HLA が最も一致する同種異系ウイルス特異的細胞傷害性 T リンパ球 (CTL) (CHALLAH)

患者は、選択基準で定義されている標準治療にもかかわらず持続性疾患がある場合、研究への参加のためにスクリーニングされる場合があります。 その段階で、利用可能な回線の検索が行われます。 ラインは、研究のためのレシピエントに必要のない CTL の使用に同意した HSCT ドナーから、または通常のドナーから生成されました。 すべてのドナーがスクリーニングされ、移植ドナーとして適格であると見なされました。 また、一般的な HLA タイプをカバーする目的で追加のラインを製造し、NMDP と相談して、どの HLA タイプが望ましいかを判断します。 追加のドナーは、移植ドナーセンターの医師によってスクリーニングされ、ラインが製造される前に適格と見なされなければなりません.

CTL ライン: 前述のように生成されたトリウイルス固有の CTL ラインを使用します。 トリウイルス特異的 CTL ラインの生成には、PBMC からのいくつかの異なるコンポーネントの生成が必要です。 CTL 株は、CMV、EBV、およびアデノウイルス抗原を提示する抗原提示細胞 (APC) による複数回の刺激と、インターロイキン-2 (IL-2) による増殖によって、ドナーの末梢血 T 細胞に由来します。 CMV特異的T細胞を刺激および拡大するために使用されるAPCは、患者の単核細胞およびBリンパ球に由来します。

トリウイルス特異的ＣＴＬ株を開始するために、ＰＢＭＣは、ＣＭＶの免疫優勢抗原であるｐｐ６５を発現するアデノウイルスベクター（Ａｄ５ｆ３５－ｐｐ６５）で形質導入される。 PBMC の単球画分は、CMV-pp65 ペプチド エピトープを発現し、PBMC の CMV 特異的 T 細胞画分に提示しましたが、アデノウイルス ベクターからのビリオンタンパク質は処理され、アデノウイルス特異的 T 細胞画分に提示されました。

トリウイルス特異的 T 細胞を拡大するために、Ad5f35-pp65 で形質導入した EBV 形質転換 B リンパ芽球様細胞株 (EBV-LCL) を使用しました。 この形質導入により、EBV-LCL は CMV-pp65 およびアデノウイルス ビリオン ペプチドを T 細胞に提示するだけでなく、内因的に発現した EBV 抗原を提示することができます。

EBV-LCL は、エプスタイン-バーウイルス (EBV) の臨床グレードの実験室株による感染によって PBMC-B リンパ球に由来します。 EBV-LCL を生成するには、約 5 x 10^6 PBMC、または 5 ～ 10 mL の血液が必要です。

CTL 培養期間の最後に、各ウイルスに特異的な T 細胞の頻度を、利用可能な場合は四量体試薬を使用して決定しました。 CTL の機能的抗原特異性をテストするために、Elispot アッセイで pp65 およびアデノウイルス ヘキソンと自家および同種異系 LCL の重複ペプチド ライブラリを使用し、Adhexon および CMVpp65 pepmix OR LCL で形質導入されていない、または形質導入されていない未修飾の PHA 芽球および LCL を使用して細胞毒性アッセイを行います。 Ad5f35-null および Ad5f35-pp65 で形質導入。 NIH では、Melenhorst 博士と Barrett 博士が、抗原提示細胞 (T-APC) として活性化 T 細胞の広範なパネルを使用して、ウイルス抗原特異的 T 細胞を調べるアロ反応性を予測するアッセイを開発しています。 これらの行にはコンポーネント番号のみがラベル付けされ、サブジェクト ID はありません。

CTL株は、同一性、表現型、および無菌性についてもチェックされ、SOPに従って投与前に凍結保存されます。 CTL を患者に投与するためのリリース基準には、生存率 >70%、少なくとも 7 日間の細菌および真菌の培養陰性、5EU/ml 以下のエンドトキシン検査、マイコプラズマ陰性の結果、<2% CD19 陽性 B 細胞、 <2% CD14 陽性単球 (または樹状細胞が刺激因子として使用された場合は <2% CD83 陽性細胞) および HLA 同一性。

一致する CTL ラインが利用できない: 一致するラインが利用できない場合、患者は登録され、アプローチの実現可能性が評価され、最終的な結果も収集されます。

CTLラインは利用可能だが患者の状態が変化：スクリーニングと注入の間で変化する患者の臨床経過にはCTLが与えられず、最終的な結果が追跡されます。

生存データは、移植センターに定期的な移植必須データフォームを提出するよう依頼することによって収集されます。このフォームは、100 日および 1 年で幹細胞移植結果データベースに送信され、生存状態およびその他の結果測定に関するデータが含まれます。

