimaging, valutazioni cliniche, cognitive / emotive.

Metodologia:

Il nostro studio è uno studio pilota prospettico, monocentrico, caso-controllo. Saranno inclusi dieci PMGC e dieci HS abbinati per età (+/- 5 anni) e sesso. I principali criteri di inclusione saranno: 1. Per PMGC: diagnosi HD confermata da test genetici (triplette CAG ≥ 36 nel gene HTT); Scala di valutazione unificata della malattia di Huntington19 Punteggio motorio totale (UHDRS-TMS) ≤ 5; età 18-70 anni. 2. Per HC: esame neurologico normale; età 18-70 anni. I principali criteri di esclusione sia per PMGC che per HS saranno: principali malattie attive oftalmologiche e psichiatriche; deterioramento cognitivo (Montreal Cognitive Assessment, punteggio MoCA < 25/30); problemi di andatura legati a condizioni non neurologiche; controindicazioni alla risonanza magnetica cerebrale.

Progettazione dello studio:

Selezione della popolazione in studio e inclusione nello studio (V0). Il PMGC sarà selezionato presso l'Unità dei Disturbi del Movimento dell'Ospedale Universitario di Grenoble durante una consultazione neurogenetica dopo i test genetici eseguiti presso il Servizio di Genetica del CHU Grenoble Alpes. Il reclutamento degli HS avverrà mediante annunci pubblicati sul sito di scienze cognitive del CNRS (http://www.risc.cnrs.fr/), e pubblicati nel Servizio di Neurologia, nei laboratori di ricerca appartenenti all'UGA e sul sito web dell'associazione dei pazienti affetti da MH (https://huntington.fr). Il consenso informato allo studio sarà firmato dai partecipanti. Verranno verificati i criteri di inclusione ed esclusione e la valutazione neurologica sarà realizzata da un neurologo esperto in disturbi del movimento.

Visita oftalmologica (V1). Il PMGC e l'HS eseguiranno un esame oftalmologico (misurazione dell'acuità visiva, del fondo dell'occhio, del campo visivo). L'intervallo di tempo massimo tra V0 e V1 sarà di 1 mese.

Valutazione neuropsicologica (V2). Una valutazione neuropsicologica completa sarà eseguita nel PMGC da un neuropsicologo esperto in disturbi del movimento, includendo: a. valutazione delle funzioni esecutive mediante punteggio frontale, Stroop Delis-Kaplan, sequenza lettere/numeri (versione orale del TMT); B. Valutazione della memoria mediante WAIS IV, blocchi Corsi, RL/R116 e test Doors; C. Valutazione delle funzioni strumentali con gli item BJLO-15, VOSP, BECS; D. Valutazione comportamentale con BDI-II, LARS, SHAPS, STAI, UHDRS (parte psico-comportamentale).

Sessione di risonanza magnetica funzionale (V3). I soggetti presintomatici e l'HS eseguiranno una sessione di fMRI. L'intervallo di tempo tra V2 e V3 sarà impostato tra 2 settimane e 2 mesi. Le acquisizioni fMRI verranno eseguite per 1 ora sotto stimolazione visiva, secondo il protocollo sviluppato dal nostro team.

Valutazione dell'andatura (V4). I parametri dell'andatura di PGMC e HS saranno valutati durante la visita di 1 ora utilizzando una speciale attrezzatura 3D nell'Unità Disordini del Movimento. L'intervallo di tempo tra V3 e V4 sarà impostato tra 2 settimane e 2 mesi.

Valutazione cognitiva/emotiva (V5). La popolazione in studio eseguirà due diverse sessioni sperimentali: una utilizzando l'eye-tracking per un compito che prevede la libera esplorazione di stimoli emotivi e l'altra utilizzando la fMRI accoppiata all'eye-tracking per compiti basati sulle sensazioni emotive e sulla tendenza ad agire. L'intervallo di tempo tra V4 e V5 sarà impostato tra 2 settimane e 2 mesi.

Dopo la V5, lo studio terminerà. Valutazione di neuroimaging La procedura di neuroimaging comprende: risonanza magnetica cerebrale anatomica e di perfusione e fMRI con un protocollo di stimolazione visiva.8 procedura fMRI. Le acquisizioni MRI verranno eseguite presso la struttura MRI IRMaGE di Grenoble utilizzando uno scanner MRI Philips Achieva da 3 Tesla per tutto il corpo dotato di una bobina per la testa SENSE a 32 canali. Ai partecipanti verrà chiesto di fissare una croce localizzata al centro di uno schermo davanti ai loro occhi, su cui vengono presentati gli stimoli visivi per controllare le saccadi oculari. Durante ogni sessione funzionale, la PRL e i movimenti oculari verranno monitorati utilizzando l'eye-tracker ASL 6000. Per mantenere e controllare l'attenzione, a ciascun partecipante verrà chiesto di premere un pulsante quando cambia l'orientamento della croce. Il protocollo di stimolazione visiva comprende una serie di scacchiere acromatiche con quattro livelli di contrasto di luminanza (1%, 3%, 5% e 9%) e lampeggianti alla frequenza di 4Hz su sfondo grigio. Ogni esecuzione fMRI è composta da quattro blocchi di stimolazione visiva di 12 secondi, uno per ciascun contrasto (Figura 1) e cinque intervalli di fissazione di 12 secondi. La sessione MRI funzionale completa è composta da nove sequenze di scansione, che portano a 36 presentazioni a blocchi randomizzate di ciascun livello di contrasto di luminanza. Il segnale cardiaco viene registrato indirettamente in base al polso emodinamico sulla punta del dito utilizzando l'unità di pletismografia del polso collegata allo scanner MRI.

Sequenze di risonanza magnetica. Durante ogni sessione di risonanza magnetica verranno eseguite misurazioni funzionali, anatomiche e di perfusione. Per le scansioni funzionali, verrà utilizzata una sequenza di imaging planare gradient echo standard. Verranno acquisite 25 fettine (1,5 mm) che coprono il SC, il nucleo genicolato laterale (LGN) e la corteccia dell'area visiva primaria (V1). Le immagini strutturali ad alta risoluzione verranno acquisite utilizzando sequenze 3D MP-RAGE e FGATIR ​​pesate T1 e utilizzate per la delineazione manuale delle nostre regioni di interesse (ROI) (Figura 2). Una sequenza pseudo-continua di etichettatura dello spin arterioso (ASL) dell'intero cervello verrà utilizzata per misurare la perfusione del tessuto cerebrale.

Valutazione dell'andatura

La valutazione del protocollo dell'andatura verrà eseguita utilizzando un'apparecchiatura specifica 3D sviluppata da Social Dreams® Enterprise. Questa attrezzatura è già disponibile sul mercato, con autorizzazione CE (www.socialdreams.fr). È stato applicato in studi clinici in corso che studiano la funzione dell'andatura e la stimolazione cognitiva in pazienti con malattia di Alzheimer nel Servizio Geriatrico del CHU di Lione, Francia. Dati non ancora pubblicati). L'attrezzatura comprende:

1. PERCEPTION NEURON3 (PN3, figura 3): una suite integrata multisensore per la cattura del movimento del corpo, in grado di catturare qualsiasi movimento del corpo, senza vincoli di spazio, illuminazione o ambiente. Il "Body Kit" PN3 comprende: Sensori corpo PN3 (17); Sensore di ricambio PN3 (1); Ricetrasmettitore USB PN3 (1); Cinghie per il corpo (1 set); Dock di ricarica (3); Chiavetta di licenza Axis Studio (1); Cavo da USB-A a USB-C (3); Da USB-A maschio a USB-C femmina; Software di acquisizione e registrazione Axis Neuron.
2. PICOG3 (figura 4): un visore VR 3DOF con schermo 4K e sistema audio integrato, con sei gradi di libertà, in grado di tracciare i movimenti sia della testa che del corpo, e di riprodurli nella Realtà Virtuale con accuratezza realistica, senza sensori esterni necessario. Il kit include anche: un router TP-LINK TL-WR902AC Router senza fili Dual-Band Wi-Fi AC (AC430+ N300); un tablet tattile Lenovo Tab P11 - 11'' 2K LCD (processore Qualcomm Snapdragon 662 8Coeurs, 4 Go de RAM, UFS 64 Go, Qualcomm Adreno 610 GPU, Android 10, 4G LTE, WiFi+Bluetooth); due joystick.