CTL系統の選択基準：一般に、最も多くのHLA遺伝子座に一致する系統が選択される。 対立遺伝子レベルでのマッチングが優先されますが、抗原レベルまたは HLA-A および HLA-B が受け入れられます。 ただし、感染の種類とそのウイルスに対する株の活動も考慮されます。 例えば、アデノウイルス感染症の患者の場合、2 つの遺伝子座で一致するが、それらの抗原を介して媒介されるアデノウイルスを認識する系統は、3 つの遺伝子座で一致するがアデノウイルスに対する活性が実証されていない系統よりも好ましいでしょう。 プロトコルの議長は、各センターの主任研究者と各ケースについて話し合い、各患者に最適な CTL ラインを決定します。 複数のラインが一致し、追加の注入をカバーするのに十分な細胞がない場合、追加の注入が保証される場合に備えて、2 番目の CTL ラインが予約されます。 部分奏効の患者は、追加の投与を受ける資格があります。

前投薬：患者は、ベナドリル1mg / kg（最大50mg）IVおよびタイレノール10mg / kg（最大650mg）POで前投薬されます。

患者は、血液製剤の投与に関する施設の基準に従って監視され、少なくとも以下に従って監視されます。バイタル サインは、点滴終了時、30 分後および 60 分後にモニタリングする必要があります。

支持療法：患者は、血液成分または抗生物質を含む急性または慢性毒性の支持療法、および必要に応じて他の介入を受けます。

患者が部分奏功した場合、最低 2 週間間隔で最大 4 回の追加投与を受ける資格があり、その後のラインの適格基準を満たしている場合。 これらの用量は、十分なバイアルが利用可能な場合は元の注入ラインから取得されますが、元のラインに不十分な細胞がある場合は別のラインから取得される場合があります。

フォローアップ評価: フォローアップ訪問のタイミングは、CTL 注入の日付に基づいています。 患者が複数回の CTL 投与を受けている場合、スケジュールは最初に再度リセットされるため、フォローアップは最後の CTL 投与に関連します。

フォローアップは、7 日、14 日、21 日、28 日、42 日、90 日、180 日、および 365 日で行われます (8 週目までは +/- 2 日、90 日目は +/- 14 日、登録後 6 か月および 12 か月間は 120 日、および +/- 28 日..)

以下の評価は、以下で「 * 」で識別されない限り、標準治療と見なされます。

輸液前： 1. 身長と体重を含む病歴と身体検査 2. EBV、アデノウイルス、CMV のウイルス量 3. 該当する場合は疾患部位の生検 4. 該当する場合は画像検査 5. 評価を含む完全な急性 GVHD 病期分類および等級付け情報発疹、下痢、吐き気/嘔吐、体重および肝機能検査 6. CBC と血小板数 7. 肝機能検査 (ビリルビン、アルカリホスファターゼ、AST、ALT) およびクレアチニン 8. タクロリムス/シクロスポリンレベル 9. * のサンプル実験室での研究

注入後: 1. CMV、EBV、アデノウイルスのウイルス量を毎週、1、2、3、4、および 6 週間、ならびに 3、6、および 12 か月。 2. 発疹、下痢、吐き気/嘔吐、体重および肝機能検査の評価を含む急性 GVHD 病期分類および等級付け情報を 45 日目まで毎週 3. 慢性 GVHD 評価 (存在する場合) 3、6、9、および 12 か月 4. CBC 1、2、3、4、および 6 週間での差分および血小板数。 5. 24 時間以内の注入関連毒性と 30 日目まで毎週毒性評価、45 日目まで急性 GVHD 6. 42 日目まで毎週ステロイド投与、3、6、9 か月 7. 28 および 90 8. 42 日目までおよび 3、6、12 か月での感染

補助的な実験室研究には以下が含まれます: 1) ELISPOT アッセイまたは四量体アッセイによって測定される CTL レベルに基づくウイルス特異的免疫の評価。 2) 非共有抗原に対する PCR に基づく注入 T 細胞の持続性

患者の死亡の報告: 受信者の死亡情報は、患者の死亡を知ってから 24 時間以内に Web ベースのデータ入力システムに入力する必要があります。 その時点で死因が不明な場合は、その時点で記録する必要はありません。 ただし、死因が判明したら、フォームを更新する必要があります。

ドナーの評価: - 完全な病歴および身体検査 - CBC、血小板、分画 - 総タンパク質、アルブミン、総ビリルビン、アルカリホスファターゼ、ALT、AST、 - HIV-1 抗体、HIV-2 抗体、HIV NAT、HTLV-1/2抗体、HBs 抗原、HBc 抗体、HCV NAT、CMV 抗体、RPR、ウエストナイルウイルス NAT、およびシャーガス検査 - ABO および Rh タイピング - 評価が完了すると、移植医師はレシピエントとドナーの医療記録に検査結果を記録します。評価され、ドナーは受け入れられます。