I parametri spazio-temporali dell'andatura saranno valutati nel corso di tre diverse sessioni (5 minuti/sessione). Verrà eseguita una pausa di 5 minuti tra ciascuna sessione. Verranno creati tre diversi scenari 3D, con livelli di difficoltà di andatura crescenti (ostacoli, svolte…), e proiettati utilizzando il visore PICOG3 per ciascuna delle tre sessioni.

Valutazione cognitivo/emotiva

1. La sessione di fMRI verrà eseguita presso la struttura IRMaGE MRI di Grenoble (vedere valutazione di neuroimaging).

   Stimoli: l'attività fMRI comporterà la visualizzazione individuale di fotografie a colori di scene naturali. Queste fotografie verranno prese dal database di immagini selezionato per lo studio di eye-tracking descritto di seguito. Comprenderanno 60 stimoli negativi, 60 stimoli positivi e 60 stimoli neutri divisi in 2 gruppi di stimoli: un gruppo (gr1High) includerà stimoli emotivi negativi e positivi ad alta attivazione e stimoli neutri e l'altro gruppo (gr2Blow) includerà stimoli a bassa attivazione di stimoli emotivi negativi e positivi e di stimoli neutri.

   Gli stimoli verranno proiettati su uno schermo sul retro del magnete, che i partecipanti potranno vedere tramite uno specchio fissato all'antenna a radiofrequenza della testa.

   Sperimentazione. L'esperimento avrà una durata massima di 1 ora, compreso il tempo di allestimento, le sessioni e le pause. Ciascun partecipante eseguirà 2x2 scansioni MRI funzionali (durata totale 22 minuti): 2 scansioni verranno eseguite con stimoli ad alta attivazione (grp1High) e altre 2 con stimoli a bassa attivazione (grp2Blow). L'ordine delle scansioni dei 2 tipi di stimoli (attivazione alta e bassa) sarà alternato tra PMGC e HS. Ciascuna scansione presenterà una successione di fotografie di scene naturali di valenza negativa, positiva e neutra (30 di ciascuna) ed eventi nulli (croce di fissazione che sostituisce la fotografia nella prova) secondo un paradigma misto. Ogni fotografia verrà presentata per 1 secondo, intervallata da una croce di fissazione della durata di 1500 ms. Le 2 scansioni di ciascuna tipologia di stimolo saranno distinte in base alla natura del compito da svolgere: compito emotivo o compito di tendenza all'azione. Nel compito emotivo, il partecipante dovrà indicare la sua esperienza emotiva per ogni scena nel modo più rapido e preciso possibile non appena appare la fotografia, ovvero dovrà decidere, per ogni prova, se la scena è spiacevole, piacevole o neutra (nessuna emozione) premendo il pulsante di risposta corrispondente. Durante il compito di tendenza all'azione, il partecipante dovrà indicare nel modo più rapido e preciso possibile l'azione che compierebbe se si trovasse nella realtà in questa situazione non appena appare la fotografia, ovvero dovrà decidere, per ogni prova, se si allontanerebbe (evita), si avvicinerebbe o non si muoverebbe, premendo il pulsante di risposta corrispondente. Ogni attività comporterà 3 scelte di risposta corrispondenti a 3 scelte di pulsanti. L'assegnazione dei pulsanti alle 3 emozioni (compito emotivo) o alle 3 tendenze all'azione (compito d'azione) sarà indicata in anticipo ai partecipanti e sarà controbilanciata tra i partecipanti. Le risposte e i tempi di risposta del partecipante verranno registrati per ciascuna prova. I partecipanti acquisiranno familiarità con ciascuna attività in anticipo, utilizzando prove di formazione diverse da quelle utilizzate nell'esperimento. Le regioni cerebrali di interesse selettivo per l'elaborazione emotiva verranno identificate funzionalmente per ciascun partecipante eseguendo una scansione "localizzatore" di 5 minuti. I partecipanti visualizzeranno fotografie e scrambles (assemblaggio casuale di pezzi di scena) di scene naturali di valenza negativa (scene di mutilazione) e valenza neutra (ambienti, case) in blocchi separati di un paradigma a blocchi e verrà chiesto di indicare quando seguono 2 fotografie identiche l'un l'altro. Durante le acquisizioni fMRI (eccetto durante il localizzatore), le posizioni e i movimenti degli occhi verranno registrati utilizzando un oculometro. La procedura di calibrazione prima di ogni scansione funzionale e durante l'esperimento sarà identica a quella descritta nel precedente esperimento di eye-tracking. Tra le 2 serie di scansioni verrà acquisita una MRI anatomica ad alta risoluzione di 4 minuti al fine di normalizzare i dati MRI (registrazione) tra le scansioni dello stesso partecipante e tra i partecipanti. L'esecuzione sperimentale nella risonanza magnetica sarà completata dall'acquisizione di un'immagine di perfusione di 8 minuti e di un'immagine di diffusione di 8 minuti (DTI) ottimizzata per il sistema visivo. L'immagine di perfusione ci consentirà di garantire che il segnale BOLD venga interpretato in buone condizioni di perfusione. Durante la risonanza magnetica anatomica e il DTI, i partecipanti guarderanno un film per passare il tempo o potranno chiudere gli occhi se lo desiderano. Al termine delle acquisizioni MRI, dopo una pausa, il partecipante eseguirà un compito finale di valutazione soggettiva di fotografie emotive (200), comprese quelle utilizzate nello studio fMRI, per un massimo di 20 minuti. Il compito consisterà nel valutare accuratamente il livello di valenza, attivazione e tendenza all'azione di ciascuna fotografia. Questa valutazione aiuterà a perfezionare le analisi dei dati fMRI e a stabilire un database di immagini normative per i pazienti affetti da Parkinson de novo per studi futuri.

2. Valutazione dell'eyetracker: i movimenti oculari verranno misurati durante le sessioni di risonanza magnetica utilizzando EyeLink 1000 plus compatibile con la risonanza magnetica (SR Research). Il diametro pupillare, le saccadi e il battito di ciglia verranno quantificati utilizzando il software EyeLink. La stessa attrezzatura è disponibile al di fuori della risonanza magnetica per le misurazioni del controllo comportamentale.

Analisi statistica L'esito primario dello studio è la misurazione dei cambiamenti del segnale BOLD (Blood Oxygen Level Dependent) utilizzando fMRI (3 Tesla), in due regioni sottocorticali, SC, LGN e V1 in risposta a stimoli visivi, in PMGC rispetto a HS . L'analisi del segnale BOLD per queste tre ROI verrà eseguita per entrambi gli emisferi insieme. Verrà eseguita una correzione Bonferroni tra i livelli di luminanza. Il test di Friedman verrà utilizzato per analizzare gli effetti delle variazioni di contrasto di luminanza di ciascuna ROI all'interno di ciascun gruppo. Il test di Mann-Whitney verrà utilizzato per confrontare tra i gruppi la risposta di ciascuna ROI per ciascun contrasto di luminanza. L'analisi della varianza (ANOVA) verrà utilizzata per valutare i dati di perfusione cerebrale all'interno e tra gruppi e regioni di interesse (SC, LGN e V1). Poiché il SC è coinvolto anche nel controllo delle saccadi oculari volontarie e riflessive, investigheremo i movimenti oculari durante lo studio MRI. Il numero di saccadi per ciascun partecipante verrà calcolato dall'analisi del segnale oculomotore. Il numero di rilevazioni riuscite delle variazioni della croce centrale durante il compito attenzionale tra i due gruppi sarà analizzato utilizzando il test di Mann-Whitney.

Per quanto riguarda la dimensione del campione, il nostro studio precedente ha dimostrato che, utilizzando il nostro specifico paradigma fMRI su 20 individui, la dimensione dell'effetto era sufficiente per consentire una solida analisi statistica della modulazione del segnale BOLD nelle strutture visive di interesse8. Un'analisi di potenza effettuata nei due gruppi di studio mostra che il numero di soggetti coinvolti potrebbe consentire di trarre conclusioni valide (potenza G = 0,94). Tutte le analisi statistiche saranno eseguite dal Neuroimaging Team (piattaforma di ricerca IRMAGE, GIN).

I risultati secondari sono:

1. Misurazione dei parametri spaziotemporali dell'andatura (tempo di stance, tempo di oscillazione, tempo di doppio supporto, tempo di falcata, lunghezza del passo e lunghezza del passo) durante i tre diversi scenari visivi 3D impegnativi dell'andatura in PMGC rispetto a HS. L'analisi di questi dati verrà eseguita utilizzando i software dedicati Axis Neuron e un pacchetto software di analisi muscolo-scheletrica sviluppato in MATLAB®.

2. Confronto di misure comportamentali, tempi di reazione e tassi di risposta congruenti tra PMGC e HS.

   Sessione di eye-tracking: il tasso medio di orientamento della prima saccade e la latenza media della prima saccade saranno analizzati statisticamente per ciascuna valenza emotiva in base al livello di attivazione e al tipo di coppia utilizzando un'ANOVA a misure ripetute con la popolazione (pazienti e controlli sani) come variabile tra soggetti e livello di attivazione (ALTO e BASSO) e valenza dello stimolo secondo coppie (NEG con positivo, NEG con neutro, POS con negativo, POS con neutro, NEU con positivo e NEU con negativo) come variabili intra-soggetti. I confronti delle medie sono stati valutati utilizzando un test post-hoc di Tukey. Per tutte le analisi statistiche, la soglia di significatività sarà 0,05. Come per gli altri parametri oculomotori verranno considerati due livelli di analisi: analisi sulla durata totale di presentazione delle coppie di stimoli e per periodo temporale. Per ciascun partecipante e ciascuna condizione sperimentale (tipi di coppie, intensità degli stimoli), verranno calcolati i valori medi dei diversi parametri considerati (durata delle fissazioni, velocità e dispersione delle saccadi oculari per ciascuno stimolo di ciascuna coppia) sulla durata totale di presentazione delle coppie di scene e analizzate statisticamente per ciascuna valenza emotiva (negativa, positiva e neutra) in base al tipo di coppia e al livello di attivazione dello stimolo utilizzando un'ANOVA a misure ripetute con popolazione (pazienti e controlli sani) come variabile tra soggetti e attivazione livello (ALTO e BASSO) e valenza dello stimolo secondo coppie (NEG con positivo, NEG con neutro, POS con negativo, POS con neutro, NEU con positivo e NEU con negativo) come variabili entro soggetti. I confronti delle medie sono stati valutati utilizzando un test post-hoc di Tukey. Per tutte le analisi statistiche, la soglia di significatività sarà 0,05.

   Misurazioni di eye-tracking dallo studio fMRI: verranno estratti parametri simili allo studio di eye-tracking 1, come la latenza della prima saccade e la velocità e la durata delle fissazioni per ciascuno stimolo. Saranno analizzati statisticamente utilizzando una ANOVA a misure ripetute con la popolazione (pazienti vs controlli) come variabile tra soggetti e il compito (tendenza emotiva e all'azione), il livello di attivazione (alto e basso) e la valenza degli stimoli (negativo , positiva, neutra) come variabili entro soggetti. I confronti delle medie sono stati valutati utilizzando un test post-hoc di Tukey. Per tutte le analisi statistiche, la soglia di significatività sarà 0,05. Verranno inoltre prese in considerazione analisi di correlazione tra i dati di eye-tracking e i dati fMRI. I dati di eye-tracking ci permetteranno anche di eliminare i correlati neurali di attivazione legati agli ammiccamenti palpebrali.

   Dati comportamentali: i tempi di reazione (in ms) e la percentuale di risposte "corrette" saranno analizzati statisticamente (ANOVA, test post-hoc di Tuckey) con il gruppo di partecipanti (pazienti, controlli) come fattore entro i soggetti e il compito, valenza e livello di attivazione degli stimoli come fattori intersoggettivi.

3. Studio di correlazione dei dati I dati delle varie valutazioni (andatura, neuroimaging, cognitivo/emotivo) saranno valutati in relazione alle varie variabili cliniche (ad es. età, punteggi motori, ecc.) e variabili neuropsicologiche utilizzando analisi di correlazione. Lo studio correlativo dei punteggi neuropsicologici con biomarcatori strutturali e fisiologici può aiutare a identificare nuove modalità di discriminazione dei profili individuali dei soggetti MH pre-sintomatici.
4. Stima dei sottotipi di soggetti HD pre-sintomatici:

Verranno prese in considerazione altre analisi basate su metodi di classificazione statistica sulla base dei diversi dati acquisiti (dati funzionali, strutturali, connettività effettiva, dati sull'attività oculomotoria, ecc.) al fine di identificare caratteristiche o indici di caratteristiche che discriminano sottotipi di HD presintomatica soggetti.